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| Pfu DNAポリメラーゼ | |||||||
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| 識別子 | |||||||
| 生物 | |||||||
| シンボル | ポール | ||||||
| ＰＤＢ | 4ahc | ||||||
| ユニプロット | P61875 | ||||||
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Pfu DNA ポリメラーゼは、超好熱性古細菌 Pyrococcus furiosusに見られる酵素で細胞分裂中に生物のDNAをコピーする働きをします (耐熱性 DNA ポリメラーゼ)。実験室環境では、 Pfuはポリメラーゼ連鎖反応(PCR)でDNA を増幅するために使用され、各伸長ステップで新しい DNA 鎖をコピーするという中心的な機能を果たします。
これはファミリーBのDNAポリメラーゼである。DNAポリメラーゼIIなどのBファミリーポリメラーゼに典型的なRNase H様3'-5'エキソヌクレアーゼドメインを有する。[1]
校正能力プフポリメラーゼ
Pfu DNA ポリメラーゼは、 Taq DNA ポリメラーゼと比較して、優れた耐熱性と校正特性を備えています。Taq DNA ポリメラーゼとは異なり、Pfu DNA ポリメラーゼは3 ' から 5' へのエキソヌクレアーゼ校正活性を持っています。つまり、DNA が5' 末端から3' 末端に 組み立てられると、エキソヌクレアーゼ活性によって、伸長する DNA 鎖の 3' 末端に誤って取り込まれたヌクレオチドが直ちに除去されます。その結果、 Pfu DNA ポリメラーゼで生成された PCR フラグメントは、 Taqで生成された PCR インサートよりもエラーが少なくなります。
市販のPfuは、PCRで1kbの断片を増幅する場合、通常130万塩基対あたり1のエラー率となり、2.6%の変異産物が生じる可能性があります。しかし、Pfuは遅く、通常72℃で1kbのDNAを増幅するには1サイクルあたり1～2分かかります。PCR反応でPfu DNAポリメラーゼを使用すると、PCR産物は平滑末端になります。[2]
したがって、 Pfu DNAポリメラーゼは、高忠実度のDNA合成を必要とする技術ではTaq DNAポリメラーゼよりも優れていますが、 Taqポリメラーゼと組み合わせて使用することで、 Pfuの忠実度とTaqポリメラーゼの活性速度を実現することもできます。[3]
歴史
カリフォルニア州ラホヤに拠点を置くバイオテクノロジー企業ストラタジーンのエリック・マサー率いる科学者たちは、1991年にTaq DNAポリメラーゼよりも複製の忠実度が大幅に高いPfu DNAポリメラーゼを発見しました。[4]彼らは1996年にエキソヌクレアーゼ欠損Pfuと完全Pfuの特許を取得しました。 [5]
GB-D株由来の「Deep Vent」（ Q51334 ）やPwo DNAポリメラーゼなど、Pyrococcus株由来の他のポリメラーゼも使用されている。[3]
参考文献
- ^ InterPro タンパク質ビュー: P61875
- ^ Agilent Technologies. 「PfuTurbo DNAポリメラーゼ取扱説明書#600250」(PDF)。
- ^ ab van Pelt-Verkuil E、van Belkum A、 Hays JP (2008)。「Taq およびその他の耐熱性DNA ポリメラーゼ」PCR 増幅の原理と技術的側面。pp. 103– 18。doi :10.1007/978-1-4020-6241-4_7。ISBN 978-1-4020-6240-7。
- ^ Lundberg KS、Shoemaker DD、Adams MW、Short JM、Sorge JA、Mathur EJ (1991年12月)。「Pyrococcus furiosusから単離された耐熱性DNAポリメラーゼを使用した高忠実度増幅」。Gene . 108 (1): 1– 6. doi : 10.1016 / 0378-1119 ( 91 )90480-y. PMID 1761218。
- ^ 米国特許 5,489,523、米国特許 5,545,552
外部リンク
- ストラタジーンのPfu米国特許
- 特許 5,489,523
- 特許 5,545,552
