熱安定性

*Thermotoga neapolitana*由来のβ-グルコシダーゼの結晶構造（PDB：5IDI）。耐熱性タンパク質で、80℃で活性を示し、変性温度は101℃である。^[¹^]

材料科学や分子生物学において、熱安定性とは、物質が相対的に高い温度において、化学的または物理的構造の不可逆的な変化に抵抗する能力であり、多くの場合、分解や重合に抵抗することによって実現される。

耐熱性材料は、工業的に難燃剤として使用されることがある。耐熱性プラスチックという、一般的ではない用語は、加熱しても再成形できない熱硬化性プラスチックを指す可能性が高く、再溶解や再成形が可能な熱可塑性プラスチックを指すことはない。

熱安定性は、一部のタンパク質が持つ性質の一つです。熱安定性タンパク質とは、加えられた熱によるタンパク質構造の変化に抵抗力を持つタンパク質のことです。

耐熱性タンパク質

地球上のほとんどの生命体は、50 °C 未満の温度、一般的には 15 ～ 50 °C の温度で生活しています。これらの生物の内部には、酵素活性に不可欠な三次元構造を形成する高分子 (タンパク質と核酸) があります。^{[ 2 ]}生物の本来の温度を超えると、熱エネルギーによって三次構造と四次構造の分子内結合が破壊されるため、展開と変性が起こる可能性があります。この展開は酵素活性の喪失につながり、当然ながら生命機能の継続に有害です。その一例として、透明でほぼ無色の液体であるアルブミン中のタンパク質が変性して、不透明な白色の不溶性ゲルになることが挙げられます。

このような高温に耐えられるタンパク質は、そうでないタンパク質に比べて、一般的に超好熱性微生物に由来します。このような生物は通常85 ℃以上の環境で生活しているため、50℃を超える温度に耐えることができます。 ^[³^]特定の好熱性生物は、これを超える温度に耐えることができ、これらの温度でタンパク質の機能を維持するための対応する適応を備えています。^[⁴^]これには、すべてのタンパク質を安定させるための細胞全体の特性の変化^[⁵^]、および個々のタンパク質の特定の変化が含まれます。これらの好熱性生物と他の生物に存在する相同タンパク質を比較すると、タンパク質構造にいくつかの違いが見られます。注目すべき違いの1つは、好熱性生物のタンパク質に余分な水素結合が存在することです。これは、タンパク質構造がほどけにくいことを意味します。同様に、耐熱性タンパク質は、構造を安定させる塩橋や余分なジスルフィド結合が豊富です。 ^[⁶^]^[⁷^]タンパク質の熱安定性の他の要因としては、タンパク質構造のコンパクトさ、^[⁸^]オリゴマー化、^[⁹^]およびサブユニット間の相互作用の強さが挙げられる。

用途と応用例

ポリメラーゼ連鎖反応

TaqポリメラーゼやPfu DNAポリメラーゼなどの耐熱性DNAポリメラーゼは、 PCRの変性ステップで94 ℃以上の温度を用いてDNA鎖を融解させるポリメラーゼ連鎖反応（PCR）で使用されます。 ^[¹⁰^]この高温耐性により、DNAポリメラーゼはdNTPの存在下で目的の配列を持つDNAを伸長することができます。

飼料添加物

酵素は、家畜、特に鶏や豚の健康と成長を改善するために、動物飼料によく添加されます。飼料は通常、サルモネラ菌などの細菌を殺すために高圧蒸気で処理されます。したがって、添加される酵素（フィターゼやキシラナーゼなど）は、不可逆的に不活性化されることなく、この熱的負荷に耐えることができなければなりません。^{[ 11 ]}

タンパク質精製

酵素の高温耐性に関する知識は、タンパク質の精製において特に有益である。熱変性法では、タンパク質の混合物を高温にさらすことで、熱安定性のないタンパク質を変性させ、熱力学的に安定なタンパク質を分離することができる。この顕著な例の1つは、超好熱菌Pyrococcus abyssiからのアルカリホスファターゼの精製に見られる。この酵素は 95 °C を超える温度で熱安定性があることが知られており、そのため、 E. coliで異種発現させたときに加熱することで部分的に精製することができる。^[¹²^]温度の上昇により、 E. coli のタンパク質は沈殿するが、P. abyssi のアルカリホスファターゼは溶液中に安定して残る。

