脂質ラフト

細胞の細胞膜には、脂質ラフトと呼ばれる糖リポタンパク質脂質ミクロドメインに組織化されたスフィンゴ糖脂質、コレステロール、タンパク質受容体の組み合わせが含まれています。^{[1] [2] [3]}細胞膜における脂質ラフトの存在は依然として議論の的となっています。実際、ケルビンとオーバードゥインは、脂質ラフトは誤解されたタンパク質アイランドであり、プロテオリピドコードによって形成されると提案しています。^{[4]それでも、脂質ラフトはシグナル}伝達分子の組み立ての中心として機能することで細胞プロセスを区分する特殊な膜ミクロドメインであり、タンパク質受容体とそのエフェクターのより密接な相互作用を可能にして、シグナル伝達に必要な速度論的に好ましい相互作用を促進することが提案されています。^[5]脂質ラフトは膜の流動性と膜タンパク質の輸送に影響を及ぼし、それによって神経伝達と受容体の輸送を制御します。^{[3] [6]脂質ラフトは周囲の}二重層よりも秩序があり密集しているが、膜二重層内では自由に浮遊している。^{[7]脂質ラフトは}細胞膜でより一般的であるが、ゴルジ体やリソソームなど細胞の他の部分でも報告されている。

脂質ラフトとそれが由来する細胞膜との間の重要な違いの 1 つは、脂質組成です。研究により、脂質ラフトには周囲の二重層の3 ～ 5 倍のコレステロールが含まれていることが示されています。 ^[8]また、脂質ラフトにはスフィンゴミエリンなどのスフィンゴ脂質が豊富に含まれており、通常は細胞膜と比較して 50% 増加しています。スフィンゴ脂質レベルの上昇を相殺するために、ホスファチジルコリンレベルが低下し、その結果、ラフトと周囲の細胞膜の間でコリン含有脂質レベルが同程度になります。コレステロールは、その構造と炭化水素鎖の飽和により、スフィンゴ脂質と優先的に相互作用しますが、排他的ではありません。ラフト内のすべてのリン脂質が完全に飽和しているわけではありませんが、ラフトに含まれる脂質の疎水性鎖は、周囲の二重層よりも飽和しており、密に詰まっています。^[6]コレステロールは、ラフトをまとめる動的な「接着剤」です。^[3]ステロール基の剛性のため、コレステロールは、脂質のアシル鎖がより剛性が高く、流動性が低い傾向がある脂質ラフトに優先的に分配されます。^[6]膜脂質の重要な特性の 1 つは、両親媒性です。両親媒性脂質は、極性の親水性ヘッド グループと非極性の疎水性領域を持っています。^[9]右の図は、疎水性領域と親水性領域が占める空間の面積に基づいて、スフィンゴミエリンの逆円錐形とコレステロールの円錐形を示しています。コレステロールは、ラフト内の脂質の間に詰め込むことができ、分子スペーサーとして機能し、関連するスフィンゴ脂質間の隙間を埋めます。^[9]

リートフェルトとシモンズは、モデル膜の脂質ラフトを、秩序だった（ Lo相）液体相と無秩序な（Ld相またはLα相）液体相の非混和性と関連付けた。 ^[10]この非混和性の原因は不明であるが、非混和性は2相間の自由エネルギーを最小化すると考えられている。研究により、脂質ラフトと周囲の膜の厚さに差があり、2相の境界で疎水性の不一致が生じることがわかっている。この相の高さの不一致により線張力が増大することが示されており、これによりラフトを別の相として維持するためのエネルギーコストを最小限に抑えるために、より大きく円形のラフトプラットフォームが形成される可能性がある。膜の湾曲や小さなラフトがより大きなラフトに融合するなどの他の自発的なイベントも線張力を最小化する可能性がある。^[6]

