
原子間力顕微鏡(AFM)または走査力顕微鏡(SFM)は、非常に高解像度の走査プローブ顕微鏡(SPM)の一種であり、ナノメートルの数分の1のオーダーの解像度が実証されており、光学回折限界よりも1000倍以上優れています。

原子間力顕微鏡[ 1 ](AFM)は、機械プローブで表面を「触る」または「感じる」ことで情報を収集します。圧電素子は、(電子的な)指令に基づいて微小かつ正確な動きを可能にし、精密なスキャンを実現します。名前とは裏腹に、原子間力顕微鏡は核力を使用していません。
AFMには、力測定、地形画像化、操作という3つの主要な機能があります。
力測定において、AFMはプローブと試料間の距離の関数として、両者の間に働く力を測定できます。これは、力分光法に応用でき、試料のヤング率(剛性の指標)などの機械的特性を測定することができます。
画像化においては、試料がプローブに加える力に対するプローブの反応を利用して、試料表面の三次元形状(地形)を高解像度で画像化することができる。これは、プローブ先端に対する試料の位置をラスタースキャンし、プローブと試料の相互作用が一定となるプローブの高さを記録することによって実現される。表面地形は一般的に擬似カラープロットとして表示される。
1986年にBinnig、Quate、Gerberによって原子間力顕微鏡に関する最初の論文が発表され、原子分解能を達成できる可能性が推測されましたが、1993年にOhnesorgeとBinnigによって常温(液体)条件下での欠陥やステップエッジの原子分解能が実証されるまでには、深刻な実験上の課題を克服する必要がありました。[ 2 ]シリコン7×7表面の真の原子分解能は、Giessiblによって示されるまでもう少し待たなければなりませんでした。[ 3 ]原子以下の分解能(つまり、単一原子の電子密度内の構造の詳細を分解する能力)もAFMによって達成されています。
操作においては、探針と試料間の力を利用して、試料の特性を制御された方法で変化させることも可能である。その例としては、原子操作、走査プローブリソグラフィー、細胞の局所刺激などが挙げられる。
地形画像の取得と同時に、試料の他の特性を局所的に測定し、画像として表示することもできます。多くの場合、同様に高解像度です。このような特性の例としては、剛性や接着強度などの機械的特性、導電率や表面電位などの電気的特性が挙げられます。[ 4 ]実際、SPM技術の大部分は、この方式を使用するAFMの拡張です。[ 5 ]
原子間力顕微鏡と、光学顕微鏡や電子顕微鏡といった競合技術との主な違いは、AFMはレンズやビーム照射を使用しない点にある。そのため、回折や収差による空間分解能の制限を受けず、ビームを誘導するための空間(真空状態を作るなど)の準備や試料の染色も不要である。
走査型顕微鏡には、SPM(AFM、走査型トンネル顕微鏡(STM)、近接場走査型光学顕微鏡(SNOM/NSOM)、STED顕微鏡(STED)、走査型電子顕微鏡、電気化学AFM(EC-AFM)など)を含むいくつかの種類があります。SNOMとSTEDは可視光、赤外線、あるいはテラヘルツ光を用いて試料を照射しますが、その解像度は回折限界によって制限されません。
図3はAFMを示しており、通常は以下の特徴から構成されています。[ 6 ]括弧内の数字は図3の番号付き特徴に対応しています。座標方向は座標系(0)によって定義されます。

小型のバネ状のカンチレバー(1)は支持部(2)によって支持される。オプションとして、圧電素子(通常はセラミック材料製)(3)がカンチレバー(1)を振動させる。鋭利な先端部(4)はカンチレバー(1)の自由端に固定されている。検出器(5)はカンチレバー(1)のたわみと動きを記録する。試料(6)は試料ステージ(8)に取り付けられる。xyz駆動装置(7)により、試料(6)と試料ステージ(8)を先端部(4)を基準としてx、y、z方向に移動させることができる。図3では駆動装置が試料に取り付けられている様子を示しているが、試料と先端部の相対的な変位を制御する必要があるため、駆動装置を先端部に取り付けることも、それぞれに独立した駆動装置を取り付けることも可能である。コントローラとプロッタは図3には示されていない。
上述の構成によれば、原子スケールの現象である探針と試料間の相互作用は、マクロスケールの現象であるカンチレバーの動きの変化に変換されます。探針と試料間の相互作用を定量化するために、カンチレバーの動きのさまざまな側面を用いることができます。最も一般的なのは、たわみの値、カンチレバーに加わる振動の振幅、またはカンチレバーの共振周波数のシフトです(「イメージングモード」の項を参照)。
AFMの検出器(5)は、カンチレバーのたわみ(平衡位置からの変位)を測定し、それを電気信号に変換する。この信号の強度は、カンチレバーの変位に比例する。
検出には、干渉法、光てこ法、圧電法、STMベースの検出器など、さまざまな方法が使用できます(「AFMカンチレバーたわみ測定」の項を参照)。