グリコシド加水分解酵素

耐熱性酵素のもう 1 つの重要なグループはグリコシドヒドロラーゼです。これらの酵素は、バイオマスの主要部分であるデンプンやリグノセルロースに含まれる多糖類の分解を担っています。そのため、グリコシドヒドロラーゼは将来のバイオエコノミーにおけるバイオリファイナリー用途で大きな注目を集めています。^{[ 13 ]}いくつかの例としては、食品用途向けの単糖類の生産、燃料 (エタノール) や化学中間体への微生物変換の炭素源としての利用、プレバイオティクス用途向けのオリゴ糖の生産、アルキルグリコシド型界面活性剤の生産などがあります。これらのプロセスはすべて、多糖類の加水分解を促進するために熱処理を伴うことが多く、そのため、この文脈では耐熱性グリコシドヒドロラーゼの変異体が重要な役割を果たします。

タンパク質の熱安定性を向上させるためのアプローチ

タンパク質工学は、タンパク質の熱安定性を向上させるために使用できます。標的タンパク質の熱安定性を高めるために、多くの部位特異的変異誘発法やランダム変異誘発法^{[ 14 ]}^{[ 15 ]}、指向性進化^{[ 16 ]}が使用されてきました。好熱性相同体との比較に基づいて中温性タンパク質の安定性を高めるために比較法が使用されています^[¹⁷^]^[¹⁸^]^[¹⁹^]^[²⁰^] 。さらに、分子動力学によるタンパク質のアンフォールディングの解析を使用して、アンフォールディングのプロセスを理解し、安定化変異を設計することができます^[²¹^] 。タンパク質の熱安定性を高めるための合理的なタンパク質工学には、ループを切り詰める変異、塩橋^[²²^]または水素結合を増やす変異、ジスルフィド結合を導入する変異^[²³^]が含まれます。さらに、リガンド結合は、特に精製時にタンパク質の安定性を高めることができます。^[²⁴^]特定のタンパク質の熱安定性を可能にするさまざまな力があります。これらの力には、疎水性相互作用、静電相互作用、およびジスルフィド結合の存在が含まれます。特定のタンパク質に存在する疎水性の総量が、その熱安定性に関係しています。タンパク質の熱安定性に関係するもう 1 つのタイプの力は、分子間の静電相互作用です。これらの相互作用には、塩橋と水素結合が含まれます。塩橋は高温の影響を受けないため、タンパク質と酵素の安定性に必要です。タンパク質と酵素の熱安定性を高めるために使用される 3 番目の力は、ジスルフィド結合の存在です。これらは、ポリペプチド鎖間の共有結合架橋を形成します。これらの結合は共有結合であるため、分子間力よりも強く、最も強い結合です。^[²⁵^]グリコシル化は、タンパク質の熱安定性を向上させるもう 1 つの方法です。炭水化物とタンパク質の間の相互作用を安定化させる立体電子効果は、糖タンパク質の熱安定化につながる可能性がある。^[²⁶^] N末端をC末端に共有結合させることで酵素を環状化することは、多くの酵素の熱安定性を高めるために応用されている。インテイン環化とSpyTag/SpyCatcher環化がよく用いられてきた。^{[ 27 ]}^{[ 28 ]}

耐熱性毒素

特定の有毒菌類には、タマゴテングタケやオウゴンタケに含まれるアマトキシンやカビに含まれるパツリンなどの耐熱性毒素が含まれています。そのため、これらに熱を加えても毒性は除去されず、食品の安全性に関して特に懸念されます。^[²⁹^]

