リボソーム

細胞生物学
動物細胞図
典型的な動物細胞の構成要素: 核小体 核 リボソーム（5 つのうちの 1 つの点） 小胞 粗面小胞体 ゴルジ体（またはゴルジ体） 細胞骨格 滑面小胞体 ミトコンドリア 液胞 細胞質（細胞小器官を含む液体。細胞質を構成する） リソソーム 中心体 細胞膜

リボソーム（/ ˈ r aɪ b ə z oʊ m , - s oʊ m /）は、すべての細胞の中に見られる高分子機械であり、生物学的タンパク質合成（メッセンジャーRNA翻訳）を実行します。リボソームは、メッセンジャーRNA分子のコドンで指定された順序でアミノ酸を結合し、ポリペプチド鎖を形成します。リボソームは、小さなリボソームサブユニットと大きなリボソームサブユニットという2つの主要な要素で構成されています。各サブユニットは、1つ以上のリボソームRNA分子と多くのリボソームタンパク質（rタンパク質）で構成されています。^{[1] [2] [3]リボソームと関連分子は、}翻訳装置としても知られています。

タンパク質中のアミノ酸の配列をコードするDNA配列は、メッセンジャー RNA (mRNA) 鎖に転写されます。リボソームはメッセンジャー RNA 分子に結合し、RNA のヌクレオチド配列を使用して、タンパク質の生成に必要なアミノ酸の配列を決定します。アミノ酸は、トランスファー RNA (tRNA) 分子によって選択され、リボソームに運ばれます。トランスファー RNA はリボソームに入り、アンチコドンステム ループを介してメッセンジャー RNA 鎖に結合します。メッセンジャー RNA 内の各コーディング トリプレット (コドン) には、アンチコドンが正確に一致する必要があり、成長中のポリペプチド鎖に組み込むための正しいアミノ酸を運ぶ固有のトランスファー RNA があります。タンパク質が生成されると、折りたたまれて機能的な 3 次元構造が生成されます。

リボソームはRNA とタンパク質の複合体から作られ、したがってリボ核タンパク質複合体です。原核生物では、各リボソームはサブユニットと呼ばれる小さい (30 S ) コンポーネントと大きい (50 S ) コンポーネントで構成され、サブユニットは互いに結合しています。

1. （30S）は主にデコード機能を持ち、mRNAにも結合する。
2. （50S）は主に触媒機能を持ち、アミノアシル化されたtRNAにも結合します。

タンパク質の構成要素からの合成は、開始、伸長、終結、リサイクルの4つの段階で行われます。すべてのmRNA分子の開始コドンはAUG配列です。終止コドンはUAA、UAG、UGAのいずれかです。これらのコドンを認識するtRNA分子は存在しないため、リボソームは翻訳が完了したことを認識します。^{[4]リボソームがmRNA分子の読み取りを終えると、2つのサブユニットは分離し、通常は分解されますが、再利用できます。リボソームは}酵素の一種で、アミノ酸を結合する触媒ペプチジルトランスフェラーゼ活性がリボソームRNAによって実行されるため、リボザイムと呼ばれます。 ^[5]

真核細胞では、リボソームは粗面小胞体を構成する細胞内膜と関連していることが多い。

細菌、古細菌、真核生物（3ドメインシステム）のリボソームは驚くほど似ており、共通の起源の証拠です。それらはサイズ、配列、構造、およびタンパク質とRNAの比率が異なります。構造の違いにより、一部の抗生物質は細菌のリボソームを阻害して細菌を殺し、ヒトのリボソームには影響を与えません。すべての種において、複数のリボソームが一度に単一のmRNA鎖に沿って移動し（ポリソームとして）、それぞれが特定の配列を「読み取り」、対応するタンパク質分子を生成します。

真核細胞のミトコンドリアリボソームは他のリボソームとは異なります。ミトコンドリアが共生細菌として進化した起源を反映して、機能的には細菌のリボソームに似ています。^{[6] [7]}

リボソームは、ルーマニア系アメリカ人の細胞生物学者ジョージ・エミル・パラデが1950年代半ばに電子顕微鏡で高密度粒子または顆粒として初めて観察しました。^{[8]当初は、その顆粒構造から}パラデ顆粒 と呼ばれていました 。「リボソーム」という用語は、1958年にハワード・M・ディンツィスによって提案されました。^[9]