このセクションは特に§ コンタクトモードでの画像撮影に適用されます。他の画像撮影モードでも同様の手順ですが、「偏向」を適切なフィードバック変数に置き換える必要があります。
AFMを用いて試料を画像化する場合、プローブ先端を試料に接触させ、試料をx-yグリッドに沿ってラスタースキャンします。一般的には、スキャン中にプローブと試料間の力を一定に保つために、電子フィードバックループが使用されます。このフィードバックループは、カンチレバーのたわみを入力とし、プローブ支持部(図3の2)と試料支持部(図3の8)間のz軸方向の距離を出力します。プローブ先端が試料に接触したまま、試料がx-y平面でスキャンされている限り、試料の高さの変化によってカンチレバーのたわみが変化します。フィードバックは、たわみがユーザー定義値(設定値)に戻るようにプローブ支持部の高さを調整します。適切に調整されたフィードバックループは、スキャン動作中に支持部と試料間の距離を連続的に調整し、たわみがほぼ一定に保たれるようにします。この場合、フィードバック出力は試料表面の形状とわずかな誤差の範囲内で一致します。
従来は、サンプルとプローブ支持部間の距離を一定に保ち、フィードバック(サーボ機構)で制御しない別の操作方法が用いられていました。このモードは一般的に「定高モード」と呼ばれ、カンチレバーのたわみがサンプルのx-y位置の関数として記録されます。チップがサンプルに接触している限り、たわみは表面形状に対応します。この方法は、チップとサンプル間の力が制御されないため、チップやサンプルを損傷するほどの大きな力が発生する可能性があるため、現在ではあまり使用されていません。しかし、フィードバックを用いた定力モードでスキャンする場合でも、たわみを記録することは一般的です。これにより、フィードバックの小さなトラッキング誤差が明らかになり、フィードバックでは補正できなかった特徴が明らかになる場合もあります。
試料の高さやカンチレバーのたわみといったAFM信号は、x-yスキャン中にコンピュータに記録されます。これらの信号は擬似カラー画像としてプロットされ、各ピクセルは試料上のx-y位置を表し、色は記録された信号を表します。

AFMは1985年にIBMの科学者によって発明されました。[ 7 ] AFMの前身である走査型トンネル顕微鏡(STM)は、 1980年代初頭にIBMチューリッヒ研究所のゲルト・ビニッヒとハインリッヒ・ローラーによって開発され、この開発により彼らは1986年のノーベル物理学賞を受賞しました。ビニッヒは[ 6 ]原子間力顕微鏡を発明し、最初の実験的実装は1986年にビニッヒ、クアテ、ゲルバーによって行われました。 [ 8 ]
市販された最初の原子間力顕微鏡は1989年に発表された。AFMは、ナノスケールでの物質の画像化、測定、操作を行うための最先端ツールの1つである。
AFMは、固体物理学、半導体科学技術、分子工学、高分子化学および物理学、表面化学、分子生物学、細胞生物学、医学など、自然科学の幅広い分野における問題に応用されてきた。
固体物理学の分野における応用例としては、(a)表面上の原子の識別、(b)特定の原子とその近傍の原子との相互作用の評価、(c)原子操作による原子配列の変化から生じる物理的性質の変化の研究などが挙げられる。
分子生物学において、AFMはタンパク質複合体や集合体の構造および機械的特性を研究するために使用できる。例えば、AFMは微小管の画像化やその剛性の測定に用いられてきた。
細胞生物学において、AFMは細胞の硬さに基づいて癌細胞と正常細胞を区別したり、競合培養系において特定の細胞とその隣接細胞との相互作用を評価したりするために使用できる。また、AFMは細胞に圧痕を付けて、細胞膜や細胞壁の硬さや形状をどのように制御しているかを研究するためにも使用できる。
バリエーションによっては、導電性カンチレバーを使用して電位をスキャンすることもできます。より高度なバージョンでは、チップに電流を流して下地表面の電気伝導率や輸送を調べることができますが、これは困難な作業であり、一貫したデータを報告している研究グループはほとんどありません(2004 年現在)。[ 9 ]導電性原子間力顕微鏡(C-AFM) やケルビンプローブ力顕微鏡(KPFM) などの AFM 技術は、固体電池の研究において、局所的な伝導率の変化、界面電位の変化、ナノスケールでの劣化メカニズムを分析するためにますます使用されています。
AFMは、先端に鋭利なチップ(プローブ)が付いたカンチレバーで構成されており、このチップを使って試料表面を走査します。カンチレバーは通常、シリコンまたは窒化シリコンでできており、先端の曲率半径はナノメートルオーダーです。チップを試料表面に近づけると、チップと試料の間に力が働き、フックの法則に従ってカンチレバーがたわみます。[ 10 ]状況に応じて、AFMで測定される力には、機械的接触力、ファンデルワールス力、毛細管力、化学結合力、静電力、磁力(磁気力顕微鏡、MFMを参照)、カシミール力、溶媒和力などがあります。力に加えて、特殊なタイプのプローブを使用することで、追加の量を同時に測定することもできます(走査型熱顕微鏡、走査型ジュール膨張顕微鏡、光熱マイクロ分光法などを参照)。