脂質ラフトの初期の定義によれば、脂質ラフトは細胞膜の残りの部分とは異なる。実際、研究者^{[11] [誰? ]}は脂質ラフトを細胞膜から抽出できるという仮説を立てている。抽出は、低温 (例: 4 °C) でのトリトン X-100やブリジ 98などの非イオン性界面活性剤に対する脂質ラフトの耐性を利用する。このような界面活性剤を細胞に加えると、流体膜は溶解するが、脂質ラフトはそのまま残り、抽出できる可能性がある。^{[引用が必要]}

脂質ラフトはその組成と洗剤耐性から、洗剤不溶性糖脂質濃縮膜（GEM）^[12]複合体、DIG ^[13]、洗剤耐性膜（DRM）とも呼ばれる。しかし、回収された脂質やタンパク質の曖昧さや、以前は存在しなかった固体領域の形成を引き起こす可能性があるという観察により、膜の洗剤耐性方法論の妥当性が最近疑問視されている。^[14]

基質提示の媒介。脂質ラフトは、パルミトイル化されたタンパク質を細胞膜の無秩序領域から離れた場所に局在させる。^[15]パルミチン酸を介した局在の破壊により、タンパク質は無秩序領域で結合パートナーまたは基質にさらされるようになり、これは基質提示と呼ばれる活性化メカニズムである。例えば、タンパク質はパルミトイル化され、ホスファチジルイノシトール 4,5-二リン酸(PIP2) に結合することが多い。PIP2 は多価不飽和であり、脂質ラフトには存在しない。細胞膜で PIP2 のレベルが上昇すると、タンパク質は PIP2 クラスターに移動し、そこで PIP2 (または PIP2 と関連する別の分子) によって直接活性化される。^{[16] [17]}

他にも機能が存在する可能性があります。

1982年までは、1972年に発表されたシンガー・ニコルソン流動モザイクモデルに従って、リン脂質と膜タンパク質が細胞膜にランダムに分布していると広く受け入れられていました。 ^{[6] [18]}しかし、1970年代にスティアーとサックマン^[19]とクラウスナーとカルノフスキー^[20]による生物物理学的アプローチを使用して、膜マイクロドメインが仮定されました。これらのマイクロドメインは、スティアーとサックマンとイスラエルアチビリらによって脂質混合物の物理的特性と組織化に起因するとされました。^[21]

1974 年、温度が膜の挙動に与える影響から、膜内の「脂質のクラスター」が提案され、1975 年までに、これらのクラスターは、より自由に分散した液晶脂質分子内の「準結晶」領域である可能性があることがデータから示唆されました。1978 年には、X 線回折研究によって「クラスター」の考え方がさらに発展し、マイクロドメインが「より秩序立った状態の脂質」と定義されました。

カルノフスキー博士らは1982年に膜中の脂質ドメインの概念を定式化した。カルノフスキー博士らの研究は、1,6-ジフェニル-1,3,5-ヘキサトリエンの寿命減衰における不均一性を示し、膜の脂質環境に複数の相があることを示した。 ^[6]マイクロドメインの一種は、コレステロールとスフィンゴ脂質によって構成される。これらは、ビルトネン、トンプソンらが実証したように、これらの脂質が別の相に分離することによって形成される。^[22]これらのマイクロドメイン（「ラフト」）は細胞膜にも存在することが明らかになった。^[23]その後、ドイツの欧州分子生物学研究所（EMBL）のカイ・シモンズ博士とオランダのユトレヒト大学のゲリット・ファン・メール博士は、細胞膜に存在する脂質やコレステロール、糖脂質、スフィンゴ脂質が豊富に含まれるこれらの膜マイクロドメインに再び注目した。^{[24]その後、彼らはこれらのマイクロドメインを脂質「ラフト」と名付けました。ラフトの元々の概念は、}トランスゴルジネットワークから細胞膜へのコレステロールの輸送を説明するために使用されました。このアイデアは、1997年にシモンズとイコネンによってより正式に開発されました。^[25]