シンポジウムの途中で、意味上の難しさが明らかになりました。参加者の中には、「ミクロソーム」とは、他のタンパク質や脂質物質が混入したミクロソーム分画のリボ核タンパク質粒子を意味すると考える人もいれば、粒子が混入したタンパク質と脂質で構成されたミクロソームと考える人もいます。「ミクロソーム粒子」という表現は適切ではないように思われ、「ミクロソーム分画のリボ核タンパク質粒子」という表現は、あまりにも不自然です。会議中に、「リボソーム」という語が提案されましたが、これは非常に満足のいく名前であり、心地よい響きを持っています。「リボソーム」を 35 から 100S までのサイズのリボ核タンパク質粒子を指すのに採用すれば、現在の混乱は解消されるでしょう。

— アルベール・クロード、ミクロソーム粒子とタンパク質合成^[10]

アルベール・クロード、クリスチャン・ド・デューブ、ジョルジュ・エミール・パラードは、1974年にリボソームの発見によりノーベル生理学・医学賞を共同受賞しました。 ^[11] 2009年のノーベル化学賞は、リボソームの詳細な構造とメカニズムの解明により、ヴェンカトラマン・ラマクリシュナン、トーマス・A・スタイツ、アダ・E・ヨナスに授与されました。^[12]

リボソームは複雑な細胞機械です。主に、リボソーム RNA (rRNA) と呼ばれる特殊な RNA と、数十種類の異なるタンパク質 (正確な数は種によって若干異なります) で構成されています。リボソームタンパク質と rRNA は、異なるサイズの 2 つの異なるリボソーム片に分かれており、一般にリボソームの大サブユニットと小サブユニットと呼ばれています。リボソームは 2 つのサブユニットで構成されており、互いにフィットして 1 つとして機能し、タンパク質合成中に mRNA をポリペプチド鎖に変換します。サイズが等しくない 2 つのサブユニットから形成されるため、直径よりも軸がわずかに長くなります。

原核生物のリボソームは直径が約20  nm（200  Å）で、65%のrRNAと35%のリボソームタンパク質で構成されています。^[13]真核生物のリボソームは直径が25～30 nm（250～300 Å）で、rRNAとタンパク質の比率は1に近くなります。^[14] 結晶構造解析の研究^[15]では、ポリペプチド合成の反応部位の近くにリボソームタンパク質が存在しないことが示されています。これは、リボソームのタンパク質成分がペプチド結合形成触媒に直接関与しているのではなく、これらのタンパク質がrRNAのタンパク質合成能力を高める足場として機能することを示唆しています（リボザイムを参照）。

原核生物と真核生物のリボソームサブユニットは非常によく似ている。^[17]

リボソームサブユニットと rRNA フラグメントを表すために使用される測定単位は、サイズではなく遠心分離での沈降速度の尺度であるスヴェドベリ単位です。フラグメント名が合わないのは、このためです。たとえば、細菌の 70S リボソームは、50S サブユニットと 30S サブユニットで構成されています。

原核生物は70個のSリボソームを持ち、それぞれが小サブユニット（30S）と大サブユニット（50S）から構成されています。例えば、大腸菌は16S RNAサブユニット（1540ヌクレオチド）を持ち、21個のタンパク質に結合しています。大サブユニットは5S RNAサブユニット（120ヌクレオチド）、23S RNAサブユニット（2900ヌクレオチド）および31個のタンパク質で構成されています。^[17]

大腸菌リボソームのtRNA結合部位に対する親和性標識により、ペプチジルトランスフェラーゼ活性に最も関連している可能性が高いA部位タンパク質とP部位タンパク質の同定が可能になった。^[5]標識されたタンパク質はL27、L14、L15、L16、L2であり、少なくともL27はE.コラッツとAPチェルニロフスキーによって示されたようにドナー部位に位置する。^{[19] [20]}追加の研究により、S1およびS21タンパク質は16SリボソームRNAの3'末端と関連して翻訳の開始に関与することが実証された。^[21]

古細菌のリボソームは、細菌のリボソームと同じ一般的な寸法を共有しており、50S大サブユニット、30S小サブユニットから構成され、3つのrRNA鎖を含む70Sリボソームです。しかし、配列レベルでは、細菌よりも真核生物のリボソームに非常に近いです。細菌と比較して、古細菌が持つすべての余分なリボソームタンパク質には真核生物の対応するものがありますが、古細菌と細菌の間にはそのような関係は当てはまりません。^{[22] [23] [24]}

