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| 多電極凝集測定法 | |
|---|---|
 マルチプレートアナライザー | |
| 目的 | 血小板機能の判定 |
| テスト | 全血 |
マルチプレート多電極凝集測定法（MEA）は、全血中の血小板機能の検査です。[ 1 ] [ 2 ]この検査は、血小板疾患の診断[ 3 ] [ 4 ] [ 5 ]、抗血小板療法のモニタリング[ 6 ]に使用でき、心臓手術における輸血の必要性や出血リスクの潜在的な予測因子としても研究されています。[ 7 ]
マルチプレートMEAアナライザー（ロシュ・ダイアグノスティックス・インターナショナル社製）は、複数のサンプルまたはアゴニストを同時に測定するための5つのチャンネルを備えています。この装置は、テストキュベット内の金属電極上で血小板が凝集した際の電気インピーダンスの変化を検出します。各キュベットには2対のセンサー電極があり、それぞれがインピーダンスの変化を測定します。重複するセンサーは統合された品質管理として機能し、測定値の相関係数が0.98より大きい場合に分析が受け入れられます。各曲線と平均曲線との差も計算され、20%未満の差が許容されます。テストキュベットには、テフロンコーティングされたマグネチックスターラーバーも含まれています。凝集が起こるとインピーダンスが増加し、それが凝集単位（AU）に変換されて、コンピュータ画面に時間に対してプロットされます。
製造元は、検査対象サンプルの抗凝固剤としてヒルジンの使用を推奨していますが、研究ではヘパリンが良い代替品であることが示されています。[ 8 ] [ 9 ]各分析には 300 μL の血液が必要で、同量の生理食塩水で希釈します。血液と生理食塩水をキュベットにピペットで入れた後、選択したアゴニストを加える前に 3 分間テストをインキュベートします。次にテストを開始し、血小板凝集を 6 分間、約 0.5 秒間隔で記録します。3 つのパラメータが計算されます。凝集、速度、および曲線下面積(AUC)。凝集 (AU 単位) は凝集曲線の最大高さであり、速度 (AU/分単位) は曲線の最大傾斜です。AUC は最も重要なパラメータです。これは単位 (U) で記録され、凝集曲線の高さと傾斜の両方の影響を受け、血小板活性の最良の全体的な尺度です。
アデノシン二リン酸（ADP）は血小板アゴニストです。試験用キュベット内の生理食塩水で希釈した全血にADPを加えると、血小板上のADP受容体を刺激し、血小板を活性化します。血小板の活性化は形状変化と脱顆粒を引き起こし、顆粒から放出された内容物がさらに血小板を活性化します。活性化はまた、糖タンパク質IIb/IIIa （GPIIb/IIIa）受容体の構造変化を誘発し、フィブリノゲンに対する高い親和性をもたらします。フィブリノゲンがGPIIb/IIIa受容体に結合すると、血小板間の架橋が形成され、血小板凝集が起こります。クロピドグレルやプラスグレルなどの抗血小板薬は、 ADP受容体P2Y12を不可逆的に阻害し、ADP誘発性血小板凝集を減少させます。 GPIIb/IIIa受容体を阻害する薬剤、例えばエプチフィバチドは、ADP誘発血小板反応を減少または消失させることもできる。[ 11 ]
ASPItestでは、生理食塩水で希釈した血液サンプルにアラキドン酸が添加されます。アラキドン酸はシクロオキシゲナーゼ-1 （COX1）によってプロスタグランジンH2（PGH2）に変換され、PGH2はトロンボキサンシンターゼによってトロンボキサンA2（TXA2）に変換されます。TXA2は血小板凝集を増加させ、脱顆粒を促進し、血小板活性化を刺激します。アセチルサリチル酸によるCOX1の阻害、およびグランツマン血小板無力症に見られるGPIIb/IIIa受容体の阻害または欠如は、アラキドン酸に対する血小板凝集を減少させます。[ 12 ]
コラーゲンはサンプル生理食塩水混合液に添加され、血小板上のコラーゲン受容体に結合します。これによりアラキドン酸が放出され、強力な血小板活性化因子であるTXA2に変換されます。COLtestはCOX1およびGPIIb/IIIaの阻害、ならびにグランツマン血小板無力症に感受性があります。[ 13 ]