2006 年の脂質ラフトと細胞機能に関するキーストーンシンポジウムでは、脂質ラフトは「細胞プロセスを区画化する、小さく (10 ～ 200 nm)、不均一で、非常に動的な、ステロールとスフィンゴ脂質に富むドメイン。小さなラフトは、タンパク質間の相互作用によって安定化され、より大きなプラットフォームを形成することがある」と定義されました。近年、脂質ラフトの研究では、ラフトのサイズや寿命など、この分野で論争を引き起こしている多くの重要な問題に取り組もうとしています。

まだ答えられていない他の質問は次のとおりです。

• 膜タンパク質レベルの影響は何ですか?
• 脂質ラフトの生理機能は何ですか?
• 膜脂質の流動はラフト形成にどのような影響を与えますか?
• 食事や薬は脂質ラフトにどのような影響を与えますか?
• ラフト境界に位置するタンパク質は脂質ラフトにどのような影響を与えるのか？^[6]

脂質ラフトには、平面脂質ラフト（非カベオラまたは糖脂質ラフトとも呼ばれる）とカベオラの 2 種類が提案されている。平面ラフトは、細胞膜の平面と連続している（陥入していない）ことと、際立った形態学的特徴がないことで定義される。一方、カベオラは、細胞膜がフラスコ状に陥入したもので、カベオリンタンパク質を含み、脂質ラフトで最も容易に観察される構造である。カベオリンは、脳、神経系の微小血管、内皮細胞、アストロサイト、オリゴデンドロサイト、シュワン細胞、背根神経節、海馬ニューロンで広く発現している。平面ラフトはフロチリンタンパク質を含み、カベオラが存在しないニューロンで見られる。どちらのタイプも脂質組成は類似している（コレステロールとスフィンゴ脂質が豊富）。フロチリンとカベオリンはシグナル分子を脂質ラフトにリクルートし、神経伝達物質のシグナル伝達に重要な役割を果たします。これらのマイクロドメインはシグナル分子を空間的に組織化し、シグナル伝達に必要な速度論的に好ましい相互作用を促進すると考えられています。逆に、これらのマイクロドメインはシグナル分子を分離し、相互作用を阻害し、シグナル応答を弱めることもできます。^[26]

シグナル伝達の特異性と忠実性は、細胞が環境の変化に効率的に反応するために不可欠です。これは、シグナル伝達経路に関与するタンパク質の異なる局在によって部分的に達成されます。細胞膜では、区画化の1つのアプローチとして脂質ラフトが利用されています。^[27]

脂質ラフトを考える合理的な方法の1つは、小さなラフトが個々の受容体のリガンド結合活性化後に濃縮プラットフォームを形成できるというものです。^[28] 脂質ラフトは、免疫グロブリンEシグナル伝達、T細胞抗原受容体シグナル伝達、B細胞抗原受容体シグナル伝達、EGF受容体シグナル伝達、インスリン受容体シグナル伝達など、多くのシグナル伝達プロセスに関与していることが研究者によって発見されています。これらの原理を説明するために、脂質ラフトが関与するシグナル伝達経路の詳細な例を以下に説明します。

上皮成長因子 (EGF) は、HER-1 または ErbB1 としても知られるEGF 受容体に結合し、膜貫通シグナル伝達を開始します。脂質ラフトはこのプロセスで 2 つの役割を果たすことが示唆されています。脂質ラフトの特定の側面は、EGF 受容体の機能を阻害します。

• 脂質ラフトのガングリオシド成分は受容体の活性化を阻害することが示されている^{[29] [30]}
• 膜双極子電位は膜の他の部分よりも脂質ラフトで高いことが示されており^[31]、 EGFの受容体への結合を阻害することが実証されている^[32]。
• EGF結合は、リガンド結合に利用可能な受容体の数の減少により、非洞脂質ラフトによって阻害されることが示された^[33]
• EGF ^[34]とErbB2（HER-2）^[32]は、活性化中または活性化後に脂質ラフトまたはカベオラから移動することが示された。
• 脂質ラフトの破壊はEGF受容体のリガンド非依存性活性化を誘導することが示されている^[35]