参考文献

↑ Kulkarni TS、Khan S、Villagomez R、Mahmood T、Lindahl S、Logan DT、et al. (2017 年 5 月)。「Thermotoga neapolitana 由来の β-グルコシダーゼ 1A の結晶構造とフラボノイド配糖体の加水分解に対する活性部位変異体の比較」。Proteins。85 ( 5 ) : 872– 884。doi : 10.1002 / prot.25256。PMID 28142197。S2CID 27832389。
↑ Kandhari N、Sinha S (2017年6月26日) 「枯草菌リパーゼAの耐熱性変異体の複雑ネットワーク解析」 . Applied Network Science . 2 (1): 18. doi : 10.1007/s41109-017-0039- y . PMC 6214246. PMID 30443573 .
↑ Danson MJ、Hough DW、Russell RJ、Taylor GL、Pearl L (1996 年 8 月)。「酵素の熱安定性と熱活性」。Protein Engineering。9 ( 8): 629–630。doi : 10.1093/protein / 9.8.629。PMID 8875639。
↑ Takami H, Takaki Y, Chee GJ, Nishi S, Shimamura S, Suzuki H, et al. (2004). "Thermoadaptation trait revealed by the genome sequence of thermophilic Geobacillus kaustophilus" . Nucleic Acids Research . 32 (21): 6292– 6303. doi : 10.1093/nar/gkh970 . PMC 535678 . PMID 15576355 .
↑ Neves C 、 da Costa MS、Santos H (2005 年 12月)。「超好熱菌 Palaeococcus ferrophilusの適合溶質: Thermococcales 目における浸透圧適応と温度適応」。Applied and Environmental Microbiology。71 ( 12 ): 8091–8098。Bibcode : 2005ApEnM..71.8091N。doi : 10.1128 / AEM.71.12.8091-8098.2005。PMC 1317470。PMID 16332790。
↑ Das R、Gerstein M (2000 年 5 月)。「好熱性タンパク質の安定性：包括的なゲノム比較に基づく研究」。Functional & Integrative Genomics。1 ( 1): 76–88。doi : 10.1007/ s101420000003。PMID 11793224。S2CID 2717885。
↑ Matsumura M, Becktel WJ, Levitt M, Matthews BW (1989年9月). "人工ジスルフィド結合によるファージT4リゾチームの安定化" . Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America . 86 (17): 6562– 6566. Bibcode : 1989PNAS...86.6562M . doi : 10.1073/pnas.86.17.6562 . PMC 297884 . PMID 2671995 .
↑ Thompson MJ、Eisenberg D (1999年7月)。「タンパク質の熱安定性を高めるループ欠失メカニズムのトランスプロテオミクスによる証拠」。Journal of Molecular Biology。290 ( 2): 595–604。doi : 10.1006 /jmbi.1999.2889。PMID 10390356。
↑ Tanaka Y, Tsumoto K, Yasutake Y, Umetsu M, Yao M, Fukada H, et al. (2004年7月). "古細菌タンパク質の熱安定性に対するオリゴマー化の寄与。Sulfolobus tokodaii由来のタンパク質L-イソアスパルチル-O-メチルトランスフェラーゼ" . The Journal of Biological Chemistry . 279 (31): 32957– 32967. doi : 10.1074/jbc.M404405200 . PMID 15169774 .
↑ Saiki RK、Gelfand DH、Stoffel S、Scharf SJ、Higuchi R、Horn GT、et al . (1988年1月)。「耐熱性 DNA ポリメラーゼを用いたプライマー指向型 DNA 酵素増幅法」。Science。239 ( 4839 ) : 487–491。Bibcode : 1988Sci ... 239..487S。doi : 10.1126 /science.239.4839.487。PMID 2448875。
↑ Corrêa TL、 de Araújo EF (2020年9月)。「真菌フィターゼ：遺伝子から応用まで」。Brazilian Journal of Microbiology。51 ( 3): 1009–1020。doi : 10.1007/ s42770-020-00289 - y。PMC 7455620。PMID 32410091。
↑ Zappa S、Rolland JL 、Flament D、Gueguen Y、Boudrant J、Dietrich J (2001 年 10 月)。「ユーリ古細菌Pyrococcus abyssi 由来の高耐熱性アルカリホスファターゼの特性評価」。Applied and Environmental Microbiology。67 ( 10 ) : 4504–4511。Bibcode : 2001ApEnM..67.4504Z。doi : 10.1128 / AEM.67.10.4504-4511.2001。PMC 93196。PMID 11571149。
↑ Linares-Pasten JA、Andersson M 、N Karlsson E (2014)。「バイオリファイナリー技術における耐熱性グリコシドヒドロラーゼ」。Current Biotechnology。3 ( 1): 26–44。doi : 10.2174 / 22115501113026660041。
↑ Sarkar CA、Dodevski I、Kenig M、Dudli S、Mohr A、Hermans E、Plückthun A (2008 年 9 月)。「発現、安定性、および結合選択性のための G タンパク質共役受容体の指向性進化」。米国科学アカデミー紀要。105 (39 ) : 14808–14813。Bibcode : 2008PNAS..10514808S。doi : 10.1073 / pnas.0803103105。PMC 2567449。PMID 18812512。