リストセチンはフォン・ヴィルブランド因子（vWF）と複合体を形成し、血小板上の糖タンパク質Ib （GP1b）受容体に結合することで、血小板の活性化と凝集を引き起こします。リストセチンに対する凝集反応の低下または消失は、フォン・ヴィルブランド病（vWD）に見られるようにvWFの欠乏または減少、あるいはベルナール・スーリエ症候群（BSS）に見られるようにGP1b受容体の欠乏または減少によって引き起こされる可能性があります。RISTOテストは、RISTOhighとRISTOlowの2つの濃度で実施できます。RISTOhighでは、0.77 mg/mLのリストセチン濃度 が適用されます。これは通常、強い血小板凝集を誘発しますが、凝集の低下または消失は、前述のvWDおよびBSSの状態によって引き起こされる可能性があります。[ 14 ] RISTOlowでは、リストセチン濃度はわずか0.2 mg/mLで、通常は強い凝集反応を誘発しないレベルです。この検査では、vWFが通常よりも強い血小板凝集傾向を示すかどうかを検出できます。これは、vWDIIbと呼ばれるvWDのサブタイプで見られます。[ 15 ]
トロンビン受容体活性化ペプチド-6（TRAP-6）は、トロンビン受容体プロテアーゼ活性化受容体-1（PAR-1）を介して血小板を活性化します。TRAP-6がPAR-1に結合すると、血小板上のGPIIb/IIIa受容体の構造変化が起こり、フィブリノゲンに対する親和性が向上します。その後、フィブリノゲンが受容体に結合し、複数の血小板を架橋して凝集を引き起こします。TRAPtestにおける凝集は、GPIIb/IIIa受容体が少ないか存在しないグランツマン血小板無力症、または患者がGPIIb/IIIa拮抗薬を服用している場合、減少または消失する可能性があります。TRAPtestは、COX1およびADP受容体の阻害に対する感度が低いです。[ 16 ]
血液サンプルにASA（アセチルサリチル酸）試薬を加えると、ASPItestおよびCOLtestにおける凝集反応が低下します。ASAは血小板中のCOX1を不可逆的に阻害し、TXA2の産生を阻害します。ASA試薬は、Multiplateを用いた血小板機能検査の品質管理に使用され、ASPItestおよびCOLtestにおける異常な血小板反応の評価を可能にします。[ 17 ]
この試薬は、マルチプレート血小板機能検査の品質管理に使用されます。GPIIb/IIIa拮抗薬は、フィブリノゲンとGPIIb/IIIa受容体との結合を阻害し、血小板とフィブリノゲンの結合形成を妨げ、すべての作動薬に対する血小板凝集反応を大幅に低下させます。拮抗薬試薬はTRAPテストと併用され、陽性対照の評価を可能にします。[ 18 ]
プロスタグランジンE1（PGE1）は、アデニル酸シクラーゼ活性を刺激することにより血小板中の環状アデノシン一リン酸（cAMP）を増加させる血小板阻害物質です。cAMPは細胞内シグナル伝達分子であり、cAMPの増加はADP受容体P2Y1の活性化によって誘発されるカルシウム動員と血小板凝集を阻害します。P2Y1受容体の活性化は、ADPに対する血小板凝集を開始させます。P2Y1受容体はADP誘発性血小板活性化に必要ですが、ADPに対する完全な血小板凝集には十分ではありません。[ 19 ] cAMPは血小板凝集を阻害し、血小板中のcAMP量の減少は血小板凝集につながります。[ 20 ] PGE1試薬は、ADP高感度（HS）の評価とADPテストの陽性コントロールの評価という2つの目的でADPテストと併用されます。 ADPテストに少量のPGE1（20μL）を加えると、正常サンプルでは凝集が中程度に阻害されますが、クロピドグレルによる血小板阻害に対する感受性が大幅に高まります。これが、この改良されたテストが「高感度」と呼ばれる理由です。ADPテストに50μLのPGE1を加えると、ADP誘発凝集が強く阻害され、ADPテストの陽性コントロールの評価に使用されます。[ 21 ]