グラナダ ミディアム

グラナダ培地は、Streptococcus agalactiae （B群連鎖球菌、GBS）を選択的に分離し、他の微生物と区別するために設計された選択的かつ分化的な培養培地です。グラナダ培地は、グラナダ（スペイン）のビルヘン・デ・ラス・ニエベス病院微生物学部門のマヌエル・ローザ・フライルらによって開発されました。^[1]

グラナダ培地上でのGBSの同定は簡単で、GBS特有の赤色ポリエン色素であるグラナダエンの検出に依存しています。 ^{[2] [3] [4]}

グラナダ培地は、米国ではハーディ・ダイアグノスティクス社^{[5]によって販売されており、欧州連合と英国ではバイオメリュー社[6]}とベクトン・ディキンソン社^[7]によって商標(®)として販売されている。

pH7.45±0.1

グラナダ培地は、臨床検体からGBSを選択的に分離・同定するために開発された。^[1]グラナダ培地上での赤色色素（グラナダエン）の産生は、ヒトから分離されたβ溶血性B群連鎖球菌に特有である。^[8]

グラナダエンは、 12個の二重結合の共役系を持つ非イソプレノイド多環色素（オルニチンラムノドデカエン）である。 ^{[3] [9] [10]}

GBSでは、β溶血と色素生成は12個の遺伝子からなる遺伝子クラスター、 cylクラスターによってコード化されている。 ^{[11] [12]} さらに、GBSの色素と溶血素は同一または密接に関連した分子であることが示唆されており、これらがGBSの毒性に寄与する重要な因子であることも報告されている。^{[8] [13] [14]}

グラナダ寒天は、主にMOPS（グッド緩衝液）とリン酸で緩衝化され、メトトレキサートと抗生物質が補充されたプロテオースペプトンデンプン寒天で構成されています。[ 1 ]^プロテオースペプトン、馬血清、グルコース、ピルビン酸ナトリウムは、ストレプトコッカス・アガラクティエの成長に必要な栄養素を提供し、ピルビン酸ナトリウムは活性酸素種（ROS）に対する保護効果も提供します。MOPSとリン酸は培地を緩衝化します。メトトレキサートは色素生成を刺激し、 ^[8]デンプンは色素を安定化します。^[8]選択的補充物には、抗生物質、コリスチン（グラム陰性菌に対して阻害薬）、メトロニダゾール（嫌気性菌に対して阻害薬）、および付随するグラム陽性菌を抑制するクリスタルバイオレットが含まれています。

グラナダ培地の主要成分はプロテオースペプトンN3（Difco & BD）です。このペプシンペプトンは、第一次世界大戦中にワクチン製造用の細菌毒素を製造するためにDIFCO（Digestive Ferments Company）によって開発されました。^[15]

グラナダ培地でGBSの赤レンガコロニーを発達させるには、培養培地中にペプチドIle-Ala-Arg-Arg-His-Pro-Tyr-Pheが存在することが必要である。このペプチドは、哺乳類アルブミンのペプシンによる加水分解中にのみ生成される。^[16]

色素の最適な生成には、ペプトンの製造に使用される哺乳類の胃腸壁組織由来の他の物質（現時点では未解明）がペプトン中に存在することも必要である。^[17]

デンプンの存在は、GBSの赤いコロニーの発達を可能にする色素を安定させるための基本的な要件です。^[8]

しかしながら、可溶性デンプンを使用すると、可溶性デンプンは血清（サプリメントとして添加）アミラーゼによって加水分解されるため、室温では培養培地が急速に劣化することになる。この欠点は、血清を使用しないか、培養培地を調製するために未変性デンプンを使用することで解決できる。未変性デンプンはアミラーゼの加水分解作用に対してより耐性があるからである。^[18]

GBSはグラナダ寒天培地上で18～48時間培養（35～37℃）するとピンクがかった赤色のコロニーとして増殖し、嫌気性（嫌気性環境での培養）でより良い結果が得られます。^[1]

グラナダ寒天は、臨床検体からのβ溶血性GBSの一次分離、同定、スクリーニングに使用されます。^{[2] [4]} この培地はGBSに対して選択的ですが、使用する選択剤に耐性のある他の微生物（腸球菌や酵母など）は、無色または白色のコロニーとして発生する可能性があります。^[2]

グラナダ寒天培地は、妊婦の膣および直腸におけるGBSのコロニー形成を検出し、分娩中の抗生物質予防により新生児の早期GBS感染を回避するためのスクリーニングに有用である。^{[19] [20] [21] [22]} また、グラナダ寒天培地上のGBSの色素沈着は、侵襲性GBS疾患を発症するリスクが高い妊婦および新生児を特定するのに役立つ可能性も示唆されている^[23]。

検体はグラナダ寒天培地に直接塗抹するか、または最大限の分離を得るために増菌ステップの後に塗抹することができます。^[20] 検体は研究室に到着したらできるだけ早く塗抹する必要があります。綿棒から材料を培養する場合（膣または膣直腸綿棒など）、綿棒を寒天培地に直接転がして培地に綿棒が十分に接触するようにし、微生物の移動を最大限にします。培養物を嫌気性環境に置き、35～37℃で培養し、一晩培養した後、約48時間後に再度検査します。^[1]

GBSの回収率を高めるために、スワブをあらかじめ選択増菌培地（ゲンタマイシンまたはコリスチンとナリジクス酸を添加したトッド・ヒューイット培地など）に接種し、35～37℃で18～24時間培養することもできる。^{[20] [21] [22]}

β溶血性GBSのコロニーはグラナダ培地上でピンクまたは赤のコロニーとして現れ、培地上で増殖している可能性のある他の微生物と簡単に区別できます。オレンジ色の発育はGBSコロニーの兆候とみなされ、それ以上の識別テストは必要ありません。^{[2]非β溶血性GBSはグラナダ寒天培地上で白いコロニーとして発育し、必要に応じてラテックス凝集反応または}CAMPテストを使用してさらに検査することができます。^{[4] [20]}

グラナダ寒天培地は、培地の上にカバーガラスを載せれば好気的に培養することもできる。 ^[2]

^{グラナダ培地は、Strep Bニンジンブロス[25]}などの液体培地（グラナダブロス） ^[24]としても使用できます 。グラナダ培地の液体を使用する場合、嫌気性培養は必要ありません。^[2]

GBSではβ溶血と色素（グラナダエン）産生は12個の遺伝子からなる遺伝子クラスター、 cylクラスターによってコードされている。^{[11] [12]}

さらに、GBS色素と溶血素は同一または密接に関連した分子であることが示唆されており、GBSの毒性に寄与する重要な因子であることも報告されている。^{[8] [13] [14]}

しかしながら、GBS株の1～5％は非溶血性であり、色素を生成しません。^[8] しかし、これらの非溶血性および非色素性GBS株（色素と溶血素を欠く）は毒性が低いと考えられています。 ^{[13] [14] [26] [27] [28] [29]}