真核生物は細胞質に80Sリボソームを持ち、それぞれが小サブユニット（40S）と大サブユニット（60S）から構成されています。40Sサブユニットには18S RNA （1900ヌクレオチド）と33のタンパク質が含まれています。^{[25] [26]}大サブユニットは5S RNA （ 120ヌクレオチド）、28S RNA（4700ヌクレオチド）、5.8S RNA（160ヌクレオチド）サブユニットと49のタンパク質で構成されています。^{[17] [25] [27]}

1977年、チェルニロフスキーは、親和性標識法を用いてラットの肝臓リボソーム上のtRNA結合部位を特定する研究を発表しました。L32/33、L36、L21、L23、L28/29、L13を含むいくつかのタンパク質がペプチジルトランスフェラーゼ中心またはその近くにあることが示唆されました。^[28]

真核生物では、リボソームはミトコンドリア（ミトリボソームと呼ばれることもある）と葉緑体などのプラスチド（プラストリボソームとも呼ばれる）に存在します。リボソームも、タンパク質が1つの70S粒子に結合した大小のサブユニットで構成されています。 ^{[17]これらのリボソームは細菌のリボソームに似ており、これらの細胞小器官は}共生細菌として始まったと考えられています。^{[17] 2つのうち、葉緑体のリボソームはミトコンドリアのものよりも細菌のリボソームに近いです。ミトコンドリア内のリボソームRNAの多くは短縮されており、} 5S rRNAの場合は動物や真菌の他の構造に置き換えられています。^[29]特に、Leishmania tarentolaeは、最小限のミトコンドリアrRNAセットを持っています。^[30]対照的に、植物のミトリボソームは細菌と比較して拡張されたrRNAと追加のタンパク質、特に多くのペンタトリコペプチド反復タンパク質を持っています。^[31]

クリプトモナドとクロララクニオフィト藻類には、痕跡的な真核生物の核に似た核形態が含まれている可能性がある。 ^[32]真核生物の80Sリボソームは、核形態を含む区画に存在する可能性がある。^[33]

細菌と真核生物のリボソームの違いは、製薬化学者によって、感染者の細胞を傷つけずに細菌感染を破壊できる抗生物質を作り出すために利用されている。その構造の違いにより、細菌の70Sリボソームはこれらの抗生物質に対して脆弱であるが、真核生物の80Sリボソームは脆弱ではない。 ^[34]ミトコンドリアは細菌のものと似たリボソームを持っているが、ミトコンドリアはこれらの抗生物質の影響を受けない。なぜなら、ミトコンドリアはこれらの抗生物質が細胞小器官に容易に侵入できない二重膜に囲まれているからである。 ^[35]注目すべき反例は、細菌の50Sリボソームと真核生物のミトコンドリアの50Sリボソームを阻害する抗腫瘍性抗生物質クロラムフェニコールである。 ^[36]しかし、葉緑体のリボソームは異なっている。葉緑体のリボソームタンパク質の抗生物質耐性は、遺伝子工学によってマーカーとして導入する必要がある形質である。^[37]

さまざまなリボソームはコア構造を共有しており、サイズに大きな違いがあるにもかかわらず、非常によく似ています。RNAの多くは、さまざまな三次構造モチーフ、たとえば同軸スタッキングを示す擬似ノットに高度に組織化されています。より大きなリボソーム内の余分なRNAは、いくつかの長い連続挿入になっており、^[38]コア構造を破壊したり変更したりすることなく、コア構造からループを形成します。^[17]リボソームの触媒活動はすべてRNAによって行われ、タンパク質は表面に存在し、構造を安定化しているようです。^[17]

リボソームの一般的な分子構造は 1970 年代初頭から知られていました。2000 年代初頭には、数オングストロームのオーダーの高解像度で構造が解明されました。

リボソームの構造を原子分解能で示した最初の論文は、2000年後半にほぼ同時に発表されました。50S（大型原核生物）サブユニットは、古細菌 Haloarcula marismortui ^[39]と細菌 Deinococcus radioduransから決定され、30Sサブユニットの構造は細菌Thermus thermophilusから決定されました。^{[16] [40]これらの構造研究は、2009年にノーベル化学賞を受賞しました。 2001年5月、これらの座標を使用して、} T. thermophilus 70S粒子 全体が5.5Åの解像度で再構築されました。 [ ^41]