AFMは、用途に応じてさまざまなモードで動作させることができます。一般的に、可能なイメージングモードは、静的(接触とも呼ばれる)モードと、カンチレバーが特定の周波数で振動または揺動するさまざまな動的(非接触または「タッピング」)モードに分けられます。[ 8 ]
AFMの動作は、探針の動きの性質に応じて、通常3つのモードのいずれかに分類されます。接触モード(静的モードとも呼ばれ、他の2つのモードは動的モードと呼ばれます)、タッピングモード(断続接触、ACモード、振動モードとも呼ばれ、検出機構の後に振幅変調AFMとも呼ばれます)、および非接触モード(これも検出機構の後に周波数変調AFMとも呼ばれます)。
名称は異なるものの、振幅変調AFMと周波数変調AFMのどちらにおいても、設定によっては反発接触が発生する場合もあれば、回避される場合もある。
接触モードでは、探針を試料表面に沿って「引きずり」、カンチレバーのたわみを直接測定するか、より一般的には、カンチレバーを一定位置に保つために必要なフィードバック信号を用いて表面の輪郭を測定します。静的信号の測定はノイズやドリフトの影響を受けやすいため、相互作用力を低く抑えつつ十分なたわみ信号を得るために、剛性の低いカンチレバー(すなわち、ばね定数kの低いカンチレバー)が使用されます。試料表面付近では、引力が非常に強くなり、探針が表面に「スナップイン」してしまうことがあります。そのため、接触モードAFMは、ほとんどの場合、全体的な力が反発力となる深さ、つまり固体表面としっかりと「接触」した状態で行われます。

常温常圧下では、ほとんどのサンプルに液面層が形成されます。そのため、プローブ先端が表面に付着しないようにしながら、短距離の力が検出できるほどサンプルにプローブ先端を十分に近づけることは、常温常圧下でのコンタクトモードでは大きな問題となります。この問題を回避するために、動的コンタクトモード(断続コンタクト、ACモード、タッピングモードとも呼ばれる)が開発されました。[ 12 ]現在では、タッピングモードは、常温常圧下または液体中で動作する場合に最もよく使用されるAFMモードです。
タッピングモードでは、カンチレバーは共振周波数付近で上下に振動するように駆動されます。この振動は、一般的にカンチレバーホルダー内の小型圧電素子によって実現されますが、他の方法としては、交流磁場(磁気カンチレバーの場合)、圧電カンチレバー、または変調レーザービームによる周期的な加熱などが挙げられます。この振動の振幅は通常、数nmから200nmまで変化します 。タッピングモードでは、駆動信号の周波数と振幅は一定に保たれるため、ドリフトや表面との相互作用がない限り、カンチレバーの振動振幅は一定になります。先端が表面に近づくと、カンチレバーに作用する力(ファンデルワールス力、双極子-双極子相互作用、静電力など)の相互作用により、先端がサンプルに近づくにつれてカンチレバーの振動振幅が変化します(通常は減少します)。この振幅は、サンプル上のカンチレバーの高さを制御する電子サーボに入力されるパラメータとして使用されます。サーボ機構は、カンチレバーがサンプル上を走査される際に、設定されたカンチレバー振動振幅を維持するように高さを調整します。したがって、タッピングAFM画像は、チップとサンプル表面との断続的な接触の力を画像化することによって生成されます。[ 13 ]
振動の接触部分で加えられるピーク力は、通常コンタクトモードで使用される力よりもはるかに高くなる可能性がありますが、タッピングモードは一般的に、コンタクトモードに比べて表面やチップへの損傷を軽減します。これは、加えられる力の持続時間が短いことと、タッピングモードではコンタクトモードに比べてチップとサンプル間の横方向の力が著しく低いことによって説明できます。タッピングモードイメージングは、液体媒体中の支持脂質二重層や吸着した単一ポリマー分子(例えば、 合成ポリ電解質の0.4 nm厚の鎖)の可視化にも十分穏やかです。適切なスキャンパラメータを使用すれば、単一分子のコンフォメーションは何時間も変化せず、単一分子モーターでさえ移動中にイメージングできます。[ 11 ]
タッピングモードで動作させる場合、駆動信号に対するカンチレバーの振動位相も記録できます。この信号チャネルには、各振動サイクルでカンチレバーが消費するエネルギーに関する情報が含まれています。剛性の異なる領域や接着特性の異なる領域を含むサンプルでは、地形画像では見えないコントラストがこのチャネルに現れることがあります。しかし、位相画像からサンプルの材料特性を定量的に抽出することは、多くの場合困難です。
