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血液適合性検査は、輸血における血液型システム間の潜在的な不適合を特定するために、医療検査室で行われます。また、赤ちゃんが母親と異なる血液型である場合に起こりうる妊娠合併症の診断と予防にも使用されます。血液適合性検査には、人の血液型を決定する赤血球上の抗原を検出する血液型判定、血液型抗原に対する予期せぬ抗体の検査（抗体スクリーニングと同定）、および輸血の場合、受血者の血漿とドナーの赤血球を混合して不適合を検出する（交差適合）が含まれます。通常の血液型判定では、ABO型とRhD型（Rh因子）を判定し[注1 ]、赤血球上のABO抗原の同定（順方向群判定）と血漿中のABO抗体の同定（逆方向群判定）の両方を行います。特定の臨床状況では、他の血液型抗原も検査される場合があります。
血液型適合性検査は、血液型抗原と抗体の反応、具体的には抗体が細胞表面の抗原に結合すると赤血球を凝集させる現象（凝集反応）を利用します。抗原抗体反応を利用する検査法は血清学的検査法と呼ばれ、試験管やスライドを用いた手動検査から完全自動化システムまで、様々な方法が利用可能です。血液型は遺伝子検査によっても判定できます。遺伝子検査は、血清学的検査を妨げるような条件が存在する場合や、抗原同定において高い精度が求められる場合に用いられます。
血液型適合性検査において、誤った結果や判定不能な結果を引き起こす要因はいくつかあります。これらの問題がABO型判定に影響を与える場合、ABO型不一致と呼ばれます。ABO型不一致は、血液型が報告される前に調査され、解決されなければなりません。その他のエラーの原因としては、「弱D」現象（RhD抗原陽性の人がRhD検査で弱い反応または陰性反応を示す現象）や、赤血球上に免疫グロブリンG抗体が存在することなどが挙げられます。免疫グロブリンG抗体は、抗体スクリーニング、交差適合試験、および一部の血液型抗原の型判定を妨げる可能性があります。
血液適合性検査は、輸血前にルーチンで行われます。完全な適合性検査プロセスには、ABO型およびRhD （Rh因子）型の判定、他の血液型システムに対する抗体のスクリーニング、そして交差適合試験が含まれます。交差適合試験では、受血者の血漿をドナーの赤血球と照合し、不適合性を最終的に確認します。予期せぬ血液型抗体が検出された場合は、抗体を特定し[ 3 ]： 740、ドナーの血液が関連抗原に対して陰性であることを確認するために、さらなる検査が必要です[ 1 ]： 261。受血者の抗体スクリーニングが陰性で、臨床的に重要な抗体の既往歴がなく、ABO/Rh型が過去の記録または2回目の血液サンプルで確認されている場合、血清学的交差適合試験は省略できます。また、緊急時には、適合性検査の結果が得られる前に輸血を行うこともあります[ 1 ]： 262-3
血液適合性検査は、不適合があると新生児溶血性疾患を発症するリスクがあるため、妊婦や新生児の臍帯血に対してよく行われます。 [ 4 ] [ 5 ]また、血液型不適合が急性移植片対宿主病の原因となることがあるため、造血幹細胞移植の前にも使用されます。[ 6 ]
血液型は、赤血球表面の特定の抗原の有無によって定義されます。医学的に最も重要なのはABO抗原とRhD抗原ですが[ 7 ] : 585、他にも多くの血液型システムが存在し、状況によっては臨床的に重要となる場合があります。2021年現在、43の血液型が公式に認められています。[ 8 ]
