アミロウディニウム・オセラタム

アミルーディニウム・オセラタム（Brown, 1931）は、汽水および海水環境に生息する多数の水生生物に寄生する普遍的な外部 寄生性渦 鞭毛藻類である。この渦鞭毛藻類は温帯および熱帯地域に固有のもので、脊索動物門、節足動物門、、扁形動物門の4つの水生生物門で確認されており、さまざまな環境や多数の宿主にうまく適応することができる。さらに、硬骨魚類および板鰓類に感染することができる唯一の渦鞭毛藻類である。

この寄生虫は、養殖魚と観賞魚の両方にとって深刻な問題です。この原生動物によって引き起こされる感染症であるアミルーディニシスは、急性罹患率と死亡率が約100%で、12時間以内に宿主を死に至らしめる可能性があるためです。ただし、これら2つのパラメーターは、養殖類型、寄生虫負荷、魚種、季節によって大きく異なります。^[1]一般的に、アミルーディニシスは、海底が浅く、​​水の交換/再循環が不十分なため、寄生虫が最適な増殖値に達する陸上またはラグーンベースの養殖場（渓谷養殖または内陸汽水養殖）でよく見られます。特に最も暖かい月には、A. ocellatumは高い死亡率と経済的損害を引き起こします。^[2]

門: Alveolata、綱: Dinophyceae、目: Thoracosphaerales 、科: Thoracosphaeraceae 、属: Amyloodinium、種: Amyloodinium ocellatum

A. ocellatumのライフサイクルは直接的で、3 つのフェーズに分かれています。一般的に、温度と塩分がそれぞれ 23～27 °C と 30～35 ppt の場合、5～7 日で完了します。ただし、この寄生虫は極端な条件下でも毒性を発揮します。特に、塩水 (46 ppt) と汽水 (7 ppt) の両方の環境で、高温 (35 °C 以上) で致命的な発生が記録されています。^[1]

寄生段階は、固着性トロフォントによって代表される。この段階では、原生生物は洋ナシ型で、セルロース壁に囲まれ、宿主上皮（主に鰓または皮膚）にしっかりと固定できる特定の構造である仮根（触手のような突起）を示す。感染が重度の場合、トロフォントは目、ひれ、およびすべての口腔咽頭腔にも見られる。後者は、ヨーロッパスズキ（Dicentrarchus labrax）の典型的な感染部位である。トロフォントは固定されたまま絶えず動いているため、細胞に物理的損傷を引き起こし、宿主に深刻な損傷を与え、寄生虫負荷に応じて12〜48時間以内に死に至る可能性がある。文献のデータに基づくと、トロフォントはおそらく口足^{[明確化が必要] を}使って宿主細胞から直接栄養を摂取し、消化酵素を放出して^[3] 、それが仮根の病変を悪化させます。トロフォントのサイズは大きく異なり、初期のトロフォントは 27×23 μm ですが、成熟すると 130×60 μm 以上になることもあります。

摂食後2～6日で、栄養体は宿主から離れ、不活性基質（池や水槽の底、海底）に被嚢し、生殖段階であるトモントに変化する。この段階では、原生動物は丸く、セルロース壁に包まれている。セルロース壁は厚くなり、不利な条件やいくつかの治療法に対して並外れた耐性を付与する。原生動物は無性生殖し、最初の分裂は縦方向であるが、その後の分裂はほぼ規則的で、互いに直角になる。潜在的には、2～4日で、1つのトモントから256個の新しい恐竜胞子が生成される可能性がある。新しく形成された恐竜胞子の数は、栄養体の栄養状態に直接相関している。^[4]

感染段階は、ハンバーガーに似た前後方向に圧縮された形状の渦巻胞子（8～13.5 × 10～12.5 μm）である。この段階では、装甲（セルロース壁）原生生物は、縦方向と横方向の2本の鞭毛のおかげで活発に泳ぐことができる。新しい宿主に付着した後、渦巻胞子は5～20分以内に栄養体へと変化する。^[3]

