ライシュマン染色

リーシュマン染色は、リーシュマン染色としても知られ、顕微鏡検査で血液塗抹標本の染色 に使用されます。一般的には、白血球、マラリア原虫、トリパノソーマを区別して特定するために使用されます。この染色は、「多色」メチレンブルー（つまり、脱メチル化されてさまざまな青色になっているもの）とエオシンのメタノール混合物に基づいています。メタノールのストック溶液は安定しており、前処理のステップを省いて塗抹標本を直接固定する目的にも役立ちます。水性緩衝液で希釈して作業溶液を作った場合、結果として得られる混合物は非常に不安定で、長期間使用することはできません。リーシュマン染色は、発明者であるスコットランドの病理学者ウィリアム・ブーグ・リーシュマンにちなんで名付けられました。これはロマノフスキー染色の一種であり、ギムザ染色、ジェンナー染色、ライト染色に似ており、部分的に置き換えることができます。

多くの企業が、リーシュマン染色剤を乾燥粉末の形で販売しており、これは後にメタノールで再構成される。^[1]熱と強い光により染色剤は酸化され、メチレンバイオレット（ベルンセン）やアズールエオシン酸塩などの不溶性の沈殿物が沈殿する。^[2]

ジョン・ヴィヴィアン・デイシー卿の教科書『実用血液学』によれば、「現在使用されているロマノフスキー染色のうち、ジェンナー染色が最も単純で、ギムザ染色が最も複雑である。中間的な位置を占めるリーシュマン染色は、日常的な染色で今でも広く使用されている。」

WHO議定書^[3]には次のように記されている。

これらの染料には、染色特性が異なるさまざまな組み合わせがあります。メイ・グリュンワルド・ギムザ染色は、日常的な作業に適した方法です。ライト染色はより簡単な方法ですが、リーシュマン染色も簡単な方法で、染色した血液塗抹標本が緊急に必要な場合や、通常の染色が利用できない場合 (夜間など) に特に適しています。フィールド染色は、マラリア原虫の薄い塗抹標本を主に染色する迅速な染色法です。どの方法を使用する場合でも、他の染料や金属塩に汚染されていない染料を選択することが重要です。

ロンドンのウィリアム・ブーグ・リーシュマン卿とドイツのカール・ロイターは、1901年に独立して「おそらくマラホフスキーの染色の最も実用的な改良法」と考えられているものを発見しました^[4]。彼らは、マラホフスキーとジェンナーが開発した染色法の最良の側面を採用しました。つまり、多色メチレンブルー（名前の由来となったロマノフスキーが偶然に行い、ロマノフスキーより前にエルンスト・マラホフスキーが体系的に行い、ベルンハルト・ノヒトが再発見したが、ジェンナー、メイ、グルンワルド、その他単純なメチレンブルーを使用していた多くの人には知られていなかった）と、水性混合物からアズール・エオシン酸塩沈殿物を濾過し、アルコール溶媒に再溶解する（ジェンナーの知恵）という両方の方法を使用しました。リーシュマンとロイターの方法の違いは、リーシュマンがメタノールを使用し（ジェンナーのように）、エオシンYの代わりにエオシンBを使用したのに対し、ロイターはエチルアルコールを使用し、完全に純粋な溶媒を使用することの重要性を正しく強調したことです。どちらの方法でも安定した染色と希望の紫色が得られました。

リーシュマン染色は、一般に核と好中球顆粒の鮮やかな紫色を示し、分画計数が便利になり、細胞質と核のコントラストが十分でない単純なメチレンブルーとエオシンベースの染色よりも染色の質が高くなります。他のロマノフスキー染色と同様に、リーシュマン染色は細胞質の詳細と顆粒をよりよく染色するため、血液学者は一般的にこれを好みます（ただし、細胞学者については以下を参照してください）。ICSH 参照法で使用される、高価で有毒な純粋合成 AZure B とエオシン Y ベースの試薬は、酸化されて最終的に細胞質に最適な青色ではなく灰色の色調になるという欠点がありますが、それに比べると、リーシュマン染色は安価で入手しやすく、簡単に実行でき、かなり許容できるコントラストが得られる技術です。^{[引用が必要]}

リーシュマン染色はフィールド染色よりも感度が高く、マラリア原虫の検出には蛍光染色と同等の効果があることが文書化されている。^[5]

エオシンと混合した多色メチレンブルーの配合は、ギムザ染色法で直接計量して混合した比率ほど良いものではありません。1890 年に Albert Plehn ^[6]は、塩基性染料と酸性染料のモル比を 2:1 から 3:1 に増やす必要があることを突き止めましたが、Jenners の時代 (1899 年) 以降、Azure Eosinate 結晶の使用により、比率は再び不十分な 2:1 に戻り、色の濃さは薄れました。染色の濃さを取り戻したのは、 Gustav Giemsaらによる研究で、これら 2 つの成分の比率を再び手動で制御したことによります。ただし、比率を人工的に制御した Giemsa らは、おそらく不必要な反対の極端な方法 (Azure のモル過​​剰が 16.1 まで) に走ることがありました。ICSH によると、最適な比率は 6.5 対 7.3 です。^[7]

リーシュマン染色は、緩衝液で再構成すると非常に不安定になり（グリセロールのおかげで比較的安定しているギムザ染色や、メタノール+DMSOを6:4v/v比で使用するICSH参照染色とは対照的）、沈殿し始めるため、繰り返し濾過する必要があります。注意深く監視しないと、水分の吸収、開いた容器からのメタノールの蒸発、および繰り返しの濾過により組成が変化し、頻繁に交換する必要があり、この方法は無駄になります。濾過しないと、塗抹標本上の沈殿物が血小板と混同される可能性があります。使用前に染色ボトルを振らないことが重要です。そうしないと、沈殿物が再懸濁し、染色中にフィルム上に沈着して多数のアーティファクトを引き起こし、顕微鏡検査が非常に困難になります。^[要出典]

他のすべてのマラコフスキー・ロマノフスキー・ギムザ法と同様に、時間とともに色あせ、長期間安定して保存することはできません。また、上記の同等の染色法と同様に、核は濃い紫色に染色され、核の特徴の詳細はヘマトキシレンとエオシンほど鮮明ではありません。そのため、一部の細胞病理学者はこれらを好みます。しかし、その意味では補完的な方法です（ H&E染色よりも細胞質の詳細、顆粒などを染色するため）。^{[引用が必要]}