赤血球上に特定の血液型抗原を持たない人は、これらの抗原に対する抗体を産生することがあります。例えば、A型の血液を持つ人はB抗原に対する抗体を産生します。ABO血液型抗体は自然発生的なものであり、不適合な血液に曝露されていない人にも存在します。[ 7 ]： 585-92 RhDを含む他のほとんどの血液型抗原に対する抗体は、輸血や妊娠によって抗原に曝露された後に産生されます。[ 1 ]： 62これらの抗体の中には、不適合な赤血球に結合して破壊を引き起こし、輸血反応やその他の合併症を引き起こすものがあります。[ 9 ]： 210-11
血液適合性検査のための血清学的検査法は、これらの抗体-抗原反応を利用します。血液型判定では、抗血清と呼ばれる血液型抗体を含む試薬[ 7 ] : 586を血球懸濁液に加えます。関連する抗原が存在する場合、試薬中の抗体によって赤血球が凝集（塊状になる）し、これは目視で確認できます[ 1 ] : 65。抗体スクリーニングでは、個人の血漿を既知の抗原プロファイルを持つ一連の赤血球に対して検査します。血漿がパネル内の赤血球のいずれかを凝集させた場合、これは個人が細胞上に存在する抗原のいずれかに対する抗体を持っていることを示します。交差適合試験では、輸血予定者の血漿をドナーの赤血球に加え、凝集（または溶血）を観察して、輸血反応を引き起こす可能性のある抗体を検出します[ 3 ] : 722-5
血液型抗体には、免疫グロブリンM（IgM）と免疫グロブリンG（IgG）の2つの主要な形態があります。ABO抗体のように主にIgMである抗体は、通常、室温で赤血球をすぐに凝集させます。したがって、赤血球を試薬に加えて遠心分離または混合するだけで、人のABO血液型を判定できます[ 1 ]： 122。また、クロスマッチングでは、遠心分離直後にABO型間の不適合を検出できます[ 3 ]： 725。RhD型判定も通常IgM試薬を使用します[ 10 ]： 477。ただし、抗RhDは通常、体内でIgGとして存在します。[ 1 ]： 161ダフィー系およびキッド系 の抗原に対する抗体など、主にIgGである抗体は、IgG抗体のサイズが小さいため格子構造の形成が妨げられ、一般的に即時凝集を引き起こしません。[ 1 ]： 198-200したがって、IgG抗血清を用いた血液型判定およびIgG抗体の検出には、赤血球に結合したIgGを証明するために間接抗グロブリン試験を使用する必要があります。 [ 1 ]： 104
間接抗グロブリン試験では、抗血清または血漿と赤血球の混合物を、 IgG抗体の反応に最適な温度である37 ℃（99 °F）でインキュベートします。インキュベーション後、赤血球を生理食塩水で洗浄して未結合の抗体を除去し、抗ヒトグロブリン試薬を添加します。IgG抗体が細胞表面の抗原に結合している場合、抗ヒトグロブリンはこれらの抗体に結合し、遠心分離後に赤血球が凝集します。反応が陰性の場合、IgGでコーティングされた試薬細胞である「チェックセル」を添加して、試験が正しく機能していることを確認します。試験結果が実際に陰性であれば、チェックセルは未結合の抗ヒトグロブリンと反応し、凝集を示すはずです。[ 3 ]： 716-9
ABOおよびRh型判定では、A、B、およびRhD抗原に対する抗体を含む試薬を血液細胞懸濁液に加えます。関連する抗原が存在する場合、赤血球は目に見える凝集（塊）を示します。[ 1 ]： 65順方向群分けと呼ばれるABO抗原の同定に加えて、通常のABO血液型判定には、被験者の血漿中のABO抗体の同定も含まれます。これは逆方向群分けと呼ばれ、[ 1 ]： 120 ABO血液型を確認するために行われます。逆方向群分けでは、被験者の血漿をA1型およびB型の赤血球に加えます。血漿は、被験者が欠いている抗原を発現する細胞を凝集させますが、患者と同じ抗原を発現する細胞を凝集させないはずです。たとえば、A型の血液を持つ人の血漿は、B型の赤血球とは反応しますが、A1型の細胞とは反応しません。期待される結果が得られない場合は、さらに検査が必要です。[ 7 ]： 595凝集反応は、反応の強さに基づいて1+から4+までスコア化される。ABO型判定では、3+または4+のスコアは陽性反応を示し、1+または2+のスコアは判定不能であり、さらなる検査が必要である。[ 1 ]： 236