A. ocellatumは、いわゆる「海洋ベルベット病」またはアミロディニオーシス（この原生動物は元々Oodinium ocellatumと名付けられていたため、過去にはウーディニオーシスとしても知られていた）の病原体である。この感染症は動物を傷つけ、二次的な細菌感染を促進するため、宿主にとって極めて危険で、時には致命的となる。A . ocellatumに感染したことがない魚類は、すべてのライフステージで感染する可能性がある。原生動物の病原性は、宿主組織へのトロフォントの付着に関連している。トロフォントは常にねじれたり回転したりしながら、いくつかの宿主細胞をゆっくりと損傷し、殺す。^[3]重度の鰓肥大、炎症、出血、壊死を伴う中程度から激しい組織反応を引き起こし、感染がひどい標本では 12 時間以内に死に至る。しかし、浸透圧調節障害と重篤な上皮損傷による二次的な微生物感染 の結果として、無症状または軽度の感染でも死亡例がいくつか記録されています。

通常、宿主の行動の変化がアミルーディニシスの最初の症状であり、水面に集まる際のけいれん的な動き（フラッシュ）、掻痒、呼吸困難として表れます。感染が進行すると、無気力と食欲不振が現れます。アミルーディニシスの別の臨床的兆候は、ヨーロッパのスズキに見られるように皮膚がほこりっぽく見えることです（そのため「マリンベルベット病」と呼ばれます） 。ただし、すべての魚種に当てはまるわけではありません。

A. ocellatum は、養殖魚だけでなく、水槽で飼育されている魚にとっても深刻な問題です。養殖類型、寄生虫負荷、魚種、季節との相互作用によりますが、アミロディニシスは、急性罹患率および死亡率が約 100% で、12 ～ 48 時間以内に宿主を死に至らしめる可能性があります。通常、この感染は陸上またはラグーンベースの養殖場 (渓谷養殖または内陸汽水養殖) に影響を及ぼし、その特性 (浅い海底および不十分な水交換/再循環) により、寄生虫は最も毒性を発揮します。最も暖かい月には、寄生虫が最適な増殖率に達し、A. ocellatum は高い死亡率と経済的損害を引き起こす可能性があります。

アミロディニシスの診断は、典型的な臨床徴候を観察し、非致死的技術を使用することから構成される。トロフォントを検出するには、皮膚擦過物と鰓生検のウェットマウント検査による細胞学的アプローチが推奨される。麻酔をかけた小型魚は、鰓蓋構造をそっと持ち上げて実体顕微鏡で直接観察することができる。同じアプローチは死後の魚にも採用できるが、寄生虫は宿主の死後すぐに剥離することが多いため、死んだばかりの魚を検査する方がよい。^{[1] [3]}希釈したルゴールヨウ素を皮膚または鰓に滴下すると、ヨウ素がデンプンを含むトロフォントと反応して暗褐色/黒色に着色するため、A. ocellatum の検出が改善されることがある。 ^[1]

分子同定は、臨床的および顕微鏡的同定に加えて、2 番目の確認診断ステップとして適用できます。最近開発された分子アプローチ ( PCRおよび LAMP) は、無症状の感染など、寄生虫が最低濃度で存在する場合でも、水と鰓組織サンプル中の渦鞭毛藻を早期に検出できることが証明されています。^[5]そのため、これらの方法により、感受性のある魚の個体群における病原体の負荷を非常に感度よく監視できる可能性があります。^[1] A. ocellatumの分子診断は、LSU rDNA 遺伝子の 3' 末端の 248 bp セグメントのPCR 増幅用のプライマー AO18SF (5' GACCTTGCCCGAGAGGG 3') および AO18SR (5' GGTGTTAAGATTCACCACACTTTCC 3')に基づいています。^{[6] [5]} CLUSTALwを使用した多重配列アライメントにより、配列決定されたAOは地中海（DQ490256.1）、紅海（DQ490257.1）、中国福建省（KU761581.1およびKR057921.1）、米国ミシシッピ州南部（JX905204.1）のさまざまな地理的分離株で保存されていることが確認されました。 ^[6]しかし、これらの技術はまだ研究室での使用に限られています。

並行して、 ELISA（酵素結合免疫吸着測定法）などの免疫学的アプローチでは、アミロディニシスの発生から回復した魚や実験的に寄生虫に曝露された魚の特異的な抗A. ocellatum抗体レベル^{[1] [3]}を検出することができます。抗体価の上昇は耐性と関連しているため、ELISAアッセイは感受性集団の保護レベルを監視するのに役立つ可能性があります。

