マトリックス支援レーザー脱離/イオン化

質量分析法において、マトリックス支援レーザー脱離イオン化（MALDI）は、レーザーエネルギー吸収マトリックスを使用して、最小限のフラグメンテーションで大きな分子からイオンを作成するイオン化技術です。^[1]これは、従来のイオン化方法では壊れやすく断片化する傾向がある生体分子（DNA、タンパク質、ペプチド、炭水化物などの生体高分子）やさまざまな有機分子（ポリマー、デンドリマー、その他の高分子など）の分析に適用されています。どちらの技術も気相で大きな分子のイオンを取得する比較的ソフトな（低フラグメンテーション）方法であるという点で、エレクトロスプレーイオン化（ESI）と特性が似ていますが、MALDIでは通常、生成される多価イオンがはるかに少ないです。

MALDI法は3段階のプロセスです。まず、サンプルを適切なマトリックス材料と混合し、金属板に塗布します。次に、パルスレーザーをサンプルに照射し、サンプルとマトリックス材料のアブレーションと脱離を引き起こします。最後に、分析対象分子は、アブレーションされたガスの高温の煙の中でプロトン化または脱プロトン化されてイオン化され、その後、分析に使用する質量分析計に加速されます。^[2]

マトリックス支援レーザー脱離イオン化（MALDI）という用語は、1985年にフランツ・ヒレンカンプ、マイケル・カラスとその同僚によって造られました。^[3]これらの研究者は、アミノ酸の アラニンをアミノ酸のトリプトファンと混合し、パルス266nmレーザーを照射すると、より簡単にイオン化できることを発見しました。トリプトファンはレーザーエネルギーを吸収し、非吸収性のアラニンのイオン化を助けます。2843 Daペプチドのメリチンまでのペプチドは、この種の「マトリックス」と混合するとイオン化できます。^[4]巨大分子レーザー脱離イオン化のブレークスルーは、1987年に島津製作所の田中耕一とその同僚が、グリセロール中の30nmのコバルト粒子と337nmの窒素レーザーを組み合わせてイオン化する「超微細金属プラス液体マトリックス法」と呼ばれる方法を使用したときに起こりました。^[5]このレーザーとマトリックスの組み合わせを使用して、田中は34,472 Daのタンパク質カルボキシペプチダーゼAほどの大きさの生体分子をイオン化することができました。田中は、レーザー波長とマトリックスを適切に組み合わせることでタンパク質をイオン化できることを実証したことで、 2002年のノーベル化学賞の4分の1を受賞しました。 ^[6]その後、KarasとHillenkampはニコチン酸マトリックスと266 nmレーザーを使用して、67 kDaのタンパク質アルブミンをイオン化することに成功しました。^[7] 355 nmレーザーと、マトリックスとして桂皮酸誘導体のフェルラ酸、カフェー酸、シナピン酸を使用することで、さらなる改善が実現しました。 ^{[8] 337 nmの波長で動作する小型で比較的安価な}窒素レーザーと、1990年代初頭に導入された最初の商用機器が利用可能になったことで、MALDIを利用する研究者が増えました。^[9]現在、MALDI質量分析法には主に有機マトリックスが使用されています。

マトリックスは結晶化した分子で構成されており、その中で最も一般的に使用されている3つはシナピン酸、α-シアノ-4-ヒドロキシ桂皮酸（α-CHCA、アルファシアノまたはアルファマトリックス） 、および2,5-ジヒドロキシ安息香酸（DHB）です。^[15]これらの分子の1つの溶液は、多くの場合、高度に精製された水とアセトニトリル（ACN）またはエタノールなどの有機溶媒の混合物で作られます。通常、トリフルオロ酢酸（TFA）などの対イオン源が追加され、[M + H]イオンを生成します。マトリックス溶液の良い例は、ACN：水：TFA（50：50：0.1）中の20 mg / mLシナピン酸です。