↑ Asial I、Cheng YX、Engman H、Dollhopf M、Wu B、Nordlund P、Cornvik T (2013)。「細胞内で汎用的な活性非依存的な生物物理学的スクリーニングを用いてタンパク質の熱安定性をエンジニアリングする」。Nature Communications。4：2901。Bibcode ： 2013NatCo ... 4.2901A。doi ： 10.1038 / ncomms3901。PMID 24352381。
↑ Hoseki J, Yano T, Koyama Y, Kuramitsu S, Kagamiyama H (1999年11月). "耐熱性カナマイシン耐性遺伝子の指向性進化：Thermus thermophilusの便利な選択マーカー" . Journal of Biochemistry . 126 (5): 951– 956. doi : 10.1093/oxfordjournals.jbchem.a022539 . PMID 10544290 .
↑ Sayed A、Ghazy MA、Ferreira AJ、Setubal JC、Chambergo FS、Ouf A、et al. (2014 年 1 月)。「紅海のアトランティス II の独特な深層塩水環境から発見された新規水銀還元酵素」。The Journal of Biological Chemistry。289 ( 3 ): 1675–1687。doi : 10.1074 / jbc.M113.493429。PMC 3894346。PMID 24280218。
↑ Perl D、 Mueller U、Heinemann U、Schmid FX (2000 年 5 月)。「2つの露出したアミノ酸残基が低温ショックタンパク質に熱安定性を与える」。Nature Structural Biology。7 ( 5 ) : 380–383。doi : 10.1038 / 75151。PMID 10802734。S2CID 21850845。
↑リーマン M、パサモンテス L、ラッセン SF、ウィス M (2000 年 12 月)。「タンパク質の熱安定性工学に関するコンセンサスコンセプト」。Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - タンパク質構造と分子酵素学。1543 (2): 408–415 .土井: 10.1016/s0167-4838(00)00238-7。PMID 11150616。
↑ Sauer DB、Karpowich NK 、Song JM、Wang DN (2015 年 10 月)。「熱安定化変異の迅速なバイオインフォマティクスによる同定」。Biophysical Journal。109 ( 7 ) : 1420–1428。Bibcode : 2015BpJ ... 109.1420S。doi : 10.1016 / j.bpj.2015.07.026。PMC 4601007。PMID 26445442。
↑ Liu HL、Wang WC（2003年1月）。「分子動力学シミュレーションに基づくアスペルギルス・アワモリ由来グルコアミラーゼの熱安定性を向上させるためのタンパク質工学」。Protein Engineering。16 （ 1 ）：19–25。doi：10.1093/proeng / gzg007。PMID 12646689。
↑ Lee CW, Wang HJ, Hwang JK, Tseng CP (2014). "塩橋の設計によるタンパク質の熱安定性向上：計算と実験を組み合わせた研究" . PLOS ONE . 9 (11) e112751. Bibcode : 2014PLoSO...9k2751L . doi : 10.1371/journal.pone.0112751 . PMC 4231051 . PMID 25393107 .
↑ Mansfeld J、Vriend G、Dijkstra BW、Veltman OR、Van den Burg B、Venema G、et al. (1997 年 4 月) 「人工的に導入したジスルフィド結合によるサーモリシン様プロテアーゼの極めて高い安定化」 The Journal of Biological Chemistry . 272 (17): 11152– 11156. doi : 10.1074/jbc.272.17.11152 . PMID 9111013 .
↑ Mancusso R、Karpowich NK、Czyzewski BK、Wang DN (2011年12月)。「膜タンパク質の熱安定性を向上させるための簡単なスクリーニング法」。Methods。55 ( 4 ) : 324–329。doi : 10.1016 / j.ymeth.2011.07.008。PMC 3220791。PMID 21840396。
↑ Tigerström A (2005). "タンパク質の熱安定性". BIOS . 76 (1): 22– 27. doi : 10.1893/0005-3155(2005)076 [ 0022:TBFTOP ] 2.0.CO ; 2 . JSTOR 4608725 . S2CID 85654007 .
↑ Ardejani MS、Noodleman L、Powers ET、Kelly JW (2021 年 5 月)。「実験と機械学習によって明らかになった、タンパク質と N- グリカンの相互作用を安定化させる立体電子効果」。Nature Chemistry。13 ( 5 ) : 480–487。Bibcode : 2021NatCh..13..480A。doi : 10.1038 / s41557-021-00646- w。PMC 8102341。PMID 33723379。
↑ Iwai H, Plückthun A (1999年10月). "環状β-ラクタマーゼ：骨格の環状化による安定性向上" . FEBS Letters . 459 (2): 166– 172. Bibcode : 1999FEBSL.459..166I . doi : 10.1016/s0014-5793(99)01220-x . PMID 10518012 . S2CID 85415249 .
↑ Keeble AH、Howarth M (2020年7月)。「タンパク質に力を：Spyツールボックスを使用した活性の強化と組み合わせ」。Chemical Science。11 ( 28 ) : 7281–7291。doi : 10.1039 / d0sc01878c。PMC 7844731。PMID 33552459。
↑ Aleccia JN (2011年11月4日) 「FDA：学校給食業者がカビの生えたアップルソースを再包装」 NBCニュース。 2015年4月15日閲覧。

