ロマノフスキー染色

ロマノフスキー染色法は、血液学（血液の研究）や細胞病理学（病変細胞の研究）で広く用いられている、類似しているが異なる複数の染色法の先駆けとなった、典型的な染色法です。ロマノフスキー染色法は、病理学的標本、特に血液や骨髄の塗抹標本において、顕微鏡検査のために細胞を識別したり^{[ 1 ]} 、血液中のマラリアなどの寄生虫を検出したりするために用いられます^{[ 2 ] [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ] 。}

この染色法は、血液染色法としての可能性を最初に認識したロシアの医師ドミトリ・レオニドヴィチ・ロマノフスキー（1861～1921）にちなんで名付けられました。 ^{[ 6 ]}

ロマノフスキー染色法に関連する、あるいはそこから派生した染色法には、ギムザ染色、ジェンナー染色、ライト染色、フィールド染色、メイ・グリュンヴァルト染色、パッペンハイム染色、ライシュマン染色などがある。これらの染色法は手順や添加物が異なり、実際には名称が混同されることが多い。

ロマノフスキー染色法の利点は、幅広い色調を生成できるため、細胞成分を容易に区別できる点にある。この現象はロマノフスキー効果、あるいはより一般的にはメタクロマジーと呼ばれている。^{[ 7 ]}

染色液中のエオシン成分は、赤血球のピンクオレンジ色や好酸球の細胞質内の顆粒の色を決定づける。

ロマノフスキー効果

1891年、ロマノフスキー^{[ 8 ] [ 9 ] [ 10 ]}は、エオシン（通常はエオシンY）と熟成させたメチレンブルー溶液の混合物を用いて染色法を開発し、染色成分だけでは説明できない色合い、すなわち細胞核のクロマチンと一部の白血球の細胞質内の顆粒内に特徴的な紫色の色合いを生じさせました。これはロマノフスキー効果として知られるようになりました。^{[ 11 ] [ 12 ] [ 6 ] [ 13 ] [ 4 ]}エオシンと純粋なメチレンブルー単独（または組み合わせ）ではロマノフスキー効果は生じず、^{[ 13 ] [ 4 ]}現在ではこの効果を生じさせる活性染色剤はアズールBとエオシンであると考えられています。^{[ 14 ] [ 3 ] [ 13 ]}

この一般的な染色法の功績は誰に帰せられるべきかについては議論があるが、一般的にはドミトリ・レオニドヴィチ・ロマノフスキーに帰せられている。^{[ 14 ] [ 17 ] [ 19 ]}

1870年代、パウル・エールリッヒは酸性フクシン（酸性染料）とメチレンブルー（塩基性染料）を含む酸性染料と塩基性染料の混合物を使用して血液塗抹標本を検査した。 ^{[ 24 ] [ 25 ] [ 26 ] [ 27 ] [ 17 ]} 1888年、チェスラフ・イヴァノヴィチ・チェンジンスキーはメチレンブルーを使用したが、エールリッヒが使用した酸性フクシンをエオシンに置き換えた。^{[ 14 ] [ 26 ] [ 27 ]}チェンジンスキーの染色液の組み合わせはマラリア原虫（プラスモジウム属 の一種）を染色することができた。 ^{[ 27 ] [ 19 ]}エールリッヒとチェンジンスキーの染色液はいずれも、使用したメチレンブルーが多色ではなかったため、ロマノフスキー効果を生じなかった。^{[ 17 ]}

ドミトリ・ロマノフスキーは1890年に、マラリア感染血液に適用した場合の結果を含む、自身の血液染色（熟成メチレンブルーとエオシンの組み合わせ）の予備的調査結果を発表した。^{[ 6 ]}この多色メチレンブルーの使用により、ロマノフスキーの染色（およびその後の製剤）は、ロマノフスキー効果に関連する紫色の色合いを欠くエーリッヒとチェンジンスキーの染色とは区別された。^{[ 17 ]}ロマノフスキーの1890年の出版物には、メチレンブルー溶液をどのように改良したかについての説明は含まれていなかったが、^{[ 6 ] [ 17 ]} 1891年の博士論文では、表面にカビが発生し始めた後にメチレンブルーを使用すると最も効果的であると説明している。^{[ 6 ] [ 17 ]}熟成メチレンブルー溶液の使用を除けば、ロマノフスキーの染色はチェンジンスキーの染色技術に基づいていた。^{[ 17 ]}ロマノフスキーがマラリア原虫の研究にこの方法を用いたことは、彼の染色法への継続的な関心につながったとされている。^{[ 25 ]}