非接触原子間力顕微鏡モードでは、カンチレバーの先端はサンプル表面に接触しません。カンチレバーは、共振周波数(周波数変調)またはそのすぐ上の周波数(振幅変調)で振動し、振動の振幅は通常、数ナノメートル(<10 nm)から数ピコメートルまでです。[ 14 ]表面から 1 nm ~ 10 nm 上で最も強いファンデルワールス力、または表面より上に伸びるその他の長距離力は、カンチレバーの共振周波数を低下させるように作用します。この共振周波数の低下とフィードバック ループ システムを組み合わせることで、平均先端とサンプル間の距離を調整し、一定の振動振幅または周波数を維持します。各 (x,y) データ ポイントで先端とサンプル間の距離を測定することで、スキャン ソフトウェアはサンプル表面の地形画像を構築できます。
非接触モードのAFMは、接触AFMで多数のスキャンを行った後に時折見られるチップやサンプルの劣化の影響を受けません。このため、非接触AFMは、生物サンプルや有機薄膜などの軟質サンプルの測定において、接触AFMよりも好ましいと言えます。硬質サンプルの場合、接触画像と非接触画像は同じように見えることがあります。しかし、硬質サンプルの表面に数層の吸着液が存在する場合、画像はかなり異なって見えることがあります。接触モードで動作するAFMは液体層を貫通して下の表面を画像化しますが、非接触モードではAFMは吸着液層の上で振動して液体と表面の両方を画像化します。
動的モード動作の方式には、位相同期ループを使用してカンチレバーの共振周波数を追跡する周波数変調と、サーボループを使用してカンチレバーの励起を定義された振幅に維持する、より一般的な振幅変調があります。周波数変調では、振動周波数の変化から、チップとサンプルの相互作用に関する情報が得られます。周波数は非常に高い感度で測定できるため、周波数変調モードでは非常に剛性の高いカンチレバーを使用できます。剛性の高いカンチレバーは表面のすぐ近くで安定性を提供し、その結果、この技術は超高真空条件下で真の原子分解能を提供する最初のAFM技術となりました。[ 15 ]
振幅変調では、振動の振幅または位相の変化がイメージングのためのフィードバック信号となります。振幅変調では、振動の位相の変化を利用して、表面上の異なる種類の材料を識別することができます。振幅変調は、非接触モードまたは断続接触モードのいずれでも動作可能です。動的接触モードでは、カンチレバーを振動させることで、カンチレバー先端と試料表面との間の距離が変調されます。
振幅変調は、超高真空環境下で非常に剛性の高いカンチレバーと小さな振幅を用いることで、非接触領域において原子分解能での画像化にも利用されている。
画像形成とは、走査しながら測定変数(制御信号の強度)を各x-y座標に記録し、プローブ先端のx-y位置を変化させることでカラーマッピングを生成するプロット手法である。カラーマッピングは、各座標に対応する測定値を示す。画像は、値の強度を色相として表現する。通常、値の強度と色相の対応関係は、画像に付随する説明文にカラースケールとして示される。
AFMの画像形成の動作モードは、検出器から出力される信号強度を維持するために、チップと試料間の距離を維持するzフィードバックループ(図示せず)を使用するかどうかという観点から、一般的に2つのグループに分類されます。1つ目は(zフィードバックループを使用する)もので、「定数XXモード」(XXはzフィードバックループによって維持されるもの)と呼ばれます。
地形画像形成モードは、上述の「定数XXモード」に基づいており、zフィードバックループは、周波数、振動、位相のいずれかを一定に保つ制御信号を出力することによって、プローブとサンプル間の相対距離を制御します。これは通常、カンチレバーの動きに対応します(たとえば、Z圧電素子に電圧を印加すると、サンプルがZ方向に上下に移動します)。
プローブと試料間の距離が原子間力検出可能な範囲に達すると、カンチレバーが固有振動数(f₀ )で励振されたときに、カンチレバーの共振周波数fが元の共振周波数からずれることがあります。言い換えれば、原子間力検出可能な範囲では、周波数シフト(df = f – f₀)も観測されます。プローブと試料間の距離が非接触領域にある場合、プローブと試料間の距離が小さくなるにつれて、周波数シフトは負の方向に増加します。
試料に凹凸がある場合、試料をx-y方向に走査しながら(z方向の高さ調整は行わずに)、探針先端と試料との距離は凹凸に応じて変化します。その結果、周波数シフトが生じます。試料表面をx-y方向にラスタースキャンして得られた周波数値を、各測定点のx-y座標に対してプロットした画像を、定高画像と呼びます。
一方、試料表面をx-y方向にラスタースキャンしながら、負帰還(zフィードバックループを使用)を用いてプローブをz方向に上下に移動させることで(図5の(3)参照)、dfを一定に保つことができる。負帰還量(プローブのz方向の上下移動距離)を各測定点のx-y座標に対してプロットした画像が地形画像である。言い換えれば、地形画像はdfが一定になるように制御されたプローブ先端の軌跡であり、dfの一定高さ面のプロットと考えることもできる。
したがって、AFMの地形画像は表面の形態そのものを正確に表しているわけではなく、実際にはプローブと試料間の結合次数に影響を受けた画像であるが、AFMの地形画像は走査型トンネル顕微鏡の地形画像よりも表面の地理的な形状をより反映していると考えられている。