輸血を受ける前に、非ABO血液型システムの抗原に対する抗体の有無が検査されます。[ 5 ]輸血医学において重要なABOおよびRhD以外の血液型抗原には、RhC/cおよびE/e抗原、ならびにDuffy、Kell、Kidd、およびMNSシステムの抗原が含まれます。[ 1 ] : 158-173臨床的に重要な抗体が同定された場合、輸血反応を防ぐために、受血者には対応する抗原が陰性の血液を輸血する必要があります。そのためには、ドナー血液を関連する抗原について型判定する必要があります。[ 1 ] : 261受血者も、抗体の正体を確認するために抗原の型判定を受けることがあります。血液型抗原が陰性の人だけが、その抗原に対する抗体を産生するはずだからです。[ 7 ] : 603
ヨーロッパでは、輸血を必要とする女性は、妊娠中に新生児溶血性疾患を発症するリスクを高める可能性のあるこれらの抗原に対する感作を防ぐために、Kell抗原および拡張Rh抗原の型判定を受けることが多い。 [ 11 ]米国血液学会は、鎌状赤血球症の患者は輸血前にRhC/c、RhE/e、Kell、Duffy、Kidd、およびMNS抗原の型判定を受けることを推奨している。[ 12 ] : 130–1これは、鎌状赤血球症の患者は輸血を必要とすることが多く、不適合な血液を輸血されるとこれらの抗原に感作される可能性があるためである。[ 13 ] βサラセミアの患者にも、拡張赤血球表現型の検査が推奨されている。[ 14 ] ABO式血液型とRh式血液型以外の血液型システムは、血液を混合しても合併症のリスクが比較的低いため、大量出血などの緊急事態では、輸血の緊急性が他の血液型システム（場合によってはRh式血液型も）との適合性検査の必要性を上回ることがあります。[ 15 ]
ABO式血液型以外のほとんどの血液型抗原に対する抗体は、不適合な血液に曝露された後に産生されます。 [ 1 ]： 62このような「予期せぬ」血液型抗体は、人口の0.8～2%にしか見られませんが、輸血を受ける人は輸血反応を防ぐためにこれらの抗体のスクリーニングを受ける必要があります。RhDやその他の血液型抗原に対する抗体は新生児溶血性疾患を引き起こす可能性があり、また抗RhD抗体を産生したRh陰性の母親はRho(D)免疫グロブリン（Rhogam）の投与を受ける資格がないため、抗体スクリーニングは出生前ケアの一環としても行われます。 [ 1 ]： 233
抗体スクリーニング手順では、被験者の血漿を、臨床的に重要な血液型抗原を最も多く発現するように選択された2～3種類の赤血球パネルに加えます。抗体スクリーニングにはO型赤血球のみが使用されます。そうでないと、自然発生的なABO血液型抗体と反応してしまうためです。血漿と赤血球の混合物を37 ℃でインキュベートし、間接抗グロブリン試験で検査します。抗体スクリーニングおよび同定プロトコルの中には、室温でのインキュベーション後に検査を行う段階を設けているものもありますが、室温で反応する予期せぬ抗体のほとんどは臨床的に重要ではないため、この段階は省略されることがよくあります。[ 3 ]： 722-4
血漿によるスクリーニング細胞の凝集は、抗ヒトグロブリンの添加の有無にかかわらず、予期せぬ血液型抗体の存在を示唆する。この場合、抗体を特定するために、より多くの細胞（通常10～11個）を用いた追加検査が必要となる。被験者の血漿が反応する赤血球の抗原プロファイルを調べることで、抗体の正体を特定することができる。凝集が同種抗体（異種抗原に対する抗体）、自己抗体（自己抗原に対する抗体）、またはその他の干渉物質によるものかどうかを判断するために、被験者自身の血漿を自身の赤血球に対して検査する「自己対照」検査も含まれる。[ 3 ]： 722～4