外部リンク

タンパク質の熱安定性（ 2016年6月22日にWayback Machineにアーカイブ済み）

[1] Kulkarni TS、Khan S、Villagomez R、Mahmood T、Lindahl S、Logan DT、et al. (2017 年 5 月)。「Thermotoga neapolitana 由来の β-グルコシダーゼ 1A の結晶構造とフラボノイド配糖体の加水分解に対する活性部位変異体の比較」。Proteins。85 ( 5 ) : 872– 884。doi : 10.1002 / prot.25256。PMID 28142197。S2CID 27832389。

[2] Kandhari N、Sinha S (2017年6月26日) 「枯草菌リパーゼAの耐熱性変異体の複雑ネットワーク解析」 . Applied Network Science . 2 (1): 18. doi : 10.1007/s41109-017-0039- y . PMC 6214246. PMID 30443573 .

[pmid8875639-3] Danson MJ、Hough DW、Russell RJ、Taylor GL、Pearl L (1996 年 8 月)。「酵素の熱安定性と熱活性」。Protein Engineering。9 ( 8): 629–630。doi : 10.1093/protein / 9.8.629。PMID 8875639。

[4] Takami H, Takaki Y, Chee GJ, Nishi S, Shimamura S, Suzuki H, et al. (2004). "Thermoadaptation trait revealed by the genome sequence of thermophilic Geobacillus kaustophilus" . Nucleic Acids Research . 32 (21): 6292– 6303. doi : 10.1093/nar/gkh970 . PMC 535678 . PMID 15576355 .

[5] Neves C 、 da Costa MS、Santos H (2005 年 12月)。「超好熱菌 Palaeococcus ferrophilusの適合溶質: Thermococcales 目における浸透圧適応と温度適応」。Applied and Environmental Microbiology。71 ( 12 ): 8091–8098。Bibcode : 2005ApEnM..71.8091N。doi : 10.1128 / AEM.71.12.8091-8098.2005。PMC 1317470。PMID 16332790。

[6] Das R、Gerstein M (2000 年 5 月)。「好熱性タンパク質の安定性：包括的なゲノム比較に基づく研究」。Functional & Integrative Genomics。1 ( 1): 76–88。doi : 10.1007/ s101420000003。PMID 11793224。S2CID 2717885。

[7] Matsumura M, Becktel WJ, Levitt M, Matthews BW (1989年9月). "人工ジスルフィド結合によるファージT4リゾチームの安定化" . Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America . 86 (17): 6562– 6566. Bibcode : 1989PNAS...86.6562M . doi : 10.1073/pnas.86.17.6562 . PMC 297884 . PMID 2671995 .