エルンスト・マラホフスキーは、1891年にドミトリ・ロマノフスキーと同じ染色の組み合わせを独自に観察したとされているが、^{[ 6 ] [ 13 ]}最初にそれを観察したとされていることもある。^{[ 17 ] [ 19 ]}マラホフスキーは、意図的に多色化したメチレンブルー溶液を初めて使用した人物であり、^{[ 15 ]}染色液にホウ砂を加えることでこれを実現した。 ^{[ 17 ]}マラホフスキーは、1890年6月15日に染色を実演し、同年、「公開実演を記述した」論文を発表したと報告されている。^{[ 19 ]}ロマノフスキー法とマラホフスキー法はいずれも、それまで使用されていた染色法では細胞質しか着色できなかったマラリア原虫の核と細胞質を染色することができた。^{[ 19 ]}

1899年、ルイ・レオポルド・ジェンナーは、水系混合物で形成される沈殿物を収集し、メタノールに再溶解することで、メチレンブルーとエオシンの染色液のより安定したバージョンを開発しました。^{[ 27 ] [ 15 ] [ 4 ]}収集した沈殿物から調製されたロマノフスキー型の染色液は、エオシン酸塩と呼ばれることもあります。^{[ 4 ]}ジェンナー染色液にメタノールを使用すると、染色液の安定性が向上するだけでなく、血液サンプルを固定する効果もありましたが、 ^{[ 4 ]}ジェンナーの染色液ではロマノフスキー効果は生じません。^{[ 27 ] [ 19 ] [ 15 ]}

リチャード・メイとルートヴィヒ・グリュンヴァルトは1892年に染色液のバージョン（現在メイ・グリュンヴァルト染色液として知られている）を発表したが、これは1899年にジェンナーが提案したバージョンと似ており、同様にロマノフスキー効果は生じない。^{[ 27 ] [ 19 ] [ 15 ]}

1901年、カール・ロイターとウィリアム・ライシュマン^{[ 21 ]}は、ルイ・ジェンナーの溶媒としてのアルコールの使用とマラホフスキーの多色メチレンブルーの使用を組み合わせた染色法を開発した^{[ 19 ] [ 15 ] [ 4 ]} 。ロイターの染色法はメタノールの代わりにエチルアルコールを使用している点でジェンナーの染色法と異なり、ライシュマンの染色法はエオシンYの代わりにエオシンBを使用している点でジェンナーの染色法と異なっていた^{[ 19 ] [ 4 ]}。

1902年にジェームズ・ホーマー・ライトは、メチレンブルーをエオシンYと組み合わせ、熱を用いて多色化する方法を発表した^{[ 18 ]。}この技術はライト染色として知られている^{[ 19 ] [ 20 ]}。

グスタフ・ギムザの名前も染色液と結びついており、彼は1902年に有用な処方と手順を発表したとされている。^{[ 13 ] [ 6 ] [ 25 ]}ギムザは、組成が大きく変動する多色メチレンブルー溶液ではなく、純粋な染料の組み合わせを使用しようとした。^{[ 20 ] [ 19 ] [ 15 ]}ギムザは染色液の製造権を売却したが、どのように製造したかについての詳細を完全に公表することはなかった。^{[ 19 ]}ただし、アズールBとメチレンブルーの組み合わせを使用したと考えられている。^{[ 15 ]}ギムザは1902年から1934年の間に染色液の改良をいくつか発表した。1904年には^{[ 28 ]}、安定性を高めるためにメタノールとともにグリセリンを染色液に加えることを提案した。^{[ 22 ] [ 19 ]}

ドイツで製造されたギムザ染色粉末は、第一次世界大戦中に供給が途絶えるまで米国で広く使用されていましたが、その途絶により、ジェームズ・ホーマー・ライトのメチレンブルー多色染色法の利用が増加しました。^{[ 19 ] [ 1 ]}

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