イメージングに加えて、AFM は力分光法にも使用できます。これは、チップとサンプルの間のギャップの関数として、チップとサンプルの相互作用力を直接測定するものです。この測定結果は、力-距離曲線と呼ばれます。この方法では、圧電変位の関数としてカンチレバーのたわみを監視すると、AFM チップが表面に向かって伸びたり、表面から引き戻されたりします。これらの測定は、ナノスケールの接触、原子結合、ファンデルワールス力、カシミール力、液体中の溶解力、および単一分子の伸張力と破断力を測定するために使用されてきました。[ 16 ] AFM はまた、水環境において、基板に吸着したポリマーによる分散力を測定するためにも使用されています。[ 17 ]数ピコニュートンのオーダーの力は、0.1 ナノメートルよりも優れた垂直距離分解能で日常的に測定できます。力分光法は、静的モードまたは動的モードのいずれかで実行できます。動的モードでは、静的たわみに加えて、カンチレバーの振動に関する情報も監視されます。[ 18 ]
この手法の問題点としては、探針と試料間の距離を直接測定できないこと、および一般的に低剛性のカンチレバーが必要であり、カンチレバーが表面に「スナップ」してしまう傾向があることが挙げられる。これらの問題は克服できないものではない。探針と試料間の距離を直接測定するAFMが開発されている。[ 19 ] スナップインは、液体中で測定するか、より剛性の高いカンチレバーを使用することで軽減できるが、後者の場合はより高感度のたわみセンサーが必要となる。探針に小さなディザを加えることで、結合の剛性(力勾配)も測定できる。[ 20 ]
力分光法は、生体材料(組織や細胞など)の機械的特性を測定するために生物物理学で使用され[ 21 ] [ 22 ] [ 23 ]、剛性トモグラフィーを使用してサンプルのバルクに埋め込まれた異なる剛性の構造を検出します。[ 24 ]別の応用例として、カンチレバーの先端に付着した材料と、自由または同じ材料で覆われた粒子の表面との間の相互作用力を測定する方法があります。接着力分布曲線から、力の平均値が導出されます。これにより、材料で覆われているか否かにかかわらず、粒子の表面の地図を作成することができました。[ 25 ] AFMは、タンパク質の機械的展開にも使用されています。[ 26 ]このような実験では、適切なモデル[ 27 ]を使用した平均展開力の分析により、タンパク質の展開速度と自由エネルギープロファイルパラメータに関する情報が得られます。
AFMは、さまざまな表面上の原子や構造を画像化するために使用できます。チップの先端にある原子は、各原子と化学結合の形成を開始する際に、下地表面上の個々の原子を「感知」します。これらの化学相互作用はチップの振動周波数をわずかに変化させるため、検出してマッピングすることができます。この原理は、これらの原子の指紋を密度汎関数理論(DFT)シミュレーションから得られた値と比較することにより、合金表面上のシリコン、スズ、鉛の原子を区別するために使用されました。[ 28 ]
サンプル中に存在すると予想される各タイプの原子について相互作用力を正確に測定し、DFTシミュレーションによって得られた力と比較する必要がある。チップはシリコン原子と最も強く相互作用し、スズ原子と鉛原子とはそれぞれ24%と41%弱い相互作用を示したことがわかった。この情報を用いて、マトリックス中の各タイプの原子をチップとして識別することができた。[ 28 ]
AFMプローブは、ホルダーから突き出たカンチレバーの自由回転端に鋭利な先端部を備えています。[ 29 ]カンチレバーの寸法はマイクロメートル単位です。先端の半径は通常、数ナノメートルから数十ナノメートルのスケールです。(軟質材料の圧痕測定用プローブなど、先端半径がはるかに大きい特殊なプローブも存在します。)ホルダーチップとも呼ばれるカンチレバーホルダーは、多くの場合1.6 mm x 3.4 mmのサイズで、オペレーターがピンセットでAFMカンチレバー/プローブアセンブリを保持し、原子間力顕微鏡の走査ヘッド上の対応するホルダークリップに取り付けることができます。
この装置は一般的に「AFMプローブ」と呼ばれますが、「AFMチップ」や「カンチレバー」(装置全体の名称として、個々の部品名を用いる場合)など、他の名称もあります。AFMプローブは、SPMプローブの一種です。
AFMプローブはMEMS技術を用いて製造されます。使用されるAFMプローブのほとんどはシリコン(Si)製ですが、ホウケイ酸ガラスや窒化シリコンも使用されています。AFMプローブは消耗品とみなされており、先端が摩耗したり汚染されたり、カンチレバーが破損したりすると交換されることがよくあります。最も特殊なカンチレバー/プローブの組み合わせでは、カンチレバー1本あたり数十ドルから数百ドルの費用がかかる場合があります。
