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| クームス試験 | |
|---|---|
| メッシュ | D003298 |
| メドラインプラス | 003344 |
直接クームス試験と間接クームス試験（抗グロブリン試験（AGT ）とも呼ばれる）は、免疫血液学で使用される血液検査です。直接クームス試験は、赤血球の表面に付着している抗体を検出します。[ 1 ]これらの抗体は赤血球を破壊することがあるため、貧血を引き起こす可能性があります。この検査は、貧血の状態を明確にするのに役立ちます。間接クームス試験は、血液中に自由に浮遊している抗体を検出します。[ 1 ]これらの抗体は特定の赤血球に対して作用する可能性があり、この検査は輸血に対する反応を診断するために実施できます。[ 1 ]
直接クームス試験は、自己免疫性溶血性貧血（免疫系が赤血球を破壊し、貧血を引き起こす状態）の検査に用いられます。この検査では、赤血球の表面に付着した抗体または補体タンパク質を検出します。検査を行うには、血液サンプルを採取し、赤血球を洗浄（患者の血漿と赤血球から結合していない抗体を除去）した後、抗ヒトグロブリン（「クームス試薬」）とインキュベートします。赤血球が凝集すれば検査は陽性となり、抗体または補体タンパク質が赤血球の表面に結合し、赤血球の破壊を引き起こしている可能性があることを視覚的に示します。
間接クームス試験は、妊婦の出生前検査や輸血前の検査に用いられます。この検査では、異種赤血球に対する抗体を検出します。この場合、患者から採取した血液サンプルから血清を抽出します。抽出した血清を既知の抗原性を持つ異種赤血球とインキュベートします。最後に、抗ヒトグロブリンを添加します。凝集反応が起こった場合、間接クームス試験は陽性となります。[ 2 ]
2つのクームス試験は、抗ヒト抗体がヒト抗体（一般的にはIgGまたはIgM）に結合することに基づいています。これらの抗ヒト抗体は、ヒト血漿で免疫した非ヒト動物の形質細胞によって産生されます。さらに、これらの抗ヒト抗体は、赤血球（RBC）表面の抗原に固定されている可能性のあるヒト抗体にも結合します。適切な試験管条件下では、これにより赤血球の凝集が起こり、結果として生じる赤血球の塊を視覚化することができます。凝集が見られる場合はクームス試験は陽性、見られない場合は陰性です。[ 3 ]
クームス試験の一般的な臨床用途には、交差適合試験における輸血用血液の準備、妊婦健診の一環としての妊婦の血漿中の非定型抗体の検査、および免疫介在性溶血性貧血の診断のための抗体の検出などがある。[ 4 ]
クームス試験は、患者から静脈穿刺によって採取した静脈全血サンプルから、赤血球または血清（それぞれ直接法または間接法）を用いて実施されます。採取された静脈血は検査室（または血液バンク）に運ばれ、そこで訓練を受けた科学技術スタッフがクームス試験を行います。試験結果の臨床的意義は、クームス試験を依頼した医師が、場合によっては検査室に所属する血液専門医の助言を受けながら評価します。
直接クームス試験（直接抗グロブリン試験（DAT）とも呼ばれる）は、抗体または補体系因子が赤血球表面抗原に結合しているかどうかを検出するために使用されます。[ 5 ] DATは輸血前検査には必須ではありませんが[ 6 ] 、一部の検査室では実施される場合があります。輸血前には、間接クームス試験がよく行われます。
直接クームス試験は、免疫介在性溶血性貧血（抗体による赤血球の破壊）が疑われる場合に臨床的に使用されます。クームス試験が陽性の場合、免疫機構が患者の赤血球を攻撃していることを示します。この機構は、自己免疫、同種免疫、または薬剤誘発性免疫介在性機構である可能性があります。[ 3 ]
（DATが赤血球を検査し、新生児溶血性疾患の検査に用いられることを覚えるための記憶術は、 「R h D isease ; R = RBCs、D = DAT」です 。）