上の図は、血清学で最も重要な血液型抗原に対する抗体を検出するために使用される抗体パネルの解釈を示しています。各行は、既知の抗原組成を持ち、ABO O 型のドナーの「参照」または「コントロール」赤血球を表しています。+ 記号は、参照赤血球に抗原が存在することを意味し、0 は抗原が存在しないことを意味します。nt は「未検査」を意味します。右側の「結果」列は、参照赤血球と患者の血漿を 3 つの異なる段階 (室温、37 °C、および AHG (抗ヒトグロブリン、間接抗グロブリン試験による)) で混合したときの反応性を示しています。[ 16 ]
この場合、抗体パネルは抗Fy a抗体が存在することを示しています。これは、Fy a抗原に対して陰性であることが確認されたドナー血液を使用する必要があることを示しています。ただし、その後のクロスマッチングで反応性が認められた場合は、以前に除外された抗原（この場合は、E、C W、Kp aおよび/またはLu a）に対する追加検査を実施する必要があります。[ 16 ]
複数の抗体が存在する場合、または抗体が高頻度抗原に向けられている場合、通常の抗体パネル手順では決定的な同定が得られない可能性があります。このような場合、中和物質が特定の抗原を中和する赤血球凝集抑制法を使用できます。 [ 17 ]あるいは、血漿を既知の抗原プロファイルを持つ細胞とインキュベートして特定の抗体を除去する（吸着と呼ばれるプロセス）か、フィカインやパパインなどの酵素で細胞を処理することで、一部の血液型抗体の反応性を阻害し、他の抗体の反応性を高めることができます。[ 3 ]： 723-9フィカインとパパインが主要な血液型システムに与える影響は次のとおりです。[ 18 ] [ 19 ]
過去に予期せぬ血液型抗体の検査で陽性反応を示した人は、その後の検査で陽性反応を示さない可能性があります。しかし、抗体が臨床的に重要な場合は、抗原陰性の血液を輸血する必要があります。[ 20 ]
輸血前にルーチンで行われるクロスマッチングでは、受血者の血漿をドナーの赤血球サンプルに加えます。血液が不適合の場合、受血者の血漿中の抗体がドナーの赤血球上の抗原に結合します。この抗体-抗原反応は、遠心分離後に赤血球の凝集または破壊が目視で確認できるほか、抗ヒトグロブリンとの反応によっても検出できます。[ 7 ]： 600-3
輸血を受ける人の抗体スクリーニングが陰性で、抗体の既往歴もない場合は、「即時遠心分離」クロスマッチがよく行われます。赤血球と血漿を混合した直後に遠心分離し、ABO血液型間の不適合を最終的に確認します。臨床的に重要な抗体が検出された場合（または過去に検出された場合）、あるいは即時遠心分離クロスマッチで不適合が示された場合は、「完全」または「IgGクロスマッチ」が行われます。これは、間接抗グロブリン試験を使用してIgG抗体によって引き起こされる血液型不適合を検出します。IgGクロスマッチの手順は即時遠心分離クロスマッチよりも時間がかかり、場合によっては2時間以上かかることがあります。[ 20 ]
抗体スクリーニングが陰性で抗体の既往歴がない人も、「電子クロスマッチ」を受けることができます。ただし、現在の血液サンプルからABO型とRh型が判定されており、別のABO/Rh型の検査結果が記録されている場合に限ります。この場合、受血者の血液型はドナーの血液型と比較されるだけで、血清学的検査は必要ありません。[ 7 ]： 600-3緊急時には、クロスマッチが完了する前に血液が供給される場合があります。[ 1 ]： 262-3