同時に、脂質ラフトは膜貫通シグナル伝達に必要であるか、またはそれを増強するようです。

• 脂質ラフトからのErbB2の隔離はEGF誘導シグナル伝達を阻害することが示されている^[36]
• 膜双極子電位は脂質ラフトでは膜の他の部分よりも高く、^[31] EGF誘導シグナル伝達を増強する^[32]
• EGFは個々の脂質ラフトの合体を引き起こすことが示されており^[37]、これはT細胞受容体の活性化に役割を果たすことが示唆されているものと同様である^[38]。
• EGF受容体の脂質ラフトへの局在はチロシンキナーゼ阻害剤に対する耐性を誘導する^[39]

免疫グロブリンE（IgE）シグナル伝達は、脂質ラフトが関与するシグナル伝達プロセスとして初めて説得力を持って実証された。^{[40] [41] [42]}この事実の証拠としては、トリトンX-100中のFc-イプシロン受容体（FcεR）の溶解度が定常状態から架橋状態にかけて減少すること、^[40]ガングリオシドおよびGPIアンカー型タンパク質から蛍光顕微鏡で観察できるほどの大きさのパッチが形成されること、^{[43] [44]}メチル-β-シクロデキストリンによる表面コレステロールの枯渇によりIgEシグナル伝達が消失すること^[45]などがあげられる。

このシグナル伝達経路は、次のように説明できます。IgEはまず、Fcセグメントを介して肥満細胞と好塩基球の細胞膜に存在するFc-イプシロン受容体（FcεR）に結合します。FcεRは、1つのα鎖、1つのβ鎖、および2つのγ鎖からなる四量体です。^[42]これは単量体であり、1つのIgE分子に結合します。α鎖はIgEに結合し、他の3つの鎖には免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ITAM）が含まれています。次に、オリゴマー抗原が受容体に結合したIgEに結合して、2つ以上のこれらの受容体を架橋します。この架橋により、二重アシル化された非受容体Src様チロシンキナーゼLynがリクルートされ、ITAMがリン酸化されます。その後、SykファミリーチロシンキナーゼがITAMのこれらのホスホチロシン残基に結合して、シグナル伝達カスケードが開始されます。^{[40] [41]} Sykは、今度はLATなどの他のタンパク質を活性化することができる。架橋を通じて、LATは他のタンパク質をラフトにリクルートし、シグナルをさらに増幅することができる。^[46]

T 細胞抗原受容体 (TCR) は、T リンパ球 (T 細胞) の表面に存在する分子です。αβ ヘテロ二量体、CD3 (γδε) 複合体、ξ ホモ二量体で構成されています。α サブユニットと β サブユニットには、抗原提示細胞 (APC) の表面にある主要組織適合性複合体 ( MHC ) クラス I およびクラス II タンパク質によって提示されるペプチドの細胞外結合部位が含まれています。CD3 サブユニットと ξ サブユニットには、細胞質 ITAM モチーフが含まれています。シグナル伝達プロセスでは、MHC が TCR に結合することで、2 つ以上の受容体が結合します。この架橋は、IgE シグナル伝達と同様に、二重アシル化非受容体 Src 様チロシンキナーゼをリクルートして ITAM チロシン残基をリン酸化します。TCR シグナル伝達は、Lyn をリクルートするだけでなく、Fyn もリクルートします。^{[27] [47]}

この手順に続いて、ZAP-70（これもIgEシグナル伝達とは異なる）がリン酸化ITAMに結合し、それが自身の活性化とLATの活性化につながる。LATの活性化はシグナル増幅の源である。IgEとT細胞抗原受容体シグナル伝達のもう1つの違いは、TCRによるLckの活性化がより深刻なラフトクラスタリング^{[48] [49]}をもたらし、より多くのシグナル増幅をもたらす可能性があることである。このシグナル伝達をダウンレギュレーションする可能性のあるメカニズムの1つは、細胞質キナーゼCskがラフト関連タンパク質CBPに結合することである。その後、Cskはリン酸化を介してSrcファミリーキナーゼを抑制する可能性がある。^[50]