この装置を使用するには、探針を測定対象物の表面に非常に近づけ、探針と表面との相互作用によってカンチレバーがたわむようにします。AFMはこのたわみを測定するように設計されています。2次元表面上の多数の点でたわみを測定することで、相互作用の空間マップを作成できます。
検出できる相互作用の種類はいくつかあります。調査対象の相互作用に応じて、AFM プローブの先端の表面をコーティングで修飾する必要があります。使用されるコーティングには、生体分子の共有結合と表面との相互作用の検出のための金[ 30 ] 、耐摩耗性を高めるためのダイヤモンド[ 31 ]、調査対象表面の磁気特性を検出するための磁性コーティング[ 32 ]などがあります。高解像度の磁気イメージングを実現する別の方法として、プローブにマイクロ SQUID を装備する方法があります。AFM チップはシリコン マイクロ マシニングを使用して製造され、マイクロ SQUID ループの正確な位置決めは電子ビーム リソグラフィーを使用して行われます[ 33 ] 。導電性プローブの先端に量子ドットを追加で取り付けると、高い横方向解像度での表面電位イメージング、走査型量子ドット顕微鏡が可能になります[ 34 ]。
カンチレバーの表面を改質することも可能です。これらのコーティングは主に、カンチレバーの反射率を高め、たわみ信号を改善するために施されます。
探針と試料間の力は、探針の形状に大きく依存する。近年、探針のパラメータの関数として力を記述するための様々な研究が行われてきた。
探針と試料の間に働く様々な力の中でも、空気中および液体中における水メニスカス力は特に興味深い。その他にも、クーロン力、ファンデルワールス力、二重層相互作用、溶媒和力、水和力、疎水性力など、様々な力を考慮する必要がある。
空気中でのAFM測定において、水のメニスカス力は非常に興味深い現象です。空気中での測定では、周囲の湿度によって、探針と試料の間に薄い水の層が形成されます。その結果生じる毛細管力は、探針を表面に引き寄せる強い引力を生み出します。実際、有限湿度の空気中で探針と試料の間で測定される接着力は、通常、毛細管力が支配的です。そのため、探針を表面から引き離すのは困難です。多くのポリマーや特に生体材料を含む軟質試料の場合、強い接着毛細管力によって、接触モードでのイメージング時に試料の劣化や破壊が生じます。歴史的に、これらの問題は、空気中での動的イメージング(例えば「タッピングモード」)の開発における重要な動機となりました。空気中でのタッピングモードイメージング中も、毛細管ブリッジは形成されます。しかし、適切なイメージング条件では、カンチレバーの振幅と位相対距離曲線の解析から推測できるように、表面に垂直なカンチレバーの各振動サイクルで毛細管ブリッジが形成され、破壊されます。[ 35 ]その結果、破壊的なせん断力が大幅に低減され、柔らかいサンプルを調査することができる。
平衡毛細管力を定量化するために、圧力に関するラプラス方程式から始める必要がある。

ここで、 γ Lは表面エネルギーであり、r 0とr 1は図で定義されている。
圧力は、
ここで、θは先端の表面と液体の表面との間の角度であり、 hは周囲の液体とミニスカスの頂部との間の高さの差である。
2つの表面を引き寄せる力は
同じ式は、相対湿度の関数としても計算できる。
Gao [ 36 ] は、さまざまな先端形状の計算式を算出しました。例えば、円錐形の先端では、球形の先端に比べて力が 20% 減少します。
これらの力を計算する際には、濡れた面が乾いた面上にある場合と、濡れた面が濡れた面上にある場合とを区別する必要がある。
球状の先端の場合、力は次のようになります。
ここで、θは乾燥球の接触角、 φは浸漬角であり、図に示すとおりである。
円錐形の先端の場合、式は次のようになります。
ここで、δは半円錐角であり、r 0とhはメニスカス形状のパラメータである。

カンチレバーのたわみ測定で最も一般的な方法は、ビーム偏向法です。この方法では、固体ダイオードからのレーザー光がカンチレバーの背面で反射され、近接した2つのフォトダイオードからなる位置検出器(PSD)によって収集されます。その出力信号は差動増幅器によって収集されます。 カンチレバーの角度変位によって、一方のフォトダイオードが他方のフォトダイオードよりも多くの光を収集し、出力信号(フォトダイオード信号の差をそれらの合計で正規化したもの)が生成されます。この出力信号はカンチレバーのたわみに比例します。ビーム偏向法の感度は非常に高く、適切に設計されたシステムでは、10 fm Hz − 1 ⁄ 2程度のノイズフロアを日常的に得ることができます。この方法は「光てこ法」と呼ばれることもありますが、ビーム経路を長くしても信号は増幅されません。光路が長くなると、フォトダイオード上の反射スポットの移動量は増加するが、回折によってスポットの幅も同じだけ広がるため、一方のフォトダイオードからもう一方のフォトダイオードへ伝わる光パワーは同じになる。集束レーザースポットがカンチレバー上に完全に収まるほど小さい限り、「光学的レバレッジ」(検出器の出力信号をカンチレバーのたわみで割った値)はビーム集束光学系の開口数に反比例する。また、カンチレバーの長さにも反比例する。