2005年11月に大腸菌70Sリボソームの構造に関する2つの論文が発表されました。空のリボソームの構造 は、X線結晶構造解析を使用して3.5Åの解像度で決定されました。^[42]その後2週間後、クライオ電子顕微鏡法に基づく構造が発表されました。^[43]これは、新しく合成されたタンパク質鎖をタンパク質伝導チャネルに通過させる動作中のリボソームを11〜15Åの解像度で示してい ます。

tRNAおよびmRNA分子と複合体を形成したリボソームの最初の原子構造は、2つのグループによって独立してX線結晶構造解析によって2.8Å  [ ^44]および3.7Å  [ ^45]で解明されました。これらの構造により、 Thermus thermophilusリボソームとmRNAおよび古典的なリボソーム部位に結合したtRNAとの相互作用の詳細を見ることができます。その後すぐに、 リボソームとシャイン・ダルガルノ配列を含む長いmRNAとの相互作用が4.5～ 5.5Åの解像度で可視化されました。^[46]

2011年、酵母サッカロミセス・セレビシエ由来の真核生物80Sリボソームの完全な原子構造が 結晶構造解析によって初めて明らかになった。^[25]このモデルは、真核生物特有の要素の構造と、普遍的に保存されたコアとの相互作用を明らかにしている。同時に、テトラヒメナ・サーモフィラの真核生物40Sリボソーム構造の完全なモデルが発表され、40Sサブユニットの構造や、翻訳開始時の40SサブユニットとeIF1の相互作用について多くのことが説明された。^{[26]同様に、}テトラヒメナ・サーモフィラのeIF6との複合体から真核生物60Sサブユニットの構造も決定された。^[27]

リボソームは、RNA と関連タンパク質からなる微粒子で、タンパク質を合成する働きをします。タンパク質は、損傷の修復や化学反応の誘導など、多くの細胞機能に必要です。リボソームは細胞質内に浮遊していたり​​、小胞体に付着していたり​​します。その主な機能は、遺伝コードをアミノ酸配列に変換し、アミノ酸モノマーからタンパク質ポリマーを構築することです。

リボソームは、ペプチジル転移とペプチジル加水分解と呼ばれる2つの非常に重要な生物学的プロセスにおいて触媒として機能します。^{[5] [47]}「PTセンターは、タンパク質伸長中にタンパク質結合を生成する役割を果たします。」^[47]

要約すると、リボソームには、メッセージの解読とペプチド結合の形成という 2 つの主な機能があります。これら 2 つの機能は、リボソーム サブユニットにあります。各サブユニットは、1 つ以上の rRNA と多くの r タンパク質で構成されています。小サブユニット (細菌と古細菌では 30S、真核生物では 40S) には解読機能があり、大サブユニット (細菌と古細菌では 50S、真核生物では 60S) は、ペプチジルトランスフェラーゼ活性と呼ばれるペプチド結合の形成を触媒します。細菌 (および古細菌) の小サブユニットには 16S rRNA と 21 個の r タンパク質 (大腸菌) が含まれ、真核生物の小サブユニットには 18S rRNA と 32 個の r タンパク質 (サッカロミセス セレビシエ、ただし種によって数は異なります) が含まれます。細菌の大サブユニットには5Sおよび23S rRNAと34個のrタンパク質が含まれており（大腸菌）、真核生物の大サブユニットには5S、5.8S、25S/28S rRNAと46個のrタンパク質が含まれています（S. cerevisiae。ここでも正確な数は種によって異なります）。^[48]

