pUC19のベクターマップpUC19は、 Joachim Messingと共同研究者によって設計された一連のプラスミドクローニングベクターの1つです。 [ 1 ]「pUC」という名称は、古典的な「p」接頭辞（「プラスミド」を意味する）と、このプラスミドシリーズの初期の研究が行われたカリフォルニア大学の略称に由来しています。 [ 2 ] pUCプラスミドはすべて、長さ約2700塩基対の環状二本鎖DNAです。[ 3 ] pUCプラスミドは、最も広く使用されているクローニングベクターの1つです。[ 3 ]これは、コロニーの色の違いに基づいて、形質転換に成功した細胞とそうでない細胞を容易に区別できるためです。[ 3 ] pUC18はpUC19に似ていますが、マルチクローニングサイト（MCS）領域が逆になっています。
特徴
組換え細胞のスクリーニングに関わる分子メカニズムの模式図pUC19は、大腸菌のβ-ガラクトシダーゼ（lacZ）遺伝子のα-ペプチドをコードしています。[ 4 ] [ 3 ]これにより、lacZDM15変異を含む宿主株（例えば、大腸菌JM109、DH5α、XL1-Blue株）と併用すると、青白スクリーニングが可能になります。これらの株は、β-ポリペプチドとしても知られるlacZのC末端部分のみを産生します。 [ 3 ] pUC19をこれらの株のいずれかに挿入し、IPTG存在下で培養すると、細菌は酵素の両方の断片を合成します。両方の断片は一緒にX-gal（5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリル-β-D-ガラクトピラノシド）を加水分解し、培地に添加すると青色のコロニーを形成します。pUC19のマルチクローニングサイト（MCS）はlacZ遺伝子内にあります。[ 4 ] MCSへのDNAの挿入はα-ペプチド遺伝子の挿入不活性化を引き起こし、対立遺伝子内相補性を阻害する。したがって、組換えプラスミドを含む細胞は機能的なβ-ガラクトシダーゼを産生しないため、青色の非組換え細胞と区別できる白色のコロニーとして現れる。[ 5 ]
pUC19はβ-ガラクトシダーゼに加えて、β-ラクタマーゼ酵素を介してアンピシリン耐性遺伝子（amp R ）もコードしており、この酵素はアンピシリンを分解して宿主に対する毒性を低下させる働きをする。 [ 6 ] pUC19で正常に形質転換された細胞は、アンピシリンを含む培地で培養することで、形質転換されていない細胞と区別することができる。amp Rを含むプラスミドを持つ細胞のみが生存する。
複製起点（ori ）はプラスミドpMB1に由来する。[ 7 ] [ 1 ] pUC19は高コピー数プラスミドである。[ 3 ]高コピー数はrop遺伝子の欠損とoriにおける一点突然変異の結果である。[ 8 ] [ 9 ] [ 10 ]
研究での使用
pUC19は研究や産業においてクローニングベクターとして広く利用されているため、研究においてモデルプラスミドとして頻繁に使用されています。[ 11 ]例えば、その自然な超らせん状態に関する生物物理学的研究では、回転半径が65.6 nm、ストークス半径が43.6 nmであることが決定されています 。
このプラスミドの参照サンプルは、BCCM/GeneCornerなどの公的生物資源センターによって保管されています。
参考文献
- 1 2 Yanisch-Perron, Celeste; Vieira, Jeffrey; Messing, Joachim (1985). "改良されたM13ファージクローニングベクターと宿主株：M13mp18およびpUC19ベクターのヌクレオチド配列". Gene . 33 (1): 103– 119. doi : 10.1016/0378-1119(85)90120-9 . PMID 2985470 .
- ↑ Vieira, Jeffrey; Messing, Joachim (1982). "pUCプラスミド、合成ユニバーサルプライマーを用いた挿入変異誘発および配列決定のためのM13mp7由来システム". Gene . 19 (3): 259– 268. doi : 10.1016/0378-1119(82)90015-4 . PMID 6295879 .
- 1 2 3 4 5 6 Henkin, Tina M. ; Peters, Joseph E. (2020). "プラスミド". Snyder and Champness molecular genetics of bacteria (第 5版). Hoboken, NJ: John Wiley & Sons, Inc. pp. 208–209 . ISBN 9781555819750。
- 1 2 Louro, Ricardo O.; Crichton, Robert R. (2013).生物無機化学への実践的アプローチ. アムステルダム、オックスフォード: Elsevier . p. 279. ISBN 97804445635902014年4月7日に取得。
- ↑パステルナック、ジャック J. (2005).ヒト分子遺伝学入門（第 2版）.ワイリー. p. 117. ISBN 978-0-471-71917-5。
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- ↑ Helinski, Donald R. (2022年12月15日). "プラスミドの簡単な歴史" . EcoSal Plus . 10 (1): eESP-0028-2021. doi : 10.1128/ecosalplus.esp-0028-2021 . PMC 10729939 . PMID 35373578 .
- ↑ O'Hanlon Cohrt, Karen (2014年11月26日). "pUC18 – おそらく世界最高の高コピープラスミド！" . BiteSize Bio .
- ↑ Lin-Chao, Sue; Chen, Wen-Tsuan; Wong, Ten-Tsao (1992). "pUCプラスミドの高コピー数はRNA IIのRom/Rop抑制性点変異に起因する". Molecular Microbiology . 6 (22): 3385– 3393. doi : 10.1111/j.1365-2958.1992.tb02206.x .
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- ↑ Störkle, Dominic (2007年9月5日). 「異なる鎖トポロジーの反対電荷ポリ電解質によるDNAの複合体形成：円筒形ブラシとデンドリマー」. Macromolecules . 40 ( 22): 7998–8006 . Bibcode : 2007MaMol..40.7998S . doi : 10.1021/ma0711689 .
外部リンク
- pUC19の配列
- pUC19の特徴、配列、および物理的サンプル
