Φ29 DNA複製Φ29は、配列が決定された19,285塩基対 の線状DNAゲノムを持つ枯草菌 のバクテリオファージである。 [ 1 ] 各5'末端は末端タンパク質 に共有結合しており、このタンパク質はウイルスDNAポリメラーゼのプライマーとして機能し、複製プロセスに不可欠である。複製は対称的な様式で行われると考えられており、タンパク質プライマーによる開始は染色体の両端から同時には起こらない。これには2つの複製起点と2つの異なるポリメラーゼモノマーが関与する。合成は連続的であり、鎖置換機構が関与する。これは、酵素がM13ファージ の単一プライマー環状ゲノムを1本の鎖で10倍以上(1本の鎖で70kb以上)コピーし続けることができる能力によって実証された。[ 2 ] in vitro実験では、Φ29の複製はポリメラーゼと末端タンパク質というファージタンパク質のみの要件で完了できることが示されている。[ 2 ] [ 3 ] ポリメラーゼは、末端タンパク質と染色体末端のアデニン 残基との間に開始複合体の形成を触媒します。ここから、連続的な合成が起こります。
全ゲノム増幅 Φ29ポリメラーゼ酵素は、すでに多重置換増幅(MDA) 手順(市販のキットにも多数含まれている)で使用されており、ゲノムに沿って一定間隔でアニーリングする非特異的六量体プライマーから数十キロベースの長さの断片を生成することができる。この酵素は、この方法による全ゲノム増幅 (WGA)に適した多くの望ましい特性を備えている。[ 8 ]
高い処理能力。[ 2 ] 校正活動。[ 7 ] Taqポリメラーゼ よりも1桁または2桁エラーが少ないと考えられている。[ 9 ] 10KBを超える大きな断片を生成します。 PCRベースの方法よりも約1桁多いDNAを生成する。[ 10 ] 最小限のテンプレートで済みます。10 ngで十分です。 新規複製機構;多重鎖置換増幅。 ランダムプライマー (ヘキサマー)を使用すればよく、特定のプライマーを設計したり、特定の領域を標的とする必要はありません。 温度サイクル試験は不要です。 PCRベースのアプローチと比較して、良好なカバレッジと増幅バイアスの低減が実現している。現在使用されているWGA法の中で最もバイアスが少ないという推測もある。[ 10 ]
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