[8] Thompson MJ、Eisenberg D (1999年7月)。「タンパク質の熱安定性を高めるループ欠失メカニズムのトランスプロテオミクスによる証拠」。Journal of Molecular Biology。290 ( 2): 595–604。doi : 10.1006 /jmbi.1999.2889。PMID 10390356。

[9] Tanaka Y, Tsumoto K, Yasutake Y, Umetsu M, Yao M, Fukada H, et al. (2004年7月). "古細菌タンパク質の熱安定性に対するオリゴマー化の寄与。Sulfolobus tokodaii由来のタンパク質L-イソアスパルチル-O-メチルトランスフェラーゼ" . The Journal of Biological Chemistry . 279 (31): 32957– 32967. doi : 10.1074/jbc.M404405200 . PMID 15169774 .

[10] Saiki RK、Gelfand DH、Stoffel S、Scharf SJ、Higuchi R、Horn GT、et al . (1988年1月)。「耐熱性 DNA ポリメラーゼを用いたプライマー指向型 DNA 酵素増幅法」。Science。239 ( 4839 ) : 487–491。Bibcode : 1988Sci ... 239..487S。doi : 10.1126 /science.239.4839.487。PMID 2448875。

[11] Corrêa TL、 de Araújo EF (2020年9月)。「真菌フィターゼ：遺伝子から応用まで」。Brazilian Journal of Microbiology。51 ( 3): 1009–1020。doi : 10.1007/ s42770-020-00289 - y。PMC 7455620。PMID 32410091。

[12] Zappa S、Rolland JL 、Flament D、Gueguen Y、Boudrant J、Dietrich J (2001 年 10 月)。「ユーリ古細菌Pyrococcus abyssi 由来の高耐熱性アルカリホスファターゼの特性評価」。Applied and Environmental Microbiology。67 ( 10 ) : 4504–4511。Bibcode : 2001ApEnM..67.4504Z。doi : 10.1128 / AEM.67.10.4504-4511.2001。PMC 93196。PMID 11571149。

[13] Linares-Pasten JA、Andersson M 、N Karlsson E (2014)。「バイオリファイナリー技術における耐熱性グリコシドヒドロラーゼ」。Current Biotechnology。3 ( 1): 26–44。doi : 10.2174 / 22115501113026660041。

[14] Sarkar CA、Dodevski I、Kenig M、Dudli S、Mohr A、Hermans E、Plückthun A (2008 年 9 月)。「発現、安定性、および結合選択性のための G タンパク質共役受容体の指向性進化」。米国科学アカデミー紀要。105 (39 ) : 14808–14813。Bibcode : 2008PNAS..10514808S。doi : 10.1073 / pnas.0803103105。PMC 2567449。PMID 18812512。

[15] Asial I、Cheng YX、Engman H、Dollhopf M、Wu B、Nordlund P、Cornvik T (2013)。「細胞内で汎用的な活性非依存的な生物物理学的スクリーニングを用いてタンパク質の熱安定性をエンジニアリングする」。Nature Communications。4：2901。Bibcode ： 2013NatCo ... 4.2901A。doi ： 10.1038 / ncomms3901。PMID 24352381。

[16] Hoseki J, Yano T, Koyama Y, Kuramitsu S, Kagamiyama H (1999年11月). "耐熱性カナマイシン耐性遺伝子の指向性進化：Thermus thermophilusの便利な選択マーカー" . Journal of Biochemistry . 126 (5): 951– 956. doi : 10.1093/oxfordjournals.jbchem.a022539 . PMID 10544290 .