血液型判定は、試験管、マイクロプレート、または血液型判定スライドを用いて行うことができます。試験管法では、試験管内で赤血球懸濁液と抗血清（または逆群判定の場合は血漿）を混合します。混合物を遠心分離して細胞と試薬を分離し、その後、試験管を穏やかに振盪して再懸濁します。目的の抗原が存在する場合、赤血球は凝集して試験管内に固形塊を形成します。抗原が存在しない場合、混合すると赤血球は再び懸濁状態に戻ります。[ 7 ]： 611-12 [ 9 ]： 214 マイクロプレート法は試験管法と似ていますが、個々の試験管を使用する代わりに、数十個のウェルを含むプレートで血液型判定を行うため、複数の検査を同時に行うことができます。凝集反応は、プレートを遠心分離した後に読み取られます。[ 21 ]： 201
抗体スクリーニングおよび同定は、試験管法によっても実施できます。この方法では、血漿と赤血球を、低イオン強度生理食塩水（LISS）などの凝集反応を促進する培地を含む試験管内で混合します。試験管は体温で一定時間インキュベートした後、遠心分離して凝集または溶血の有無を調べます。まずインキュベーション直後に、次に洗浄後抗ヒトグロブリン試薬を添加した後で検査します。[ 3 ]： 722同様に、交差適合試験も試験管法で実施できます。即時スピン交差適合試験では遠心分離直後に反応を読み取り、完全交差適合試験ではインキュベーション後抗ヒトグロブリン試薬を添加した後で反応を読み取ります。[ 3 ]： 725
血液型判定のスライド法は、スライド上で血液1滴と抗血清1滴を混合する。スライドを傾けて細胞と試薬を混合し、凝集反応を観察する。凝集反応が認められれば陽性判定となる。この方法は、資源が不足している地域や緊急時などに用いられることが多く、それ以外の場合は代替法が好まれる。[ 9 ]： 214 [ 10 ]： 476
血液適合性検査（「ゲルテスト」とも呼ばれる）に用いられるカラム凝集法では、デキストラン-ポリアクリルアミドゲルのカラムを含むカードを使用します。血液型判定用のカードには、順方向の血液型判定用の試薬が予め分注されたウェルと、逆方向の血液型判定用の緩衝液のみを含むウェルがあり、そこに試薬赤血球と血漿が添加されます。抗体スクリーニングや交差適合試験もカラム凝集法で実施でき、その場合は抗ヒトグロブリン試薬を含むカードが使用されます。ゲルカードは遠心分離され（検査によってはインキュベーション後に行われる場合もあります）、その際に赤血球凝集物はゲルを通過するには大きすぎるため、カラムの上部に捕捉されます。凝集しなかった細胞は下部に集まります。したがって、カラム上部に赤血球の列が見られる場合は陽性反応を示します。陽性反応の強さは、細胞がゲル内を移動した距離に応じて1+から4+までスコア化されます。ゲルテストは、手動による細胞の再懸濁に伴うばらつきを排除し、カードをテストの記録として保管できるという点で、手動法よりも優れている。[ 1 ]： 269-71カラム凝集法は、一部の自動分析装置で血液型判定を自動的に行うために使用されている。[ 7 ]： 590これらの分析装置は、赤血球と血漿をゲルカードにピペットで滴下し、遠心分離した後、凝集反応をスキャンして読み取り、血液型を判定する。[ 1 ]： 270-1
固相アッセイ（「抗原捕捉法」とも呼ばれる）では、試薬抗原または抗体を表面（通常はマイクロプレート）に固定して使用します。[ 9 ]： 214抗A、抗B、抗D試薬でコーティングされたマイクロプレートウェルは、順方向血球分類に使用されます。検査サンプルを添加し、マイクロプレートを遠心分離します。陽性反応の場合、赤血球はウェルの表面に付着します。[ 7 ]： 590 [ 10 ]： 477一部の自動分析装置は、血液型判定に固相アッセイを使用しています。[ 1 ]： 275–6