リボソームはタンパク質生合成、つまりmRNAをタンパク質に翻訳するプロセスが行われる場所です。mRNAは一連のコドンで構成されており、リボソームがこれを解読してタンパク質を作ります。リボソームはmRNAを鋳型として、  mRNAの各コドン（3ヌクレオチド）をトラバースし、アミノアシルtRNAが提供する適切なアミノ酸と対にします。アミノアシルtRNAは、一方の端に相補的なアンチコドンを、もう一方の端に適切なアミノ酸を含んでいます。適切なtRNAを迅速かつ正確に認識するために、リボソームは大きな構造変化（構造校正）を利用します。^{[49]通常、最初のアミノ酸である}メチオニンを含むアミノアシルtRNAに結合している小さなリボソームサブユニットは、mRNA上のAUGコドンに結合し、大きなリボソームサブユニットをリクルートします。リボソームには、A、P、Eと呼ばれる3つのRNA結合部位があります。A部位はアミノアシルtRNAまたは終結解放因子に結合します。^{[50] [51]} P部位はペプチジルtRNA（ポリペプチド鎖に結合したtRNA）に結合し、E部位（出口）は遊離tRNAに結合します。タンパク質合成は、 mRNAの5'末端近くにある開始コドンAUGから始まります。mRNAは最初にリボソームのP部位に結合します。リボソームは、原核生物ではmRNAのシャイン・ダルガルノ配列、真核生物ではコザックボックスを使用して開始コドンを認識します。

ペプチド結合の触媒作用は、プロトンシャトル機構においてRNAのP部位アデノシンのC2ヒドロキシル基に関係しているが、タンパク質合成の他の段階（転座など）はタンパク質の立体配座の変化によって引き起こされる。リボソームは、その触媒核がRNAでできているため、「リボザイム」に分類され、 ^[52] RNAワールドの残骸である可能性があると考えられている。^[53]

図 5 では、両方のリボソームサブユニット (小と大) が開始コドン ( mRNAの 5' 末端に向かって) に集まっています。リボソームは、mRNA 上の現在のコドン (トリプレット) に一致するtRNA を使用して、ポリペプチド鎖にアミノ酸を追加します。これは、リボソームが mRNA の 3' 末端に向かって移動する間に、mRNA 上の各トリプレットに対して行われます。通常、細菌細胞では、複数のリボソームが単一の mRNA に対して並行して機能し、ポリリボソームまたはポリソームと呼ばれるものを形成します。

リボソームはタンパク質の折り畳みに積極的に関与することが知られている。^{[54] [55]}このようにして得られた構造は、通常、タンパク質の化学的リフォールディング中に得られた構造と同一であるが、最終生成物に至る経路は異なる場合がある。^{[56] [57]場合によっては、リボソームは機能的なタンパク質形態を得る上で非常に重要である。例えば、深く}結び目のあるタンパク質の折り畳みの考えられるメカニズムの1つは、リボソームが鎖を付属のループに押し込むことに依存している。^[58]

リボソーム品質管理タンパク質Rqc2の存在は、mRNA非依存性タンパク質伸長と関連している。^{[59] [60]この伸長は、} CATテールのリボソーム付加（Rqc2によって運ばれたtRNA経由）の結果である。リボソームは停止したタンパク質のC末端を、ランダムな翻訳非依存性のアランおよびトレオニン配列で伸長する。^{[61] [62} ]

リボソームは、「自由」または「膜結合」のいずれかに分類されます。

遊離リボソームと膜結合リボソームは空間分布が異なるだけで、構造は同一です。リボソームが遊離状態か膜結合状態かは、合成されるタンパク質上のER 標的シグナル配列の存在によって決まります。そのため、個々のリボソームは、あるタンパク質を合成しているときは膜結合状態ですが、別のタンパク質を合成しているときは細胞質内で遊離状態になる可能性があります。

リボソームは細胞小器官と呼ばれることもありますが、細胞小器官という用語の使用は、リン脂質膜を含む細胞内成分を説明する場合に限定されることが多く、リボソームは完全に粒子状であるため、リン脂質膜は含みません。このため、リボソームは「非膜性細胞小器官」と呼ばれることもあります。

遊離リボソームは細胞質内のどこにでも移動できますが、細胞核やその他の細胞小器官からは排除されています。遊離リボソームから形成されたタンパク質は細胞質に放出され、細胞内で使用されます。細胞質には高濃度のグルタチオンが含まれており、還元環境であるため、酸化されたシステイン残基から形成されるジスルフィド結合を含むタンパク質は細胞質内で生成されません。