B細胞抗原受容体（BCR）は、膜結合型Ig（mIg）分子と2つのポリペプチドのジスルフィド結合Igα-Igβヘテロ二量体との複合体である。^[51] IgαとIgβにはそれぞれITAMと呼ばれるアミノ酸モチーフが含まれており、その配列はD/ExxYxxL/Ix7YxxL/Iである。

B細胞抗原受容体シグナル伝達のプロセスは、免疫グロブリンEシグナル伝達およびT細胞抗原受容体シグナル伝達と類似している。BCR以外にも、脂質ラフトがB細胞活性化に関わる細胞表面イベントの多くで重要な役割を果たしていると一般に考えられている。脂質ラフトの機能には、BCRによるシグナル伝達、共受容体によるシグナル伝達の調節、CD40によるシグナル伝達、BCRに結合した抗原のエンドサイトーシスと後期エンドソームへのルーティングによる抗原由来ペプチドのクラスII MHC分子へのロードの促進、それらのペプチド/MHC-II複合体の細胞表面へのルーティング、およびT細胞への抗原提示への関与などがある。^[51]

ウイルスは絶対細胞内寄生虫であるため、細胞に侵入するには、細胞膜に発現する細胞受容体とウイルスの特定の相互作用が必要です。蓄積された証拠は、ウイルスが脂質ラフトを含む特定の膜ミクロドメインを貫通して細胞に侵入することを裏付けています。

脂質ラフト関連の非エンベロープウイルス侵入の最もよく研​​究されたモデルは、サルウイルス40（SV40、パポバウイルス科）とエコーウイルス1型（EV1、ピコルナウイルス科）である。^{[52] [53]}

SV40は、脂質ラフトに位置するガングリオシドGM1と主要組織適合性（MHC）クラスI分子という2つの異なる受容体を利用して細胞表面に結合します。^{[52] [53]} SV40がMHCクラスI分子に結合すると、受容体のクラスター化と再分布が引き起こされます。SV40は細胞質からより多くのカベオラをリクルートしたり、侵入部位に新しいカベオラを形成したりする可能性があります。^[53]付着によって引き起こされるウイルス誘導性シグナル伝達イベントのカスケードにより、約20分でカベオラを介したエンドサイトーシスが発生します。^[53]一部の細胞タイプでは、ウイルスはコーティングされていない小胞の脂質ラフトから直接カベオソームに侵入することができます。^{[53] [54]}

EV1はα2β1-インテグリンを細胞受容体として利用する。^[52]複数のインテグリンヘテロダイマーがウイルスカプシドの隣接部位に結合することができる。^[53] SV40と同様に、細胞への付着と結合は、脂質ラフトからカベオラ様構造へのインテグリン分子のクラスター化と再配置を引き起こす。^[53]脂質ラフト中のコレステロールの枯渇はEV1感染を阻害する。^[52]

エコーウイルス11（EV11、ピコルナウイルス）のように、非カベオララフト媒介エンドサイトーシスを利用するウイルスも存在する。しかし、詳細なメカニズムはまださらに解明する必要がある。^[53]

インフルエンザウイルスは細胞受容体であるシアリン酸に結合し、細胞表面の糖鎖にリンクしてエンドサイトーシスを開始する。後期エンドソームに輸送された後、HAの低pH依存性構造変化によって融合が誘導され、ウイルスイオンチャネルM2タンパク質のプロトン流入によってウイルスリボ核タンパク質複合体（RNP）が放出され、コレステロールとの結合が必要となる。セムリキ森林ウイルス（SFV）とシンドビスウイルス（SIN）は、エンベロープ糖タンパク質を介した膜融合と侵入のために、標的膜脂質ラフトにコレステロールとスフィンゴ脂質を必要とする。^[55]ヒトTリンパ球向性ウイルスI型（HTLV-1）は、グルコーストランスポーター1（GLUT-1）を介して細胞に侵入する。エボラウイルスとマールブルグウイルスは、GPIアンカー型タンパク質である葉酸受容体α（FRα）を細胞受容体として使用する。 B 型肝炎ウイルスは、ヒト補体受容体 2 型 (CR2、または CD21 として知られる) を認識します。ヒトヘルペスウイルス 6 (HHV-6) は、宿主細胞表面のヒト CD46 に結合します。これらのウイルス受容体はすべて脂質ラフトに位置しているか、感染後に脂質ラフトに再配置されます。