ビーム偏向法が比較的普及しているのは、その高い感度と簡単な操作性、そしてカンチレバーに電気接点やその他の特別な処理が不要で、鋭利な一体型先端部を比較的安価に製造できるという事実によるものと考えられる。
ビーム偏向測定には、他にも多くの方法が存在する。
AFMスキャナは、印加電圧に比例して膨張および収縮する圧電材料で作られています。伸びるか縮むかは、印加電圧の極性によって決まります。従来、チップまたはサンプルは、x、y、z方向のスキャンを担当する3つの圧電結晶の「三脚」に取り付けられていました。[ 8 ] 1986年、AFMが発明されたのと同じ年に、STMで使用するための新しい圧電スキャナであるチューブスキャナが開発されました。 [ 42 ]後にチューブスキャナはAFMに組み込まれました。チューブスキャナは、1つの内部接点と4つの外部接点を持つ単一のチューブ圧電を使用して、サンプルをx、y、z方向に移動できます。元の三脚設計と比較したチューブスキャナの利点は、単一素子構造の高い共振周波数と低い共振周波数のアイソレーションステージの組み合わせにより、振動の遮断が優れていることです。欠点は、x - yの動きが不要なzの動きを引き起こし、歪みが生じる可能性があることです。 AFMスキャナーでよく用いられるもう一つの設計は、フレクシャステージです。これは、各軸にそれぞれ独立したピエゾ素子を使用し、フレクシャ機構を介してそれらを結合するものです。
スキャナは感度によって特徴付けられます。感度とは、圧電素子の動きと圧電素子の電圧の比、つまり印加電圧1ボルトあたりに圧電素子がどれだけ伸び縮みするかによって決まります。材料やサイズの違いにより、感度はスキャナごとに異なります。感度はスキャンサイズに対して非線形に変化します。圧電スキャナは、スキャンの開始時よりも終了時に感度が高くなります。このため、順方向スキャンと逆方向スキャンの動作が異なり、2つのスキャン方向の間にヒステリシスが発生します。 [ 43 ]これは、圧電素子の電極に非線形電圧を印加してスキャナを直線的に動かし、それに応じてスキャナを校正することで修正できます。[ 43 ]この方法の欠点の1つは、非線形の動きを修正するために必要な正確な非線形電圧が圧電素子の経年変化に伴って変化するため、再校正が必要になることです(下記参照)。この問題は、サンプルステージまたは圧電ステージに線形センサを追加して圧電素子の実際の動きを検出することで回避できます。理想的な動きからのずれはセンサーによって検出され、非線形なピエゾの動きを補正するためにピエゾ駆動信号に補正が適用されます。この設計は「クローズドループ」AFMとして知られています。センサーを搭載していないピエゾAFMは「オープンループ」AFMと呼ばれます。
圧電材料の感度は時間とともに指数関数的に低下します。そのため、感度の変化の大部分はスキャナの初期段階で発生します。圧電スキャナは工場出荷前に約48時間稼働するため、感度が大きく変化する可能性のある時期を過ぎています。スキャナが経年劣化すると、感度の変化は時間とともに小さくなり、スキャナの再校正が必要になることはほとんどなくなりますが、[ 44 ] [ 45 ]さまざまなメーカーのマニュアルでは、オープンループAFMの月1回から2ヶ月に1回の校正を推奨しています。

AFMは走査型電子顕微鏡(SEM)に比べていくつかの利点があります。試料の2次元投影または2次元画像を提供する電子顕微鏡とは異なり、AFMは3次元の表面プロファイルを提供します。さらに、AFMで観察される試料は、試料を不可逆的に変化または損傷させるような特別な処理(金属/炭素コーティングなど)を必要とせず、最終画像に帯電アーティファクトが発生することも通常ありません。電子顕微鏡は適切な動作のために高価な真空環境を必要としますが、ほとんどのAFMモードは、大気中または液体環境でも完全に機能します。これにより、生体高分子や生物を研究することが可能になります。原理的には、AFMはSEMよりも高い解像度を提供できます。超高真空(UHV)および最近では液体環境において、真の原子分解能が得られることが示されています。高解像度AFMは、走査型トンネル顕微鏡および透過型電子顕微鏡の解像度に匹敵します。 AFMは、蛍光顕微鏡や赤外分光法などのさまざまな光学顕微鏡や分光法技術と組み合わせることも可能で、走査型近接場光学顕微鏡、ナノFTIRを生み出し、その適用範囲をさらに拡大しています。AFMと光学機器を組み合わせた装置は、主に生物科学で応用されてきましたが、最近では太陽光発電[ 13 ]やエネルギー貯蔵研究[ 46 ] 、高分子科学[ 47 ] 、ナノテクノロジー[ 48 ] [ 49 ]、さらには医学研究[ 50 ]でも強い関心を集めています。