適切なマトリックス化合物の特定は、ある程度は試行錯誤によって行われますが、特定の分子設計上の考慮事項に基づいています。マトリックス化合物は、分子量がかなり低い（容易に蒸発できる）ものの、サンプル調製中または質量分析計内に置かれている間に蒸発しない程度の大きさ（十分に低い蒸気圧）です。マトリックス化合物は酸性であることが多いため、プロトン源として作用し、分析対象のイオン化を促進します。塩基性マトリックスも報告されています。^[16]マトリックス化合物は、UV または IR 領域のいずれかで強い光吸収を示し、^{[17]レーザー照射を迅速かつ効率的に吸収します。この効率は、}桂皮酸の構造に見られるように、複数の共役二重結合を組み込んだ化学構造によく見られます。マトリックス化合物は極性基で官能基化されているため、水溶液で使用できます。マトリックス化合物には通常、発色団が含まれています。

マトリックス溶液は分析対象物（例：タンパク質サンプル）と混合されます。水と有機溶媒の混合物により、疎水性分子と水溶性（親水性）分子の両方が溶液に溶解します。この溶液を MALDI プレート（通常はこの目的のために設計された金属プレート）に滴下します。溶媒は蒸発し、再結晶化されたマトリックスのみが残りますが、分析対象物の分子は MALDI 結晶に埋め込まれています。マトリックスと分析対象物は共結晶化されていると言われています。共結晶化は、適切なマトリックスを選択して対象分析対象の良質の質量スペクトルを得るための重要な問題です。

生物系の分析では、タンパク質抽出物の一部でもある無機塩がイオン化プロセスを妨害します。塩は固相抽出法、または乾燥した液滴MALDIスポットを冷水で洗浄することで除去できます。^[18]どちらの方法でも、サンプルから他の物質が除去されます。マトリックスとタンパク質の混合物は、極性の違いにより共結晶化中に2つの物質が分離するため均質ではありません。ターゲットのスポット直径はレーザーのスポット直径よりもはるかに大きいため、ターゲットスポット内の物質濃度の統計的平均を取得するには、ターゲットのさまざまな場所で多くのレーザーショットを行う必要があります。

マトリックスは、機器を調整してサンプルをさまざまな方法でイオン化するために使用できます。前述のように、サンプルをイオン化するために酸塩基のような反応がよく使用されますが、ナフタレンのような化合物などの共役πシステムを持つ分子も電子受容体として機能し、したがってMALDI / TOFのマトリックスとして機能します。 ^[19]これは、共役πシステムも持つ分子を研究する場合に特に便利です。^[20]これらのマトリックスの最も広く使用されている用途は、クロロフィルなどのポルフィリンのような化合物の研究です。これらのマトリックスは、奇妙なフラグメンテーションパターンや側鎖の完全な損失をもたらさない、より優れたイオン化パターンを持つことが示されています。^[21]また、共役ポルフィリンのような分子がマトリックスとして機能し、それ自体を切断して別のマトリックス化合物の必要性を排除できることも示唆されています。^[22]

MALDI技術にはいくつかのバリエーションがあり、今日では学術的・分析的なものから工業的・高スループットのものまで、非常に異なる目的で同等の機器が製造されています。質量分析分野は、FT-ICR機器^{[23] [24]}やより高スループットの機器[ ²⁵ ] などの超高解像度質量分析を必要とする分野にまで拡大しています。多くのMALDI MS機器は交換可能なイオン化源（エレクトロスプレーイオン化、MALDI、大気圧イオン化など）付きで購入できるため、技術は重複することが多く、多くの場合、任意のソフトイオン化法を使用できる可能性があります。ソフトイオン化法のその他のバリエーションについては、「ソフトレーザー脱離」または「イオン源」を参照してください。

MALDI技術では、通常、窒素レーザー（337 nm）や周波数3倍および4倍のNd:YAGレーザー（それぞれ355 nmと266 nm）などのUVレーザーが使用されます。 ^[26]

赤外線MALDIに使用される赤外線レーザーの波長には、2.94μm Er:YAGレーザー、中赤外光パラメトリック発振器、および10.6μm二酸化炭素レーザーがあります。それほど一般的ではありませんが、赤外線レーザーはイオン化モードが柔らかいため使用されます。^[27] IR-MALDIには、材料除去が大きい（生物学的サンプルに便利）、低質量干渉が少ない、および他のマトリックスフリーレーザー脱離質量分析法と互換性があるという利点もあります。

