銀染色

病理学において、銀染色とは、組織切片の顕微鏡検査、温度勾配ゲル電気泳動、およびポリアクリルアミドゲルにおいて、銀を使用して標的の外観を選択的に変化させることです。

伝統的なステンドグラスでは、銀染料は銀化合物（特に硝酸銀）を含む混合物を加え、軽く焼くことで黄色からオレンジまたは茶色の色合い（または青いガラスのベースに緑色）を作り出す技法である。1800年以降すぐに導入され、「ステンドグラス」という用語の「染料」である。銀化合物^[1]を結合物質と混ぜ、ガラスの表面に塗布し、炉または窯で焼く。^{[2] [3] [4]}

カミロ・ゴルジは神経系の研究のために銀染色法を完成させた。この染色法がどのように起こるのか正確な化学的メカニズムは不明であるが、^[5] ゴルジ法は限られた数の細胞全体をランダムに染色する。^[6]

銀染色は、ゲル中の微量タンパク質を検出するための高感度な手法としてケレニとガリアスによって導入されました。^{[7]この技術は、さまざまな支持体で分離された他の生物学的}高分子の研究にも拡張されました。^[8]

従来のクマシーブリリアントブルー染色では通常 50 ng のタンパク質バンドを検出できますが、銀染色では感度が通常 50 倍に増加します。

多くの変数が色の強度に影響を与える可能性があり、すべてのタンパク質には独自の染色特性があります。清潔なガラス器具、純粋な試薬、最高純度の水が染色を成功させるための重要なポイントです。^[9]

いくつかの細胞は銀親和性です。これらの細胞は、ホルマリン固定後に銀溶液を金属銀に還元します。他の細胞は銀親和性です。これらの細胞は、還元剤（ハイドロキノンやホルマリンなど）を含む染色液にさらされた後、銀溶液を金属銀に還元します。

硝酸銀はリン酸イオンと反応して不溶性のリン酸銀を形成します。この方法はフォン コッサ染色として知られています。還元剤（通常はハイドロキノン）にさらされると、黒色の銀元素が形成されます。これは骨の成長中にリン酸カルシウム粒子が形成される過程の研究に使用されます。

銀染色は、金属銀粒子を目的の標的に沈着させることにより、 DNAやタンパク質などの細胞内および細胞外の細胞成分、例えばIII型コラーゲンや網状繊維などの標的の可視化を助けます。 ^[10]

シュードモナス^[11] 、レジオネラ、レプトスピラ、ピロリ菌、バルトネラ、トレポネーマ、ニューモシスチス、クリプトコッカス、カンジダなどの真菌は銀で染色される生物である。 ^[要出典]

銀染色は核型分析に使用されます。硝酸銀は核小体組織領域(NOR) 関連タンパク質を染色し、銀が沈着した暗い領域を生成し、NOR 内のrRNA遺伝子の活性を示します。ヒト染色体13、14、15、21、および 22 には NOR があり、銀染色活性を少なくとも 50 倍に高めます。^{[引用が必要]}

銀染色はゲルの染色に用いられる。アガロースゲル中のタンパク質の銀染色は、 1973年にケレニとガリアスによって開発された。^{[12]その後、} SDS-PAGEで使用されるポリアクリルアミドゲルに適応され、^{[13] [14] [15] [16] [17]}また、DNAやRNAの染色にも用いられるようになった。 ^[18]糖タンパク質と多糖類のグリコシル化は、4℃で0.1%の過ヨウ素酸で1時間前処理することで酸化することができ、銀イオンの結合と染色結果が改善される。^[19]

まず、ゲル内のタンパク質を10%酢酸と30%エタノールの固定液で変性させて沈殿させ、同時に洗剤（主にSDS）を抽出します。こうすることで、タンパク質の拡散が大幅に減少します。水で繰り返し洗浄した後、ゲルを硝酸銀溶液でインキュベートします。銀イオンはタンパク質の負に帯電した側鎖に結合します。次に、余分な銀イオンを水で洗い流します。最後の現像ステップでは、アルカリ性ホルムアルデヒドを加えて銀イオンを銀元素に還元します。これにより、タンパク質が存在する場所が茶色から黒に染まります。

染色の強度はタンパク質の一次構造に依存します。さらに、使用する容器の清潔さや試薬の純度も銀染色に影響します。^[20]銀染色ゲルによく見られるアーティファクトは、電気泳動前のサンプルの汚染として、 54～57 kDa および 65～68 kDa の範囲のケラチンのバンドです^{[21] 。}

メテナミンを組み込んだ銀染色には、次のようなものがあります。

• グロコットのメテナミン銀染色は、真菌 生物のスクリーニングとして広く使用されています。
• ジョーンズ染色は、基底膜を染色するメテナミン銀-過ヨウ素酸-シッフ染色であり、膜性糸球体腎炎に関連する「スパイク状の」GBM を観察するのに役立ちます。

• 
  肝生検におけるヒストプラズマ菌（黒い丸い球）を示す銀染色（GMS ）。
• 
  PCRを使用して増幅された DNA サンプル。サンプルは銀染色を使用して視覚化されています。
• 
  SDS-PAGEで分離し銀染色した赤血球膜タンパク質。 ^[22]

• ロヨラ医学教育 Histo/practical/stains/hp2-55.html
• [1] Hempelmann E. SDS-タンパク質PAGEおよび銀染色と免疫ブロット法によるマラリア原虫タンパク質の検出。Moll K、Ljungström J、Perlmann H、Scherf A、Wahlgren M（編）Methods in Malaria Research、第5版、2008年、263-266