リボソームがいくつかの細胞小器官に必要なタンパク質を合成し始めると、このタンパク質を作るリボソームは「膜結合型」になることがあります。真核細胞では、これは「粗面小胞体」と呼ばれる小胞体（ER）の領域で起こります。新しく生成されたポリペプチド鎖は、ベクトル合成を行うリボソームによって直接ERに挿入され、その後、分泌経路を通じて目的地に輸送されます。結合型リボソームは通常、細胞膜内で使用されるか、またはエキソサイトーシスによって細胞から排出されるタンパク質を生成します。^[63]

細菌細胞では、リボソームは細胞質内で複数のリボソーム遺伝子オペロンの転写によって合成される。真核生物では、このプロセスは細胞質と細胞核内の領域である核小体の両方で起こる。組み立てプロセスには、4つのrRNAの合成と処理、およびそれらのrRNAとリボソームタンパク質の組み立てにおいて200を超えるタンパク質の協調機能が関与している。^[64]

リボソームは、おそらくRNAワールド内のプロトリボソームとして最初に発生し、 ^[65]ペプチジルトランスフェラーゼセンター（PTC）を含み、自己複製複合体として出現し、アミノ酸が出現し始めた後にタンパク質を合成する能力を発達させたと考えられています。^{[66]研究によると、} rRNAのみで構成された古代のリボソームは、ペプチド結合を合成する能力を発達させた可能性があります。^{[67] [ 68] [69] [70] [71]}さらに、証拠は古代のリボソームが自己複製複合体であったことを強く示唆しており、リボソーム内のrRNAは、リボソームの自己複製に必要なtRNAとタンパク質をコードしていた可能性があるため、情報、構造、および触媒の目的を持っていました。^{[72]自己複製RNAを持ち、DNAを持たない仮想の細胞生物は、}リボサイト（またはリボセル）と呼ばれます。 ^{[73] [74]}

アミノ酸が前生物的条件下でRNAワールドに徐々に出現するにつれて、^{[75] [76]}それらの触媒RNAとの相互作用により、触媒RNA分子の機能の範囲と効率の両方が増加しました。^{[66]したがって、リボソームが古代の}自己複製機械から翻訳機械としての現在の形に進化した原動力は、タンパク質をリボソームの自己複製メカニズムに組み込む選択圧であり、それによって自己複製能力が向上した可能性があります。^{[72] [77] [78]}

リボソームは種によって、また同じ細胞内でさえも組成が異なっており、同じ真核細胞内に細胞質リボソームとミトコンドリアリボソームが存在することからもそれが明らかである。一部の研究者は、哺乳類のリボソームタンパク質の組成の異質性が遺伝子調節に重要であると示唆しており、これを特殊化リボソーム仮説と呼んでいる。^{[79] [80]}しかし、この仮説は議論の余地があり、現在も研究が続いている。^{[81] [82]}

リボソーム構成の不均一性がタンパク質合成の翻訳制御に関与していることは、ヴィンス・マウロとジェラルド・エデルマンによって初めて提唱された。^[83]彼らはリボソームの調節機能を説明するためにリボソームフィルター仮説を提唱した。証拠は、異なる細胞集団に特有の特殊化したリボソームが遺伝子の翻訳方法に影響を与える可能性があることを示唆している。^[84]一部のリボソームタンパク質は、組み立てられた複合体から細胞質のコピーと交換される^{[85]ことから}、生体内のリボソームの構造は、完全に新しいリボソームを合成することなく変更できることが示唆されている。

リボソームタンパク質の中には、細胞の生命にとって絶対的に不可欠なものもあれば、そうでないものもあります。出芽酵母では、14/78 のリボソームタンパク質が成長に必須ではありませんが、ヒトでは研究対象の細胞によって異なります。^[86]その他の異質性の形態には、アセチル化、メチル化、リン酸化などのリボソームタンパク質への翻訳後修飾が含まれます。^[87] シロイヌナズナ、^{[88] [89] [90] [91]}ウイルスの内部リボソーム進入部位 (IRES) は、構成が異なるリボソームによる翻訳を媒介する場合があります。たとえば、酵母および哺乳類細胞内のeS25のない 40S リボソーム単位は、 CrPV IGR IRES をリクルートできません。^[92]

リボソームRNA修飾の異質性は構造維持や機能に重要な役割を果たしており、ほとんどのmRNA修飾は高度に保存された領域に見られます。^{[93] [94]}最も一般的なrRNA修飾は、擬似ウリジン化とリボースの2'-O-メチル化です。 ^[95]