MALDI で最も広く使用されている質量分析計のタイプは、主に質量範囲が広いことから、飛行時間型質量分析計(TOF) です。TOF 測定手順は、パルスレーザーが連続動作ではなく個別の「ショット」を撮影するため、MALDI イオン化プロセスにも最適です。MALDI-TOF 機器には、電場を使用してイオンを反射するリフレクトロン(「イオンミラー」) が装備されていることがよくあります。これによりイオンの飛行経路が長くなり、異なる m/z のイオン間の飛行時間が長くなり、解像度が向上します。最新の市販のリフレクトロン TOF 機器の分解能は、50,000 FWHM (最大値の半分の全幅、Δm はピーク高さの 50% のピーク幅として定義) 以上の m/Δm に達します。^[28]

MALDIはIMS -TOF MSと組み合わせて、リン酸化ペプチドと非リン酸化ペプチドを同定するために使用されています。^{[29] [30]}

MALDI- FT-ICR MSは、高解像度のMALDI-MS測定が必要な場合に有用な技術であることが実証されています。^[31]

大気圧（AP）マトリックス支援レーザー脱離イオン化（MALDI）は、真空MALDIとは対照的に、通常の大気環境で動作するイオン化技術（イオン源）です。^[32]真空MALDIとAP-MALDIの主な違いは、イオンが生成される圧力です。真空MALDIでは、イオンは通常10 mTorr以下で生成されますが、AP-MALDIではイオンは大気圧で形成されます。これまで、従来の真空MALDIと比較したAP-MALDI技術の主な欠点は、感度が限られていることでしたが、イオンは高効率で質量分析計に転送でき、アトモルの検出限界が報告されています。^[33] AP-MALDIは、プロテオミクスから創薬まで、さまざまな用途の質量分析（MS）に使用されています。AP-MALDI質量分析で取り上げられる一般的なトピックには、プロテオミクスなどがあります。 DNA、RNA、PNA、脂質、オリゴ糖、リン酸化ペプチド、細菌、小分子、合成ポリマーの質量分析。真空MALDI装置でも同様のアプリケーションが利用可能です。AP-MALDIイオン源は、イオントラップ質量分析計^{[34]または}エレクトロスプレーイオン化（ESI）またはナノESI源を備えた他のMSシステムに簡単に接続できます。

減圧イオン化によるMALDIは、主に一価イオンを生成することが知られています（以下の「イオン化メカニズム」を参照）。対照的に、大気圧でのイオン化は、最初に赤外線^[35]で示され、後に窒素レーザーでも示されたように、高電荷の分析対象物を生成することができます。^{[36]分析対象物の多重荷電は非常に重要です。なぜなら、四重極などのより狭い}m/z検出範囲しか提供しない機器で、タンパク質などの高分子量化合物を測定できるためです。この効果を得るには、圧力に加えて、マトリックスの組成が重要です。

エアロゾル質量分析法では、イオン化技術の1つとして、個々の液滴にレーザーを照射する手法が用いられる。このようなシステムは、単一粒子質量分析計（SPMS）と呼ばれる。^[37]サンプルは、エアロゾル化の前にMALDIマトリックスと混合してもよい。

レーザーは、乾燥した液滴スポット内のマトリックス結晶に照射されます。マトリックスはレーザーエネルギーを吸収し、このイベントによって主にマトリックスが脱着およびイオン化（陽子の追加による）されると考えられています。アブレーション中に生成されるホットプルームには、中性およびイオン化されたマトリックス分子、プロトン化されたおよび脱プロトン化されたマトリックス分子、マトリックスクラスター、ナノ液滴など、多くの種が含まれています。アブレーションされた種は分析物のイオン化に関与している可能性がありますが、MALDIのメカニズムはまだ議論されています。次に、マトリックスは陽子を分析物分子（例：タンパク質分子）に移動し、分析物を帯電させると考えられています。^[38]このプロセス後に観察されるイオンは、最初の中性分子 [M] にイオンが追加または除去された構成になります。これは準分子イオンと呼​​ばれ、たとえば、陽子が追加された場合は[M+H] ^{+ 、}ナトリウムイオンが追加された場合は[M+Na] ⁺ 、陽子が除去された場合は[MH] ⁻になります。 MALDI は、マトリックスの性質、レーザーの強度、および/または使用する電圧に応じて、一価イオンまたは多価イオン ([M+nH] ⁿ⁺ ) を生成することができます。これらはすべて偶数電子種であることに注意してください。ラジカルカチオン (光イオン化分子) のイオン信号は、たとえばマトリックス分子やその他の有機分子の場合に観察できます。