走査型電子顕微鏡(SEM)と比較した原子間力顕微鏡(AFM)の欠点は、1回の走査で得られる画像サイズが小さいことです。SEMは1回の走査で数平方ミリメートル程度の領域を数ミリメートル程度の被写界深度で画像化できますが、AFMでは最大走査領域が約150×150マイクロメートル、最大高さが10~20マイクロメートル程度しか画像化できません。AFMの走査領域サイズを改善する方法の1つは、ヤスデのデータストレージと同様の方法で平行プローブを使用することです。
AFM のスキャン速度も制限要因です。従来、AFM は SEM ほど高速に画像をスキャンできず、一般的なスキャンには数分かかりますが、SEM は比較的低品質ではあるものの、ほぼリアルタイムでスキャンできます。AFM イメージング中のスキャン速度が比較的遅いため、画像に熱ドリフトが発生することが多く[ 51 ] [ 52 ] [ 53 ]、 AFM は画像上の地形的特徴間の正確な距離を測定するのに適していません。しかし、顕微鏡のスキャン生産性を向上させるために、いくつかの高速動作設計[ 54 ] [ 55 ]が提案されており、その中には videoAFM と呼ばれるものも含まれています (videoAFM では、平均的な SEM よりも速いビデオ速度で、妥当な品質の画像が得られます)。熱ドリフトによって引き起こされる画像の歪みを排除するために、いくつかの方法が導入されています。[ 51 ] [ 52 ] [ 53 ]


AFM 画像は、圧電材料の非線形性、ヒステリシス[ 43 ]、クリープ、およびx、y、z軸間のクロストークによっても影響を受ける可能性があり、ソフトウェアによる補正やフィルタリングが必要になる場合があります。このようなフィルタリングによって、実際の地形の特徴が「平坦化」される可能性があります。しかし、最新の AFM は、リアルタイム補正ソフトウェア (たとえば、特徴指向スキャン[ 44 ] [ 51 ] ) またはクローズドループスキャナを使用しており、これらの問題を実質的に解消しています。一部の AFM では、(単一のチューブではなく) 分離された直交スキャナも使用しており、これもクロストークの問題の一部を排除するのに役立ちます。
他の画像処理技術と同様に、画像アーティファクトが発生する可能性があり、これは不適切なチップ、劣悪な操作環境、あるいは右図に示すようにサンプル自体によって引き起こされる可能性があります。これらの画像アーティファクトは避けられませんが、さまざまな方法でその発生と結果への影響を軽減できます。チップが粗すぎることによるアーティファクトは、たとえば、不適切な取り扱い、またはスキャン速度が速すぎたり、表面が不当に粗かったりしてチップが実際に摩耗することによるサンプルとの事実上の衝突によって引き起こされる可能性があります。
AFMプローブの特性上、通常は急峻な壁面や張り出し部を測定することはできません。しかし、特殊なカンチレバーとAFMを用いることで、プローブを上下方向だけでなく左右方向にも動かすことが可能となり(動的接触モードや非接触モードと同様)、側壁を測定することができます。ただし、その代償として、カンチレバーのコストが高くなり、横方向の解像度が低下し、アーティファクトも発生します。

ナノテクノロジーと生物学研究を統合する最新の取り組みは成功しており、ナノバイオメカニクスなどの分野を含め、将来に向けて大きな期待が寄せられています。[ 56 ]ナノ粒子は薬物送達の潜在的な媒体であるため、その有効性を最適化し、設計をどのように改善できるかについて、これらのナノ粒子に対する細胞の生物学的応答が継続的に調査されています。 [ 57 ] Pyrgiotakis らは、人工ナノ粒子を AFM チップに取り付けることで、 CeO 2および Fe 2 O 3人工ナノ粒子と細胞との相互作用を研究することができました。 [ 58 ]研究では、生物学的媒体中の生細胞の挙動に関するさらなる情報を得るために AFM が活用されています。リアルタイム原子間力分光法 (またはナノスコピー) および動的原子間力分光法は、ナノスケールで高解像度で生細胞および膜タンパク質とその動的挙動を研究するために使用されています。細胞のトポグラフィーと特性を画像化して情報を取得することで、細胞間相互作用や他のシグナル伝達分子(リガンドなど)との相互作用を通じて起こる化学プロセスやメカニズムについての洞察も得られました。EvansとCalderwoodは、単一細胞力顕微鏡を使用して、細胞接着力、結合速度論/動的結合強度、および細胞シグナル伝達などの化学プロセスにおけるその役割を研究しました。[ 59 ] Scheuring、Lévy、およびRigaudは、AFMを使用して光合成細菌の膜タンパク質の結晶構造を調べた研究をレビューしました。[ 60 ] Alsteenらは、AFMベースのナノスコピーを使用して、生きたマイコバクテリアと抗マイコバクテリア薬(特にイソニアジド、エチオナミド、エタンブトール、およびストレプトマイシン) との相互作用のリアルタイム分析を実行しました。 [ 61 ]これは、AFMを介して実行できる病原体と薬剤の相互作用のより詳細な分析の例です。
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