遺伝子検査は、血清学的検査では不十分な特定の状況において、人の血液型を判定するために使用できます。たとえば、大量の献血血液を輸血された場合、血清学的検査の結果は、その人の実際の血液型ではなく、献血細胞上の抗原を反映します。[ 11 ]自身の赤血球に対する抗体を産生する人[ 21 ] : 202、または特定の薬剤で治療を受けている人は、血清学的検査で偽の凝集反応を示す可能性があるため、血液型を正確に判定するには遺伝子型判定が必要になる場合があります。[ 1 ] : 261市販の抗血清が入手できない赤血球抗原の型判定には、遺伝子検査が必要です。[ 11 ]
AABBは、妊娠の可能性がある血清学的弱D表現型を持つ女性に対して赤血球遺伝子型検査を推奨しています。 [ 22 ] [ 23 ]これは、一部の弱D表現型を持つ人はRhD抗原に対する抗体を産生できるのに対し、他の弱D表現型を持つ人は産生できないためです。このような抗体は胎児および新生児の溶血性疾患（HDFN）を引き起こす可能性があります。遺伝子型検査では、抗体産生の可能性を決定づける特定のタイプの弱D抗原を特定できるため、Rho(D)免疫グロブリンによる不必要な治療を回避できます。[ 24 ]遺伝子型検査は、特定の抗原に対してより正確であり、血清学的検査法では検出できない抗原を特定できるため、鎌状赤血球症患者に対しては血清学的検査よりも推奨されます。[ 25 ] [ 13 ]
遺伝子型判定は、新生児溶血性疾患の出生前検査にも使用されます。妊婦がHDNを引き起こす可能性のある血液型抗体を持っている場合、胎児の関連抗原を型判定して、疾患を発症するリスクがあるかどうかを判断できます。胎児から採血するのは現実的ではないため、羊水穿刺サンプルまたは母親の血液から分離された無細胞胎児DNAを使用して血液型が決定されます。 [ 21 ] : 202 [ 22 ]父親の遺伝子型判定も新生児溶血性疾患のリスクを予測するために行われることがあります。父親が関連抗原のホモ接合体（つまり、遺伝子のコピーを2つ持っている）の場合、赤ちゃんは抗原陽性となり、したがって疾患を発症するリスクがあります。父親がヘテロ接合体（コピーを1つしか持っていない）の場合、赤ちゃんが抗原陽性となる確率は50%です。[ 11 ]
ABO式血液型判定では、順方向および逆方向の血液型判定の結果は常に一致しなければならない。両者の結果に予期せぬ相違が生じた場合はABO式血液型不一致とみなされ、血液型を報告する前に解決する必要がある。[ 1 ]： 136
前方群判定における反応が弱いのは、ABOサブグループ（A抗原またはB抗原の発現低下、あるいは構造変化を特徴とする変異型血液型）に属する人である。ABO抗原の発現低下は、白血病やホジキンリンパ腫でもみられることがある。前方群判定における反応が弱い場合は、血液と試薬の混合物を室温または4 ℃（39 °F）でインキュベートするか、抗原抗体反応を増強する特定の酵素を使用することで、反応を強めることができる。 [ 1 ]： 139
血液型判定用抗血清との反応後、赤血球が2つの集団に分かれることがあります。一部の赤血球は凝集しますが、他の赤血球は凝集しないため、結果の解釈が困難になります。これは混合フィールド反応と呼ばれ、最近異なる血液型の輸血を受けた場合（例えば、A型の患者がO型の血液を輸血された場合）、異なる血液型の人から骨髄移植または幹細胞移植を受けた場合、あるいはA3型などの特定のABOサブグループの患者に起こる可能性があります。患者の病歴を調査することで、混合フィールド反応の原因を明らかにすることができます。[ 1 ]： 138 [ 26 ]： 314
寒冷凝集素症の患者は、自身の赤血球に対する抗体を産生し、室温で赤血球が自然に凝集するため、前方群判定で偽陽性反応を示す。寒冷凝集素は通常、検体を37 ℃（99 °F）に温め、生理食塩水で赤血球を洗浄することで不活化できる。これが効果的でない場合は、ジチオスレイトールを用いて抗体を破壊できる。[ 1 ]： 141