UVレーザーMALDIの気相プロトン移動モデル^[2]は、結合物理化学動力学（CPCD）モデル^{[39]として実装されており、イオン化につながる一次および二次プロセスを仮定しています。 [40]}一次プロセスには、マトリックスによる光子の吸収による初期の電荷分離と、エネルギーのプールによるマトリックスイオン対の形成が含まれます。一次イオン形成は、UV光子の吸収によって励起状態分子が生成されることで発生します。

S ₀ + hν → S ₁

S ₁ + S ₁ → S ₀ + S _n

S ₁ + S _n → M ⁺ + M ⁻

ここで、S ₀は基底電子状態、S _{1 は}最初の電子励起状態、S _{n は}より高い電子励起状態です。^{[39]生成イオンは、上記のM +}とM ^-で示されるプロトン移動イオン対または電子移動イオン対です。二次プロセスには、分析対象イオンを形成するイオン分子反応が含まれます。

ラッキーサバイバーモデル（クラスターイオン化メカニズム^[2]）は、分析対象分子が溶液からの電荷状態を維持したままマトリックスに組み込まれると仮定しています。^{[41] [42]}イオン形成は、レーザーアブレーションされたクラスターの断片化時に電荷分離によって発生します。^[2]光電子または対イオンとの再結合によって中和されないイオンは、いわゆるラッキーサバイバーです。

熱モデルは、高温により溶融マトリックス液中のマトリックスと分析対象物の間の陽子移動が促進されると仮定している。 [ ^{43 ]}イオン対中性比は理論モデルを正当化する上で重要なパラメータであり、イオン対中性比を誤って引用すると、イオン化メカニズムの誤った決定につながる可能性がある。 [44]このモデルは、分析対象の濃度と陽子親和力の関数としての総イオン強度の増加と、レーザーフルエンスの関数としてのイオン対中性比の増加を定量的に予測する。^{[45] [46]このモデルは、金属イオン付加物（例：[M+Na] +}または [M+K] ⁺）が主に熱誘導性塩溶解から生成されることも示唆している。 ^[47]

マトリックス支援イオン化（MAI）法は、MALDIと同様のマトリックス調製法を使用するが、揮発性または非揮発性化合物の分析対象イオンを生成するためにレーザーアブレーションを必要としない。^[48]分析対象物を含むマトリックスを質量分析計の真空にさらすだけで、エレクトロスプレーイオン化とほぼ同じ電荷状態のイオンが生成される。^[49]このプロセスとMALDIの間にはメカニズムの共通点がある可能性が高いことが示唆されている。^[42]

イオン収量は通常10 ⁻⁴～ 10 ⁻⁷と推定されていますが、^[50]いくつかの実験ではさらに低い10 ⁻⁹を示唆しています。^[51]イオン収量が低いという問題は、MALDIの導入直後から、第2のレーザーを使用した後イオン化など、さまざまな試みによって対処されていました。^[52]これらの試みのほとんどは、信号の増加がわずかで、限られた成功しか示しませんでした。これは、軸方向飛行時間計測器が使用されたことに起因する可能性があります。この計測器は、ソース領域で10 ⁻⁵～ 10 ⁻⁶の圧力で動作し、粒子速度が最大1000 m/sで急速にプルームが膨張します。^[53] 2015年には、改良型MALDI源を約3mbarの高圧で動作させ、直交飛行時間型質量分析計と組み合わせ、波長可変型ポストイオン化レーザーを用いて、マトリックスの2光子イオン化閾値を下回る260nm～280nmの波長で動作させることで、レーザーポストイオン化の成功が報告され、いくつかの脂質や小分子のイオン収量が最大3桁上昇しました。^[54]このアプローチは、2番目のレーザーと2番目のMALDIのようなイオン化プロセスにちなんでMALDI-2と呼ばれ、その後、低mbar範囲で動作する源を備えた他の質量分析計にも採用されました。^{[55] [56]}

