スピンカラムによる核酸精製

スピンカラムベースの核酸精製は、核酸を迅速に精製するための固相抽出法です。この方法は、核酸が特定の条件下でシリカの固相に結合するという事実に依存しています。

手順

この方法の段階は、溶解、結合、洗浄、溶出である。^[1]^[2]より具体的には、標的細胞を溶解して核酸を放出し、核酸をシリカ膜に選択的に結合させ、シリカ膜に結合していない粒子や阻害剤を洗い流し、核酸を溶出させ、最終結果として水溶液中に精製された核酸が得られる。

溶解するには、サンプルの細胞（血液、組織など）に対して、細胞膜を破壊して核酸を遊離させる処理を施す必要があります。対象物質に応じて、これには洗剤やその他の緩衝液、プロテイナーゼやその他の酵素の使用、さまざまな時間/温度への加熱、ナイフやホモジナイザーによる切断、乳鉢と乳棒の使用、ビーズミルによるビーズ叩きなどの機械的破壊が含まれます。

結合のために、溶解したサンプルに緩衝液とエタノールまたはイソプロパノールを加えます。結合溶液中のサンプルはスピンカラムに移され、カラムは遠心分離機にかけられるか、真空に接続されます。遠心分離機/真空により、溶液はスピンカラム内にあるシリカ膜に押し出され、適切なイオン条件下では、残りの溶液が通過する間、核酸はシリカ膜に結合します。ターゲット物質が結合したら、通過液を取り除くことができます。

洗浄するには、カラムに新しいバッファーを追加し、膜を通して遠心分離/真空吸引します。このバッファーは、結合条件を維持しながら、結合塩やその他の残留汚染物質を除去することを目的としています。通常、シリカ膜上の核酸から汚染物質がなくなるまで、エタノール/イソプロパノールの割合を増やしながら、数回の洗浄が必要です。最後の「洗浄」は、アルコールを蒸発させて精製された核酸だけをカラムに結合させる乾燥ステップであることが多いです。

最後に、溶出はカラムに水溶液を加えるプロセスで、親水性核酸がカラムから出て溶液に戻ります。このステップは、塩、pH、時間、または熱によって改善される場合があります。最後に、溶出液/溶出液を捕捉するために、最後の遠心分離ステップの前にカラムをきれいなマイクロチューブに移します。

参照

参考文献

^ マトソン、ロバート S. (2008)。マイクロアレイの方法とプロトコル。フロリダ州ボカラトン：CRC。pp. 27–29。ISBN 978-1420046656。
^ クマール、アニル (2006)。遺伝子工学。ニューヨーク：ノヴァサイエンス出版社。pp. 101–102。ISBN 159454753X。
^ Marko MA、Chipperfield R、Birnboim HC。アルカリ抽出とガラス粉末への結合を使用した高純度プラスミドDNAの大規模単離手順。Anal Biochem。1982年4月;121(2): 382-7。PMID 6179438
^ Boom R、Sol CJ、Salimans MM、Jansen CL、Wertheim-van Dillen PM、van der Noordaa J. 核酸を精製するための迅速かつ簡単な方法。 J クリンマイクロバイオル。 1990 年 3 月;28(3):495-503。PMID 1691208

[1] マトソン、ロバート S. (2008)。マイクロアレイの方法とプロトコル。フロリダ州ボカラトン：CRC。pp. 27–29。ISBN 978-1420046656。

[2] クマール、アニル (2006)。遺伝子工学。ニューヨーク：ノヴァサイエンス出版社。pp. 101–102。ISBN 159454753X。

[3] Marko MA、Chipperfield R、Birnboim HC。アルカリ抽出とガラス粉末への結合を使用した高純度プラスミドDNAの大規模単離手順。Anal Biochem。1982年4月;121(2): 382-7。PMID 6179438

[4] Boom R、Sol CJ、Salimans MM、Jansen CL、Wertheim-van Dillen PM、van der Noordaa J. 核酸を精製するための迅速かつ簡単な方法。 J クリンマイクロバイオル。 1990 年 3 月;28(3):495-503。PMID 1691208

手順

関連する方法

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