ドミトリー・レオニドヴィチ・ロマノフスキー

ロマノフスキーが1880年代に医学の学位を取得するために行った研究は、主にマラリア原虫（プラスモジウム）の同定に関するものでした。^{[ 6 ]}それまでは、マラリア原虫は血球や細胞小器官と区別するのが難しかったため、マラリア感染を確認するのは困難でした。色素を持つ血球はマラリア感染と関連付けられることが多かったのですが、色素は必ずしも目に見えるわけではありませんでした。^{[ 9 ]}フランスの医師シャルル・ルイ・アルフォンス・ラヴェランが1880年にマラリア原虫（後に熱帯熱マラリア原虫と呼ばれる）を発見し記述したとき、血球内で原虫が見られたり、マラリアと関連付けられたりしたことがなかったため、受け入れられませんでした。^{[ 10 ]}

1871年、ドイツの化学者アドルフ・フォン・バイヤーは、エオシン（ギリシャ語で「朝の赤」を意味する）と呼ばれる赤い染料を合成し、1876年に組織の染色に有用であることが発見されました。^{[ 11 ]}また、別のドイツの化学者ハインリヒ・カロは、 1876年にメチレンブルーと呼ばれる青い染料を合成し、^{[ 12 ]}ロベルト・コッホが細胞染色剤として初めて使用しました。1882年、コッホはメチレンブルーを用いて、結核の原因菌である結核菌（現在の結核菌）を発見しました。^{[ 13 ]}これら2つの染色剤は、一般的な細胞および組織染色、ならびに臨床診断で使用される基本的な染色剤の中に残っています。^{[ 11 ] [ 14 ]}

ロマノフスキーは、エオシンとメチレンブルーの染色能力の違いを最初に認識した人物です。個々の染色剤（単色染色）は、組織や細胞の一般的な着色には適していましたが、異なる成分を区別するには適していませんでした。^{[ 15 ]}ロマノフスキーは、特定の量のエオシンとメチレンブルーを混合することで、細胞のさまざまな部分や成分を視覚化するのに役立つ、コントラストのある鮮明な画像が得られることを発見しました。^{[ 16 ]}この混合法、多色染色または多色染色法は、さまざまな改良を経て、細胞成分を識別するための最も効率的な細胞染色法となりました。^{[ 3 ] [ 17 ]}染色剤の混合物が鮮やかな細胞画像を生成する化学現象は、「ロマノフスキー効果」として知られています。^{[ 15 ] [ 18 ]}

1890 年 12 月、ロマノフスキーは、博士論文の主要な研究の予備報告として、その発明を「マラリア原虫の構造の問題について」（英語訳）というタイトルでVrach誌に発表した。 ^{[ 19 ] [ 20 ]}誤って、ロマノフスキーが 1891 年にその研究結果を発表したと書籍や雑誌に記録されていることが多いが、^{[ 8 ] [ 21 ] [ 22 ] [ 23 ]}エルンスト・マラホフスキーが 1891 年 8 月に研究を発表したため、この技術を独自に開発したという優先権をめぐる論争が起こった。^{[ 20 ]}

ロマノフスキーは、新鮮なメチレンブルーの代わりに、古くなってカビの生えた溶液が最良の結果をもたらす一方、エオシンは汚染されていない状態であるべきだと発見した。^{[ 8 ] [ 24 ]}彼は次のように述べている。

[マラリア感染血液サンプル]の染色には、私が発見した以下の混合液を使用します。これは、新鮮に調製するのが最適で、濾過した飽和メチレンブルー水溶液2容量と1%エオシン水溶液5容量を混合します。私の標本では、常に以下の像が得られます。赤血球はピンク色に染色されます。好酸球の細胞質は濃いピンク色ですが、マラリア原虫とリンパ球の細胞質は薄い青色です。血小板と白血球の核は濃い紫色ですが、マラリア原虫の核は紫がかった紫色です。白血球の細胞質は淡い紫色で、リンパ球の薄い青色の原形質から紫色の白血球へと移行する色調が見られます。赤血球内では、マラリア原虫はほとんど目立たない場合もあれば、細胞全体を占めている場合もあります。いずれにせよ、無色の縁に囲まれた紫色の核は常に明確に識別できる。^{[ 20 ]}

ロマノフスキーは1891年6月に提出した論文でこの新しい技術について詳細に説明した。^{[ 8 ]}この染色法は、特にマラリア感染^{[ 2 ]や免疫組織化学研究[ 24 ]}において、血液サンプルを可視化するための「ゴールドスタンダード」であり続けている。