プロテオミクスでは、MALDIはゲル電気泳動：SDS-PAGE、サイズ排除クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、強/弱イオン交換、同位体コード化タンパク質標識（ICPL）、および2次元ゲル電気泳動を使用して単離されたタンパク質の迅速な識別に使用されます。ペプチド質量フィンガープリンティングは、MALDI-TOF質量分析計の最も一般的な分析アプリケーションです。MALDI TOF / TOF質量分析計は、ポストソース崩壊または高エネルギー衝突誘起解離を使用してペプチドのアミノ酸配列を明らかにするために使用されます（詳細については、質量分析を参照してください）。

MALDI-TOFは翻訳後修飾の特徴づけに使用されている。例えば、タンパク質のメチル化と脱メチル化の研究に広く適用されている。^{[57] [58]}しかし、MALDI-TOFで翻訳後修飾を研究する場合には注意が必要である。例えば、グリコシル化ペプチドのMALDI MS分析のマトリックスとしてジヒドロキシ安息香酸（DHB）を使用した場合、シアリン酸の損失が論文で確認されたと報告されている。シナピン酸、4-HCCA、DHBをマトリックスとして使用し、S. Martinは、線形モードとリフレクターモードでのMALDI/TOFでの準安定崩壊によるグリコシル化ペプチドのシアリン酸の損失を研究した。^[59]島津製作所のグループは、検出感度を向上させる方法として、アミド化反応によってシアリン酸を誘導体化し^[60]、また、イオン液体マトリックスがシアリル化オリゴ糖のMALDI/TOF MS分析中にシアリン酸の損失を減らすことを実証しました。^[61] THAP、^[62] DHAP、^[63]および2-アザ-2-チオチミンとフェニルヒドラジンの混合物^[64]は、グリコシル化ペプチドのMALDI MS分析中にシアリン酸の損失を最小限に抑えるために使用できるマトリックスとして特定されています。UV MALDIの代わりにIR MALDIを使用すると、いくつかの翻訳後修飾の損失を減らすことができると報告されています。^[65]

タンパク質以外にも、MALDI-TOFは脂質の研究にも応用されています。^[66]例えば、ホスホリパーゼの触媒反応の研究に応用されています。^{[67] [68]}脂質に加えて、オリゴヌクレオチドもMALDI-TOFによって特徴付けられています。例えば、分子生物学では、5-メトキシサリチル酸とスペルミンの混合物を、 MALDI質量分析法でのオリゴヌクレオチド分析のマトリックスとして使用することができます。 ^[69]例えば、オリゴヌクレオチド合成後。

カテナンやロタキサン、デンドリマーやハイパーブランチポリマーなどの合成高分子やその他アセンブリの中には、分子量が数千から数万に及ぶものもあり、ほとんどのイオン化技術では分子イオンを生成するのが困難です。MALDI は、化学者がそのような合成結果を迅速に分析し、その結果を検証できるシンプルで高速な分析方法です。^[要出典]

高分子化学では、MALDIはモル質量分布を決定するために使用できます。^[70]多分散度が1.2を超えるポリマーは、高質量オリゴマーに対する信号強度の識別のため、MALDIで特性評価することが困難です。^{[71] [72] [73]}

ポリマーに適したマトリックスはジトラノール^[74]またはAgTFA ^[75]です。サンプルは最初にジトラノールと混合し、その後AgTFAを追加する必要があります。そうしないと、サンプルが溶液から沈殿します。

MALDI-TOFスペクトルは、細菌や真菌などの微生物の同定によく使用されます。問題の微生物のコロニーの一部をサンプルターゲット上に配置し、マトリックスで覆います。生成された発現タンパク質の質量スペクトルは、専用のソフトウェアで分析され、バイオタイピングと呼ばれる方法で種の判定のために保存されたプロファイルと比較されます。これは他の免疫学的または生化学的手順に利点をもたらし、臨床微生物学研究室での種の同定の一般的な方法になっています。^{[76] [77]}フーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴質量分析法（FT-MSとも呼ばれる）で実行される高解像度MALDI-MSの利点は、プロテオタイピングと呼ばれる単一イオン検出によるウイルスのタイピングとサブタイピングで実証されており、特にインフルエンザウイルスに焦点を当てています。^[78]

他の微生物学的同定法に比べて大きな利点の 1 つは、低コストで、さまざまな微生物を、それらを分離するために使用した選択培地から直接、迅速かつ確実に同定できることです。疑わしいコロニーまたは「推定」コロニーを精製する必要がないため^[79]、処理時間が大幅に短縮されます。たとえば、MALDI-TOF は血液培養から直接細菌を検出できることが実証されています。^[80]