ヒト免疫不全ウイルス（HIV）は性感染する動物ウイルスであるため、感染を成立させるためには、まずCD4やケモカイン受容体を発現しない上皮細胞のバリアを貫通する必要がある。上皮細胞上のHIV-1エンベロープ糖タンパク質の代替受容体は、脂質ラフトに豊富に存在するスフィンゴ糖脂質ガラクトシルセラミド（GalCer）である。^{[56] [57]}

COVID-19を引き起こすSARS-CoV-2ウイルスは、脂質ラフトを介してエンドサイトーシスで侵入することが示されています。 ^[58]オミクロン変異体は主にエンドサイトーシスで侵入しますが、おそらく脂質ラフトを介して侵入します。 ^[59] ヒドロキシクロロキンは、 ACE2とエンドサイトーシス脂質との結合を阻害することで、SARS-CoV-2の侵入を阻止します。^[60]

脂質ラフトをめぐる論争の主な理由の 1 つは、熱力学的平衡状態にない生きた細胞内の脂質ラフトを研究することの難しさから生じています。^[26] 脂質ラフトは、サイズが 10～200 nm の小さなミクロドメインです。^[6]脂質ラフトは、そのサイズが光学顕微鏡の古典的な回折限界を下回っているため、直接視覚化することが困難であることが判明しています。現在は合成膜が研究されていますが、これらの膜の使用には多くの欠点があります。まず、合成膜は生体膜に比べてタンパク質の濃度が低いです。また、生体膜に存在する膜と細胞骨格の相互作用をモデル化することは困難です。その他の落とし穴としては、自然な非対称性の欠如と、非平衡条件下での膜の研究が不可能であることが挙げられます。^{[6] [61]}それにもかかわらず、この分野では蛍光顕微鏡が広く使用されています。たとえば、ラフトの構成成分であるガングリオシドGM1 に結合するコレラ毒素 B サブユニットに結合した蛍光体が広く使用されています。また、ラフトとバルク膜の間で分配するか、膜相に応じて蛍光特性を変える親油性膜色素も使用されます。Laurdan は、このような色素の代表的な例の 1 つです。ラフトは、Lck-GFP などの蛍光融合タンパク質の遺伝子発現によっても標識できます。

コレステロールの操作は、脂質ラフトの研究に最も広く使われている技術の一つです。脂質ラフト研究においてコレステロールを操作する方法としては、隔離（フィリピン、ナイスタチン、アムホテリシンを使用）、枯渇と除去（メチル-B-シクロデキストリンを使用）、コレステロール合成の阻害（HMG-CoA還元酵素阻害剤を使用）などがあります。これらの研究では、コレステロールレベルの低下が神経伝達物質のシグナル伝達に与える影響を観察することができます。^[26]

Sharma らは、高解像度画像と数学的モデリングを組み合わせて、ラフトタンパク質が半径 5～20 nm を超える高密度ナノクラスターに組織化されているという見解を示した。Sharma らは、同じプローブ間の蛍光共鳴エネルギー移動 (ホモ FRET または蛍光異方性) の測定を使用して、GPI アンカータンパク質の一部 (20～40%) が半径 4～5 nm の高密度クラスターに組織化されており、各クラスターは数個の分子と異なる GPI アンカータンパク質で構成されていると報告した。^[62] サイズが小さく、動的性質の問題に対処するために、冷却された高感度 CCD カメラと全反射 (TIRF) 顕微鏡を使用した単一粒子およ​​び分子の追跡が注目されつつある。これにより、膜内の粒子の拡散に関する情報を抽出できるほか、膜の囲い、障壁、閉じ込め場所を明らかにすることができる。^[63]

