ロマノフスキー染色

ロマノフスキー染色は、血液学（血液の研究）と細胞病理学（病変細胞の研究）で広く使用されている、いくつかの異なるが類似した染色の先駆けとなった原型的な染色技術です。ロマノフスキー型染色は、病理標本、特に血液や骨髄のフィルムの顕微鏡検査で細胞を区別するために使用され、^[1]血液中のマラリアなどの寄生虫を検出するために使用されます。 ^{[2] [3] [4] [5]}

この染色法は、血液の染みとしての可能性を最初に認識したロシアの医師ドミトリー・レオニドヴィッチ・ロマノフスキー（1861年 - 1921年）にちなんで名付けられました。 ^[6]

ロマノフスキー型染色に関連または派生した染色には、ギムザ染色、ジェンナー染色、ライト染色、フィールド染色、メイ・グリュンワルド染色、パッペンハイム染色、リーシュマン染色などがあります。これらはプロトコルや添加物が異なり、実際には名前が混同されることがよくあります。

ロマノフスキー染色の価値は、幅広い色調を生成し、細胞成分を容易に区別できることにあります。この現象はロマノフスキー効果、またはより一般的にはメタクロマジーと呼ばれています。^[7]

染色のエオシン部分は、赤血球と好酸球の細胞質内の顆粒のピンクオレンジ色の原因です。

1891年にロマノフスキー^{[8] [9] [10]は}エオシン（典型的にはエオシンY）と熟成したメチレンブルー溶液の混合物を使用した染色法を開発し、染色成分だけでは説明できない色調、すなわち細胞核のクロマチンと一部の白血球の細胞質の顆粒内に特徴的な紫色の色合いを形成した。これはロマノフスキー効果として知られるようになった。^{[11] [12] [6] [13] [4]}エオシンと純粋なメチレンブルー単独（または組み合わせ）ではロマノフスキー効果は生じず、^{[13] [4]}この効果を生み出す活性染色法は現在ではアズールBとエオシンであると考えられている。^{[14] [3] [13]}

ロマノフスキー型染色は、純粋な染料の組み合わせから、または酸化脱 メチル化を受けたメチレンブルーから作ることができます。酸化脱メチル化により、メチレンブルーは複数の他の染色に分解され、そのうちのいくつかはロマノフスキー効果を生み出すのに必要です。^{[15] [4]}この酸化プロセスを経たメチレンブルーは、「多色メチレンブルー」として知られています。^{[15 ] [4]多色メチレンブルーには、}メチレンブルー、アズールA、アズールB、アズールC、チオニン、メチレンバイオレットベルンセゼン、メチルチオノリン、チオノリンなど、最大11種類の染料が含まれます。 ^[4]多色メチレンブルーの正確な組成は使用される方法によって異なり、同じ製造元の染色ロットでも組成が異なることがあります。^[15]

急速酸化の一般的な方法は、炭酸カリウムで溶液のpHを上げ、それを沸騰させて大気中の酸素を導入する方法です。^{[16]酸性媒体中で}二クロム酸アニオンを用いて酸化する方法など、他の方法も使用されています。

アズールBとエオシンはロマノフスキー効果を生み出すために必要な成分であることが示されているが、^{[14] [3] [13]、}これらの染色剤の純粋な形が染色液の配合に常に使用されているわけではない。^[4]アズールB（メチレンブルーの酸化生成物の1つ）の元々の供給源は、酸化剤で処理された、またはロマノフスキーの場合は自然に熟成された多色メチレンブルー溶液であった。^{[3] [13]}エルンスト・マラホフスキーは1891年に、ロマノフスキー型染色に使用するために意図的に多色メチレンブルーを初めて使用した。^{[15] [17]}