臍帯血サンプルには、赤血球を凝集させ、凝集反応を模倣する粘性物質であるワルトンゼリーが混入している可能性がある。ワルトンゼリーは、赤血球を十分に洗浄することで除去できる。[ 1 ]： 141
「後天性B抗原」と呼ばれるまれな現象では、真の血液型がA型の患者が、順群判定でB型に対して弱い陽性反応を示すことがあります。この状態は、大腸がん[ 1 ] : 139や腸閉塞[ 26 ] : 126などの消化器疾患と関連しており、細菌酵素によってA抗原がB抗原に似た構造に変換されることで生じます[ 10 ] : 477。真のB抗原とは異なり、後天性B抗原は特定のpH範囲内の試薬とは反応しません[ 1 ] : 139
生後3～6ヶ月未満の乳児は、ABO抗体の産生量が非常に少ないため、逆血液型判定において反応が欠落または弱くなります。[ 1 ]： 136したがって、この年齢層では一般的に逆血液型判定は行われません。[ 10 ]： 486高齢者や低ガンマグロブリン血症の人も抗体産生が低下する可能性があります。弱い反応は、血漿と赤血球を室温で15～30分間インキュベートすることで強化できます。それでも効果がない場合は、4 ℃（39 °F）でインキュベートすることができます。[ 1 ]： 137～8
血液型AまたはABの人の約20%はA型のサブグループであるA2型に属し、より一般的なサブグループであるA1型は全体の約80%を占めます。A1抗原とA2抗原の構造にはわずかな違いがあるため、A2型サブグループに属する人の中にはA1型に対する抗体を産生する人がいます。そのため、これらの人は順方向の血液型判定ではA型またはAB型と判定されますが、逆方向の血液型判定ではA1型の赤血球に対して予期せぬ陽性反応を示します。この矛盾は、抗A1試薬を用いて赤血球を検査することで解決できます。患者がA2型サブグループに属する場合、この試薬は陰性結果を示します。抗A1抗体は、 37 ℃（99 °F）で反応しない限り、臨床的に重要ではないと考えられています。A型には他のサブグループも存在し、B型にもサブグループが存在しますが、これらはまれにしか見られません。[ 1 ]： 127-32
血漿中に高濃度のタンパク質が存在する場合、試薬細胞に血漿を加えた際に、ルーローと呼ばれる現象が発生することがあります。ルーローは赤血球が凝集する現象で、凝集反応を模倣し、逆群判定で偽陽性となる可能性があります。これを回避するには、血漿を除去し、生理食塩水に置き換えて、試験管を再度遠心分離します。血漿を生理食塩水に置き換えるとルーローは消失しますが、真の凝集反応は持続します。[ 1 ]： 140-1
A型およびB型以外の血液型抗原に対する抗体は、逆血液型判定に使用される試薬細胞と反応する可能性があります。低温反応性自己抗体が存在する場合、サンプルを37 ℃（99 °F）に加温することで偽陽性結果を解消できます。結果が同種抗体によって引き起こされている場合は、抗体スクリーニングを実施して抗体を特定し[ 7 ]： 141-2、関連する抗原を持たないサンプルを使用して逆血液型判定を実施できます[ 10 ]： 477
約 0.2 ～ 1% の人が「弱い D」表現型を持ちます[ 27 ]。これは、RhD 抗原に対しては陽性ですが、抗原発現の低下または抗原構造の非定型変異により、一部の抗 RhD 試薬に対して弱い反応または陰性反応を示すことを意味します。RhD のルーチン血清学的検査でスコアが 2+ 以下になった場合、抗グロブリン試験を使用して RhD の存在を証明できます。[ 1 ] : 159弱い D 検査は、最初に RhD 陰性と判定された献血者に対しても実施されます。[ 22 ]歴史的に、不適合な血液への潜在的な曝露を避けるために、弱い D の献血者は Rh 陽性として扱われ、弱い D の患者は Rh 陰性として扱われていました。弱い D 表現型の分子基盤を決定するために遺伝子型判定がますます使用されるようになっています。これは、弱い D を持つ個人が RhD に対する抗体を産生できるか、または他の人を RhD 抗原に感作できるかを決定するためです。[ 27 ]