その他の光学技術も使用されています。蛍光相関および相互相関分光法（FCS / FCCS）は膜内の蛍光体の移動に関する情報を得るために使用でき、蛍光共鳴エネルギー移動（FRET）は蛍光体が近接していることを検出でき、光ピンセット技術は膜の粘度に関する情報を提供します。^[26]

光学技術だけでなく、原子間力顕微鏡（AFM）や走査型イオン伝導顕微鏡（SICM）などの走査プローブ技術も、合成脂質^[64]や細胞剥離によって分離された天然細胞膜^[65]の位相的および機械的特性を検出するために使用できます。

蛍光顕微鏡法が依然として主流の技術ではあるが、二重偏光干渉法や核磁気共鳴法（NMR）も使用されている。将来的には、誘導放出抑制法（STED） ^[66]などの超解像顕微鏡法や、さまざまな形態の構造化照明顕微鏡法によって、回折限界によって課せられる問題を克服できるのではないかと期待されている。

脂質ラフトの分析に使用される他の技術としては、ELISA、ウェスタンブロッティング、FACSなどがある。^{[67] [68] [1]}

細胞シグナル伝達、輸送、構造におけるラフトの役割は、さまざまな方法を用いた多くの実験にもかかわらず、まだ明らかにされておらず、その存在自体が議論の的となっている。^[69]

脂質ラフトの存在に反対する議論には以下のものがあります。

• まず、Lα 相と Lo 相の間には線状の張力が存在するはずです。この線はモデル膜では確認されていますが、細胞システムでは容易に観察されていません。
• 第二に、脂質ラフトの大きさについてはコンセンサスがなく、1～1,000ナノメートルの範囲であると報告されています。
• 第三に、脂質ラフトの存在の時間スケールは不明です。脂質ラフトが存在する場合、それは生物学的プロセスとは無関係な時間スケールでのみ発生する可能性があります。
• 4番目に、膜全体がLo相に存在する可能性があります。

この点に対する最初の反論は、ラフトのLo相はスフィンゴ脂質とコレステロールの間に見られる他の場所では見られない分子間水素結合により、より密に詰まっていることを示唆している。 ^[70]

2 つ目の議論は、脂質ラフトを破壊する際の実験設計の有効性に疑問を投げかけるものである。Pike と Miller は、コレステロールの減少を利用して脂質ラフトの機能を決定する際の潜在的な落とし穴について論じている。^[71]彼らは、ほとんどの研究者がコレステロールを減少させる急性法を用いており、この方法ではラフトが破壊されるが、 PI(4,5)P ₂として知られる別の脂質も破壊されることを指摘した。PI(4,5)P _{2 は}細胞の細胞骨格の制御に大きな役割を果たしており、^{[72] PI(4,5)P} _{2 を}破壊すると、膜内のタンパク質の横方向拡散など、このタイプのコレステロール減少と同じ結果の多くが生じる。^[73]これらの方法はラフトと PI(4,5)P _{2 の}両方を破壊するため、Kwik らは、コレステロール減少後の特定の細胞機能の喪失は、必ずしも脂質ラフトの破壊だけに起因するとは限らず、ラフトとは無関係な他のプロセスも影響を受ける可能性があると結論付けた。最後に、脂質ラフトは何らかの形でタンパク質とつながっていると考えられているが、エディディンは、タンパク質がラフト内の脂質を引き付けるのは、タンパク質と脂質上のアシル鎖との相互作用によるものであり、その逆ではないと主張している。^[74]

ウィキメディア・コモンズには、脂質ラフトに関連するメディアがあります。

• 脂質ラフトに関与するタンパク質のデータベース
• エディンバラ大学での「脂質ラフト、シグナル伝達、細胞骨格」
• サタジット市長セミナー：「膜ラフト」