ライト染色は単独でも、ギムザ染色と組み合わせても使用でき、ライト・ギムザ染色として知られています。^[1]ライト染色は、 1902 年^[18]に熱を使用して多色メチレンブルーを生成し、これをエオシン Y と組み合わせる方法を発表したジェームズ・ホーマー・ライトにちなんで名付けられました。 ^{[19] [20] [21] [1]}多色メチレンブルーをエオシンと組み合わせ、沈殿させてエオシン酸塩を形成し、メタノールに再溶解します。^[4]ライト染色にギムザを加えると、細胞質顆粒の「赤紫色」の色が明るくなります。^{[1] [21]}ライト染色とライト・ギムザ染色は、米国で一般的に使用されている 2 つのロマノフスキー型染色で、主に血液と骨髄のフィルムの染色に使用されます。^{[21] [1]}

ジェンナー染色は、顕微鏡検査で血液塗抹標本の染色 に使用されます。染色は濃い青色で、非常に観察しやすい明瞭に染色された核が得られます。

ギムザ染色は「アズール II」とエオシン Y から成り、メタノールとグリセロールを溶媒として用いている。^[15]「アズール II」はアズール B (ギムザは「アズール I」と呼んだ) とメチレンブルーの混合物であると考えられているが、「アズール I」の正確な組成は企業秘密とされている。^{[4] [15]}既知の染料を使用した同等の配合が発表されており、市販されている。ギムザ染色はマラリア原虫の検出と識別のための標準的な染色と考えられている。^[5]

メイ・グリュンワルド・ギムザ染色は、腫瘍細胞の診断のために組織病理学研究室で 細針吸引によって得られたスライドの染色に使用されます。

この方法は、メイ・グリュンワルド染色とギムザ染色を組み合わせたものです。

1901年にウィリアム・リーシュマン^[22]は、ルイス・ジェンナーの染色法に似た染色法を開発したが、純粋なメチレンブルーを多色メチレンブルーに置き換えた。^{[19] [15] [4]}リーシュマンの染色法は、メタノールを溶媒として、多色メチレンブルーとエオシンYのエオシン酸塩から作られる。^[4]

野外染色は、マラリア原虫を発見するために厚い血液塗抹標本を染色するために使用されます。

ロマノフスキー染色は、血液塗抹標本の形での血液検査、および骨髄生 検や穿刺標本の顕微鏡検査で広く使用されています。 ^{[1] [23]}血液と骨髄の両方の検査は、さまざまな血液疾患の診断に重要です。^{[1] [23]}米国では、ロマノフスキー染色のライト染色とライトギムザ染色の変種が広く使用されていますが、^[1]ヨーロッパではギムザ染色が一般的に使用されています。^[1]

ロマノフスキー染色のうち、ギムザ染色は血液サンプル中のマラリア原虫の検出と同定に特に重要である。^{[5] [15]} マラリア抗原検出検査は、マラリア検出のための血液塗抹標本の染色と顕微鏡検査の代替手段である。^[5]

ロマノフスキー染色は、穿刺吸引物や腰椎穿刺による脳脊髄液などの細胞病理学的標本の染色にも使用されます。^[24]

この一般的な染色法の発明者が誰なのかについては議論があるが、一般的にはドミトリ・レオニドヴィッチ・ロマノフスキーが考案したとされている。^{[14] [17] [19]}

1870年代にポール・エールリッヒは、酸性染料と塩基性染料の混合物、酸性フクシン（酸性染料）とメチレンブルー（塩基性染料）を使用して血液塗抹標本を検査しました。^{[25] [26] [27] [28] [17]} 1888年にチェスラフ・イワノビッチ・チェンジンスキーはメチレンブルーを使用しましたが、エールリッヒが使用した酸性フクシンをエオシンに置き換えました。^{[14] [27] [28]チェンジンスキーの染色の組み合わせは、}マラリア原虫（マラリア原虫 属）を染色することができました。 [ ^{28] [19]}エールリッヒの染色もチェンジンスキーの染色も、使用したメチレンブルーが多色ではなかったため、ロマノフスキー効果を生み出しませんでした。^[17]