患者の赤血球を洗浄（患者自身の血清を除去）した後、抗ヒトグロブリン（クームス試薬とも呼ばれる）を用いて遠心分離します。免疫グロブリンまたは補体因子が試験管内で赤血球表面に固定されている場合、抗ヒトグロブリンは赤血球を凝集させ、直接クームス試験は陽性となります。（直接クームス試験が陽性となる様子は、模式図の上半分に示されています。）
間接クームス試験（間接抗グロブリン試験（IAT）とも呼ばれる）は、体外での抗体-抗原反応を検出するために用いられます。輸血前に患者の血漿/血清中に存在する非常に低濃度の抗体を検出するために用いられます。妊婦健診では、新生児溶血性疾患を引き起こす可能性のある抗体を妊婦からスクリーニングするためにIATが用いられます。IATは、適合性試験、抗体同定、赤血球表現型検査、および滴定試験にも使用できます。
間接クームス試験は、輸血用血液の準備において抗体をスクリーニングするために用いられます。献血者と受血者の血液は、ABO式血液型とRh D型が適合していなければなりません。輸血用献血血液は、別の工程で感染症のスクリーニングも行われます。
受血者の血液サンプルと、ドナー血液の各単位から採取した血液サンプルについて、間接クームス試験を用いて抗体の有無を検査します。各サンプルは、表面抗原（すなわち血液型）の全範囲を示す広範囲の赤血球に対して培養されます。
間接クームス試験は、受血者の血清サンプルを、献血者の赤血球サンプルに対する抗体の有無を調べるために用いられる。これは、血液の交差適合試験とも呼ばれる。
間接クームス試験は、胎盤を通過して胎児の血液に移行し、新生児溶血性疾患を引き起こす可能性のあるIgG抗体を妊婦からスクリーニングするために使用されます。
IATは2段階の検査です。（図の下半分には、間接クームス試験の例としてクロスマッチが視覚的に示されています。）
既知の抗原を持つ、洗浄済みの非患者由来赤血球（RBC）を、未知の抗体含有量を含む患者血清とインキュベートする。血清中にRBC表面の抗原に対する抗体が含まれている場合、その抗体はRBCの表面に結合する。
赤血球を等張生理食塩水で3～4回洗浄した後、抗ヒトグロブリンとインキュベートします。最初の段階で抗体が赤血球表面抗原に結合していれば、この段階で抗ヒトグロブリン（クームス試薬とも呼ばれる）とインキュベートすると赤血球が凝集し、間接クームス試験は陽性となります。
抗体を含む血清を希釈することで、血清中の抗体量を測定することができる。これは、血清を段階的に希釈し、関連する赤血球の凝集を引き起こすことができる試験血清の最大希釈度を求めることによって行われる。
クームス試薬（クームス抗グロブリンまたは抗ヒトグロブリンとも呼ばれる）は、直接クームス試験と間接クームス試験の両方で使用されます。その製造過程では、ヒトグロブリンを動物に注射し、動物がヒト免疫グロブリンおよびヒト補体因子に特異的なポリクローナル抗体を産生します。より特異性の高いクームス試薬やモノクローナル抗体を使用することも可能です。
IgM抗体とIgG抗体はどちらも、相補的な抗原と強く結合します。IgG抗体 は37 ℃で最も反応性が高くなります。IgM抗体は、その大きさから赤血球間を架橋できるため、室温で生理食塩水中で容易に検出でき、凝集として観察される現象を効率的に作り出します。IgG抗体は小さいため、視覚的に凝集反応を形成するのに十分な架橋を形成するには補助が必要です。IgG検出を強化するために使用される試薬は、増強剤と呼ばれます。赤血球は、ゼータ電位と呼ばれる正味の負電荷を持ち、そのため互いに自然に反発します。増強剤は、赤血球膜のゼータ電位を低下させます。一般的な増強剤には、低イオン強度溶液（LISS）、アルブミン、ポリエチレングリコール（PEG）、およびタンパク質分解酵素などがあります。
クームス試験は、1945年にケンブリッジ大学の免疫学者ロビン・クームス（この試験名の由来となった）、アーサー・モーラント、ロブ・レースによって初めて記述された。[ 8 ]歴史的には試験管で行われていたが、今日では自動化された固相法またはゲル法を用いて行われるのが一般的である。