1930 年代から、さまざまな魚種のアミロディニシスを抑制するための取り組みがいくつか行われてきましたが、完全に効果的であることが証明された治療法や世界中で認可された治療法はありません。原生動物は最も暖かい月に指数関数的に繁殖する可能性があり、温度が寄生虫の増殖速度に影響を与えるため、早期診断とそれに続く迅速な治療が重要です。化学療法には、ホルマリン (濃度 4mg/L の 36% ホルムアルデヒドを 7 時間または 51mg/L の 1 時間)、過酸化水素 (75 および 150mg/L を 30 分間、6 日後に繰り返す)、硫酸銅、クロロキン (5-10 mg/L 水) などがあります。ただし、一部の薬剤に対して顕著な感受性を示すのはディノスポアのみで、トロフォントとトモントはより耐性があります。^{[1] [3]}

硫酸銅は、遊離銅イオンの殺ジノスポラ特性が実証されていることに加え、安価で入手しやすいことから、養殖におけるA. ocellatumの流行を制御するための最も効果的な処理の 1 つです。 ^{[7] [8]一定の銅濃度を維持しながら、0.75～1 g/m 3}の硫酸銅を池やタンクに滴下して約 2 週間注入すると、ジノスポアを殺すのに非常に効果的ですが、トモントやトロフォントはあまり影響を受けません。現在、硫酸銅は効果的な藻類駆除剤として承認されているにもかかわらず、アミロディニシスの治療薬としては欧州規則 n. 1907/2006 (REACH) では承認されていません。

淡水浴は、宿主が突然の浸透圧ショックを受けることで、トロフォントを皮膚や鰓上皮から剥離させる効果的な方法です。^{[1] [3] [8]}しかし、淡水浴の手順は大多数の海洋養殖場では依然として非現実的であり、魚種によっては同様の処理に耐えられないものもあります。

A. ocellatum は完全には制御できないため、制御戦略は危険な発生を避けるための予防措置として意図されています。効果的な濾過システムと適切な衛生手順 (つまり、取水水の機械的濾過と組み合わせた紫外線の使用) は、感染のリスクを軽減するのに役立ちます。渦鞭毛藻はエアロゾル飛沫を介して運ばれる可能性があるため、 ^[9]強風によって拡散すると、農機具や隣接する池/タンク、および近くの施設を汚染する可能性があることを強調することが重要です。このため、材料の綿密な消毒プロトコルと適切な管理方法は、農場で必須と見なされるべきです。

考慮すべきもう 1 つの点は、適切な飼育場所の選択です。寄生虫症はその特性によって影響を受ける可能性があります。通常、海で飼育された魚は感染の影響を受けませんが、漁場や内陸の汽水養殖システムでは感染を制御するのがより困難です。

ワクチン接種による病気の予防は不可能ですが、寄生虫の潜在的なワクチン候補タンパク質、つまり i 抗原を特定するための研究が進行中です。アミロディニシスを生き延びた魚は、少なくとも部分的な免疫を獲得する可能性があります。

1931年（最初のA. ocellatum報告の年）以来、数多くの調査が行われてきました。原生動物の生物学と生態学は 1930 年代から 1940 年代にかけて正確に記述され、その後の数十年間に詳しく記述されました。1984 年、 Paperna ^[4]は、 3 段階のA. ocellatumの毒性に影響を与える環境特性を特定しました。3 年後、Noga は重要な実験室調査の実施の基礎となるin vitro増殖プロトコルを確立することに成功しました。このプロトコルの代替手段は、冬眠状態の tomonts をin vitro で維持することに基づいており、最近、 Horizo​​n2020 Project ParaFishControl の一環としてウディネ大学の研究者グループによって開発されました。このプロジェクトの枠組みの中で、研究者は現在、代替治療薬を調査し、原生動物に対するより的を絞った予防策を開発しています。野心的ではありますが、このプロジェクトの目的はA. ocellatumに対するワクチンを作成することです。

• フランシス・フロイド、ルース、マキシン・R・フロイド。養殖海水魚の重要な寄生虫、アミルーディニウム・オセラタム。南部地域水産養殖センター、2011 年。

• 「アミルーディニウム・オセラタム」。生命百科事典。