Loading article…
| |
| |
| 名前 | |
|---|---|
| IUPAC名
2-(4-アミジノフェニル)-1H-インドール-6-カルボキサミジン
| |
| その他の名前
4′,6-ジアミジノ-2-フェニルインドール
| |
| 識別子 | |
| |
3Dモデル（JSmol）
|
|
| チェビ |
|
| チェムBL |
|
| ケムスパイダー |
|
パブケム CID
|
|
| ユニ |
|
CompTox ダッシュボード ( EPA )
|
|
| |
| |
| プロパティ | |
| Ｃ１６Ｈ１５Ｎ５ | |
| モル質量 | 277.331 グラムモル−1 |
特に記載がない限り、データは標準状態（25 °C [77 °F]、100 kPa）の材料に関するものです。
 確認する （何ですか ？）
 インフォボックス参照
| |
DAPI（発音は「DAPPY」、/ˈdæpiː/）、または4′,6-ジアミジノ-2-フェニルインドールは、DNAのアデニン-チミンに富む領域に強く結合する蛍光 染料です。蛍光顕微鏡で広く使用されています。DAPIは細胞膜を通過できるため、生細胞と固定細胞の両方を染色できますが、生細胞では膜を通過する効率が低いため、膜生存率のマーカーとなります。
歴史
DAPIは1971年にオットー・ダンの研究室でトリパノソーマ症の治療薬の探索の一環として初めて合成されました。薬としては成功しませんでしたが、さらなる調査でDNAに強く結合し、結合すると蛍光を発するようになることが示されました。この結果、1975年に超遠心分離でミトコンドリアDNAを識別するためにDAPIが使用されるようになり、蛍光DNA染色剤としてDAPIが使用された最初の記録となりました。[1]
DNAに結合すると強い蛍光を発するため、DAPIは蛍光顕微鏡でのDNAの蛍光染色に急速に採用されるようになりました。植物、後生動物、細菌細胞、ウイルス粒子内のDNAの検出への使用は1970年代後半に実証され、細胞内のDNAの定量染色は1977年に実証されました。フローサイトメトリー用のDNA染色としてのDAPIの使用もこの頃に実証されました。[1]
蛍光特性
二本鎖DNAに結合すると、DAPIは358 nm（紫外線）の波長で吸収極大を示し、461 nm（青）で発光極大を示します。したがって、蛍光顕微鏡では、DAPIは紫外線で励起され、青/シアンフィルターを通して検出されます。発光ピークはかなり広いです。[2] DAPIはRNAにも結合しますが、それほど強い蛍光を発しません。RNAに結合すると、その発光は500 nm付近にシフトします。[3] [4]
DAPI の青色発光は、1 つのサンプルで複数の蛍光染色を使用したい顕微鏡学者にとって便利です。DAPI と、フルオレセインや緑色蛍光タンパク質(GFP) などの緑色蛍光分子の間には蛍光の重複がありますが、その影響は小さいです。非常に正確な画像分析が必要な場合は、スペクトル分離を使用してこの影響を考慮することができます。
分析用蛍光顕微鏡以外にも、DAPIは細胞培養物を標識して汚染されたマイコプラズマやウイルスのDNAを検出するためによく使われています。増殖培地中の標識されたマイコプラズマやウイルスの粒子はDAPIで染色されると蛍光を発し、検出が容易になります。[5]
吸収と蛍光特性のモデリング
このDNA蛍光プローブは、時間依存密度汎関数理論とIEFバージョンの分極連続体モデルを組み合わせて効果的にモデル化されています[6] 。この量子力学的モデリングにより、DNAポケット内のマイナーグルーブ結合とインターカレーションによって生じる吸収と蛍光の挙動が、構造柔軟性と分極の減少という観点から合理化されました。
生細胞と毒性
DAPIは固定細胞の染色に使用できます。生細胞の染色に必要なDAPIの濃度は一般に非常に高く、生細胞に使用されることはほとんどありません。[7] MSDSには非毒性と記載されていますが[8] 、大腸菌に対する変異原性は示されていませんが[9]、製造元の情報には既知の変異原として記載されています。[2]これは小さなDNA結合化合物であるため、発がん性がある可能性があり、取り扱いや廃棄には注意が必要です。
代替案
Hoechst染色は、青色蛍光 DNA 染色である点で DAPI に似ており、生細胞と固定細胞の両方のアプリケーションに適合し、DAPI と同じ機器フィルター設定を使用して表示できます。
参考文献
- ^ ab Kapuscinski, J. (1995 年 9 月). 「DAPI: DNA 特異的蛍光プローブ」. Biotech. Histochem . 70 (5): 220–233. doi :10.3109/10520299509108199. PMID 8580206.
- ^ ab Invitrogen、DAPI 核酸染色、Wayback Machineで 2009-03-06 にアーカイブ。2009-12-08 にアクセス。
- ^ スコット・プラール、DAPI。 2009 年 12 月 8 日にアクセス。
- ^ Kapuscinski, J (2017). 「核酸と蛍光色素の相互作用：凝縮複合体のスペクトル特性」. Journal of Histochemistry & Cytochemistry . 38 (9): 1323–1329. doi : 10.1177/38.9.1696951 . PMID 1696951.
- ^ Russell, WC; Newman, Carol; Williamson, DH (1975). 「マイコプラズマおよびウイルスに感染した細胞内の DNA を検出する簡単な細胞化学技術」Nature . 253 (5491): 461–462. Bibcode :1975Natur.253..461R. doi :10.1038/253461a0. PMID 46112. S2CID 25224870.
- ^ Biancardi, Alessandro; Biver, Tarita; Secco, Fernando; Mennucci, Benedetta (2013). 「量子力学および分光学的ツールによるマイナーグルーブ結合およびインターカレートDAPIの光物理的特性の調査」. Phys. Chem. Chem. Phys . 15 (13): 4596–603. Bibcode :2013PCCP...15.4596B. doi :10.1039/C3CP44058C. PMID 23423468.
- ^ Zink D、Sadoni N、Stelzer E (2003)。「生細胞におけるクロマチンと染色体の可視化。通常、生細胞の染色にはHoechst染色が使用されます。DAPIはHoechst染色と比較して固定細胞でより高い信号を与えますが、生細胞ではHoechst染色が使用されます」。方法。29 （1）：42–50。doi ：10.1016 / S1046-2023（02）00289-X。PMID 12543070 。
- ^ DAPI 化学物質安全データシート kpl.com
- ^ Ohta T, Tokishita S, Yamagata H (2001). 「エチジウムブロマイドとSYBR Green Iは 大腸菌における紫外線照射と化学変異原の遺伝毒性を高める」。Mutat . Res . 492 (1–2): 91–7. doi :10.1016/S1383-5718(01)00155-3. PMID 11377248.
参照
ウィキメディア・コモンズには、 DAPIに関連するメディアがあります。