[17] Sayed A、Ghazy MA、Ferreira AJ、Setubal JC、Chambergo FS、Ouf A、et al. (2014 年 1 月)。「紅海のアトランティス II の独特な深層塩水環境から発見された新規水銀還元酵素」。The Journal of Biological Chemistry。289 ( 3 ): 1675–1687。doi : 10.1074 / jbc.M113.493429。PMC 3894346。PMID 24280218。

[18] Perl D、 Mueller U、Heinemann U、Schmid FX (2000 年 5 月)。「2つの露出したアミノ酸残基が低温ショックタンパク質に熱安定性を与える」。Nature Structural Biology。7 ( 5 ) : 380–383。doi : 10.1038 / 75151。PMID 10802734。S2CID 21850845。

[19] リーマン M、パサモンテス L、ラッセン SF、ウィス M (2000 年 12 月)。「タンパク質の熱安定性工学に関するコンセンサスコンセプト」。Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - タンパク質構造と分子酵素学。1543 (2): 408–415 .土井: 10.1016/s0167-4838(00)00238-7。PMID 11150616。

[20] Sauer DB、Karpowich NK 、Song JM、Wang DN (2015 年 10 月)。「熱安定化変異の迅速なバイオインフォマティクスによる同定」。Biophysical Journal。109 ( 7 ) : 1420–1428。Bibcode : 2015BpJ ... 109.1420S。doi : 10.1016 / j.bpj.2015.07.026。PMC 4601007。PMID 26445442。

[21] Liu HL、Wang WC（2003年1月）。「分子動力学シミュレーションに基づくアスペルギルス・アワモリ由来グルコアミラーゼの熱安定性を向上させるためのタンパク質工学」。Protein Engineering。16 （ 1 ）：19–25。doi：10.1093/proeng / gzg007。PMID 12646689。

[22] Lee CW, Wang HJ, Hwang JK, Tseng CP (2014). "塩橋の設計によるタンパク質の熱安定性向上：計算と実験を組み合わせた研究" . PLOS ONE . 9 (11) e112751. Bibcode : 2014PLoSO...9k2751L . doi : 10.1371/journal.pone.0112751 . PMC 4231051 . PMID 25393107 .

[23] Mansfeld J、Vriend G、Dijkstra BW、Veltman OR、Van den Burg B、Venema G、et al. (1997 年 4 月) 「人工的に導入したジスルフィド結合によるサーモリシン様プロテアーゼの極めて高い安定化」 The Journal of Biological Chemistry . 272 (17): 11152– 11156. doi : 10.1074/jbc.272.17.11152 . PMID 9111013 .

[24] Mancusso R、Karpowich NK、Czyzewski BK、Wang DN (2011年12月)。「膜タンパク質の熱安定性を向上させるための簡単なスクリーニング法」。Methods。55 ( 4 ) : 324–329。doi : 10.1016 / j.ymeth.2011.07.008。PMC 3220791。PMID 21840396。

[25] Tigerström A (2005). "タンパク質の熱安定性". BIOS . 76 (1): 22– 27. doi : 10.1893/0005-3155(2005)076 [ 0022:TBFTOP ] 2.0.CO ; 2 . JSTOR 4608725 . S2CID 85654007 .

[26] Ardejani MS、Noodleman L、Powers ET、Kelly JW (2021 年 5 月)。「実験と機械学習によって明らかになった、タンパク質と N- グリカンの相互作用を安定化させる立体電子効果」。Nature Chemistry。13 ( 5 ) : 480–487。Bibcode : 2021NatCh..13..480A。doi : 10.1038 / s41557-021-00646- w。PMC 8102341。PMID 33723379。

[27] Iwai H, Plückthun A (1999年10月). "環状β-ラクタマーゼ：骨格の環状化による安定性向上" . FEBS Letters . 459 (2): 166– 172. Bibcode : 1999FEBSL.459..166I . doi : 10.1016/s0014-5793(99)01220-x . PMID 10518012 . S2CID 85415249 .

[28] Keeble AH、Howarth M (2020年7月)。「タンパク質に力を：Spyツールボックスを使用した活性の強化と組み合わせ」。Chemical Science。11 ( 28 ) : 7281–7291。doi : 10.1039 / d0sc01878c。PMC 7844731。PMID 33552459。

[29] Aleccia JN (2011年11月4日) 「FDA：学校給食業者がカビの生えたアップルソースを再包装」 NBCニュース。 2015年4月15日閲覧。

[

[ 2 ]

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[ 11 ]

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[ 13 ]

[ 14 ]

[ 15 ]

[ 16 ]

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[ 27 ]

[ 28 ]

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