弱D抗原検査や一部の赤血球抗原の型判定に用いられる間接抗グロブリン試験は、赤血球に結合したIgGを検出します。自己免疫性溶血性貧血、新生児溶血性疾患、輸血反応などで起こるように、 IgGが生体内で赤血球に結合している場合[ 10 ]： 260、関連する抗原の存在に関わらず、間接抗グロブリン試験は常に陽性反応を示します[ 10 ]： 477-8。陽性反応が赤血球の感作によるものであることを証明するために、直接抗グロブリン試験を実施することができます[ 28 ]： 289
一部のグループの人々には、特別な輸血要件があります。胎児、極低出生体重児、および免疫不全の人々は、サイトメガロウイルス（CMV）による重篤な感染症を発症するリスクがあります。CMVは日和見病原体であり、献血者の約50%が検査で陽性反応を示します。これらの人々は、感染を防ぐためにCMV陰性の血液を輸血されることがあります。[ 3 ]： 749 [ 29 ]骨髄移植を受けた患者など、移植片対宿主病を発症するリスクのある人は、この反応の原因となるTリンパ球を不活化するために放射線照射された血液を受け取ります。過去に輸血に対して重篤なアレルギー反応を起こしたことがある人は、血漿を除去するために「洗浄」された血液を輸血されることがあります。 [ 1 ]： 342-5また、患者の病歴を調べて、以前に抗体やその他の血清学的異常が特定されたことがあるかどうかを確認します。
抗体検査の一環として、直接抗グロブリン試験（クームス試験）も実施される。 [ 30 ]
献血血液は一般的に、HIVなどの輸血感染症についてスクリーニングされる。2018年時点で、世界保健機関は、高所得国および上位中所得国では献血のほぼ100%が感染症スクリーニングを受けているが、下位中所得国および低所得国ではそれぞれ82%および80.3%であると報告した。[ 31 ]
1901年、カール・ラントシュタイナーは、 5人の異なるヒトドナーの血清と赤血球を混合する実験の結果を発表した。彼は、人の血清は自身の赤血球を凝集させないが、他人の赤血球を凝集させることを観察し、この凝集反応に基づいて赤血球をA群、B群、C群の3つのグループに分類できることを示した。C群は、どの人の血漿とも反応しない赤血球で構成されており、後にO群として知られるようになった。[ 32 ]： 5 現在AB型として知られる4番目のグループは、1902年にラントシュタイナーの同僚によって記述された。[ 32 ]： 7この実験は、血液型判定の最初の例であった。[ 1 ]： 120
1945年、ロビン・クームズ、AE・モーラント、RR・レースは抗グロブリン試験（クームズ試験とも呼ばれる）の記述を発表した。それまでの血液型抗体に関する研究では、いわゆる「ブロッキング抗体」または「不完全抗体」の存在が確認されていた。これらの抗体は抗原部位を占有し、他の抗体の結合を妨げるものの、赤血球の凝集を引き起こさない。クームズらは、これらの抗体の存在を容易に証明する方法を考案した。彼らはヒト免疫グロブリンをウサギに注射し、抗ヒトグロブリン抗体を産生させた。この抗ヒトグロブリンは、既に赤血球に結合している抗体に結合し、赤血球を凝集させることができた。抗グロブリン試験の発明は、さらに多くの血液型抗原の発見につながった。1950年代初頭には、企業が特殊抗原検査用の市販抗血清の製造を開始した。[ 32 ]： 62-72
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