もう一つの利点は、細菌の抗生物質感受性を予測できる可能性があることです。単一の質量スペクトルピークから、黄色ブドウ球菌のメチシリン耐性を予測できます。^[81] MALDIは、カルバペネム耐性腸内細菌科のカルバペネマーゼも検出できます。[ ^{82 ] これには、}アシネトバクター・バウマニ^[83]やクレブシエラ・ニューモニエ^[ 84]が含まれます。しかし、抗生物質耐性を媒介するタンパク質のほとんどは、タンパク質ピークの解釈におけるMALDI-TOFの2000～20,000 Daの範囲よりも大きく、2011年にNIHで発生したクレブシエラ・ニューモニエ・カルバペネマーゼ（KPC）の発生のように、ピークと耐性付与タンパク質との相関関係が確認できるのはまれです。^[85]

MALDI-TOFスペクトルは、トリパノソーマ^[86] 、リーシュマニア^[87]、マラリア^[88]などのさまざまな寄生虫の検出と同定に使用されています。これらの単細胞寄生虫に加えて、MALDI / TOFはシラミ^[89]やセルカリア（自由遊泳期の吸虫）などの寄生昆虫の同定にも使用できます。^[90]

MALDI-TOF スペクトルは、病気の診断において他の分析や分光法と併用されることが多い。MALDI/TOF は、シーケンシングのコストや計算能力、X線結晶構造解析で結晶構造を解くのに必要なスキルや時間をかけずに、タンパク質やタンパク質の変化を迅速に特定できるため、大きな可能性を秘めた診断ツールである。^[要出典]

その一例が壊死性腸炎（NEC）で、これは未熟児の腸に影響を及ぼす壊死性腸炎である。NECの症状は敗血症の症状と非常に似ており、多くの乳児が診断と治療を待つ間に死亡する。MALDI/TOFはNEC陽性乳児の糞便中に存在する細菌を特定するために使用された。この研究はNECに関連する糞便微生物叢の特徴付けに焦点を当てており、病気のメカニズムについては触れていない。同様の技術が、配列決定を必要としない迅速な診断ツールとして使用できることが期待されている。^[91]

MALDI/TOFの診断力のもう一つの例は、がんの分野です。膵臓がんは、最も致命的で診断が難しいがんの1つです。^[92]膜タンパク質の変異による細胞シグナル伝達の障害が膵臓がんの一因であると長い間疑われてきました。 ^{[93] MALDI/TOFは、膵臓がんに関連する}膜タンパク質を特定するために使用されており、ある時点では早期発見技術としても役立つ可能性があります。^{[94] [非一次ソースが必要]}

MALDI/TOF は、診断だけでなく治療の決定にも使用できる可能性があります。MALDI/TOF は、細菌の薬剤耐性、特にβ-ラクタム(ペニシリン ファミリー) を判定する方法として役立ちます。MALDI/TOF は、標準的な抗生物質に対する薬剤耐性を示すカルバペネマーゼの存在を検出します。これは、わずか 3 時間で細菌が薬剤耐性であると特定する方法として役立つと予測されています。この技術は、医師が最初により強力な抗生物質を処方するかどうかを決定するのに役立ちます。^[95]

いくつかのペプチド-ペプチド複合体がMALDI沈着およびイオン化に耐えられるという初期の観察に続いて、^[96] MALDI-MSを用いた大きなタンパク質複合体の研究が報告されました。^{[97] [98]}

MALDIは大きな高分子によく使われる手法ですが、質量が1000 Da未満の小さな分子を分析することも可能です。小さな分子の場合の問題はマトリックス効果です。マトリックス自体が小さな分子で構成されていることが多いため、信号干渉、検出器の飽和、または分析対象信号の抑制が発生する可能性があります。マトリックスの選択は、分析する分子に大きく依存します。^{[99] [100]}

MALDIはソフトイオン化源であるため、さまざまな生体分子に使用されています。これにより、MALDIイメージング質量分析などの新しい用途にも使用されるようになりました。この技術により、生体分子の空間分布を画像化することができます。^[101]

• MALDIイメージング
• マトリックス（質量分析）
• PEG化
• ペプチド質量フィンガープリンティング