ドミトリ・ロマノフスキーは1890年に、彼の血液染色（熟成したメチレンブルーとエオシンの混合物）の予備的研究結果を発表し、マラリア感染血液に適用した場合の結果も発表した。^[6]この多色メチレンブルーの使用により、ロマノフスキーの染色（およびその後の配合）は、ロマノフスキー効果に関連する紫色を欠いたエールリッヒとチェンジンスキーの染色とは区別された。^[17]ロマノフスキーの1890年の出版物には、彼がメチレンブルー溶液をどのように修正したかについての説明は含まれていなかったが、^{[6] [17]} 1891年の博士論文では、表面にカビが発生し始めた後にメチレンブルーを使用するのが最適であると説明している。^{[6] [17]}熟成したメチレンブルー溶液の使用以外は、ロマノフスキーの染色はチェンジンスキーの染色技術に基づいていた。^[17]ロマノフスキーが自分の方法をマラリア原虫の研究に使用したことは、彼の染色法に対する継続的な関心のおかげだと考えられている。^[26]

エルンスト・マラホフスキーは、1891年にドミトリ・ロマノフスキーと同じ染色の組み合わせを独自に観察したとされているが、^{[6] [13]}、彼はそれを最初に行ったともされている。^{[17] [19]}マラホフスキーは、意図的に多色化したメチレンブルー溶液を使用した最初の人物であり、^[15]マラホフスキーは染色混合物にホウ砂を加えることでこれを実現した。 ^[17]マラホフスキーは、1890年6月15日に染色を実演し、同年に「公開実演を説明した」論文を発表したと報告されている。^[19]ロマノフスキー法とマラホフスキー法はどちらも、マラリア原虫の核と細胞質を染色することができた。それまで使用されていた染色は細胞質のみを着色するものだった。^[19]

1899年、ルイス・レオポルド・ジェンナーは、水性混合物中に形成される沈殿物を集め、それをメタノールに再溶解することで、メチレンブルーとエオシンの染色のより安定したバージョンを開発した。^{[28] [15 ] [ 4]}集められた沈殿物から調製されたロマノフスキー型染色は、エオシン酸塩と呼ばれることもある。^{[4]染色の安定性を高めることに加えて、}ジェンナー染色におけるメタノールの使用は血液サンプルを固定する効果があったが、 ^[4]ジェンナーの染色バージョンはロマノフスキー効果を生じない。^{[28] [19] [15]}

リチャード・メイとルートヴィヒ・グリュンワルドは1892年に、ジェンナーが1899年に提案したバージョンに似た染色（現在ではメイ・グリュンワルド染色として知られている）を発表しましたが、これも同様にロマノフスキー効果を生み出しません。^{[28] [19] [15]}

1901年、カール・ロイターとウィリアム・リーシュマン^[22]は、ルイス・ジェンナーの溶剤としてのアルコールの使用とマラコウスキーの多色メチレンブルーの使用を組み合わせた染色法を開発した。^{[19] [15] [4]ロイターの染色法はメタノールの代わりに}エチルアルコールを使用する点でジェンナーの染色法と異なり、リーシュマンの染色法はエオシンYの代わりにエオシンBを使用する点でジェンナーの染色法と異なっていた。^{[19] [4]}

1902年にジェームズ・ホーマー・ライトは、熱を利用してメチレンブルーをエオシンYと組み合わせ、多色染色する方法を発表しました^{[18]。この技術は}ライト染色として知られています。^{[19] [20]}

グスタフ・ギムザの名前もこの染色と結び付けられるようになった。彼は1902年に有用な配合とプロトコルを発表したとされている。 ^{[13] [6] [26]}ギムザは、組成が非常に変動しやすい多色メチレンブルー溶液ではなく、純粋な染料の組み合わせを使用しようとした。^{[20] [19] [15]}ギムザは染色剤を製造する権利を売却したが、製造方法の詳細を完全に公表することはなかったが、^[19]アズールBとメチレンブルーの組み合わせを使用したと考えられている。^[15]ギムザは1902年から1934年の間に染色剤の改良版を数多く発表した。1904年^[29]には、染色剤の安定性を高めるために、メタノールとともにグリセリンを加えることを提案した。^{[23] [19]}

ドイツで生産されたギムザ染色粉末は、第一次世界大戦中に供給が途絶えるまで米国で広く使用されていたが、その後ジェームズ・ホーマー・ライトのメチレンブルー染色法の利用が増加した。^{[19] [1]}

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