グルコースリン酸ブイヨン

グルコースリン酸ブロスは、メチルレッド(MR) テストとVoges-Proskauer テスト(VP)を実行するために使用されます。

• グルコース– 5 g/L
• リン酸二カリウム– 5 g/L
• プロテオース ペプトン– 5 g/L
• 蒸留水– 1000 mL

pH – 6.9

これは、グルコースの発酵によって混合酸を生成する生物の能力と、培地の緩衝能力を克服する能力を決定するために使用されます。

試験微生物の純粋培養物をマッコンキー（グルコースリン酸ブロス）に接種します。ブロスを 35 °C で 48 ～ 72 時間培養します。

インキュベーション後、チューブの側面からメチルレッド 5 滴をブロスに直接加えます。

培地の表面に安定した赤色が現れると、十分な酸が生成されて pH が 4.4 に下がり、陽性反応を示します。他の生物は試験基質からより少量の酸を生成する可能性があるため、黄色と赤色の中間のオレンジ色になることがあります。これは陽性反応を示すものではありません。

各ロットの培地を調製した後、陽性コントロールと陰性コントロールを実行する必要があります。

陽性対照：大腸菌

陰性対照：クレブシエラ

これは、いくつかの生物がグルコース発酵から中性最終生成物であるアセチルメチルカルビノール (アセトイン) を生成する能力を判定するために使用されます。クレブシエラ、エンテロバクターなどのメンバーによって生成される中性反応最終生成物であるアセトインの生成は、グルコース代謝の主な最終生成物であり、少量の混酸を形成します。大気中の酸素と 40% KOH の存在下では、アセトインはジアセチルに変換され、α-ナフトールが赤色複合体を生成する触​​媒として機能します。

グルコースリン酸ブイヨン

A: α-ナフトール – 5 g

• 無水エチルアルコール – 100 mL – 0.6 mL – 3部
• B: KOH – 40 g
• 蒸留水 – 100 mL – 0.2 mL – 1部

グルコースリン酸ブロス培地のチューブに試験微生物の純粋な接種物を接種し、35 °C で 24 時間培養します。

この培養液 1 mL に 5% α-ナフトール 0.6 mL を加え、続いて 40% KOH 0.2 mL を加えます。チューブを軽く振って培地を大気中の酸素にさらし、チューブを 10 ～ 15 分間そのままにしておきます。

陽性反応は、試薬を添加してから 15 分以上経過した後に赤色に変化することで表され、アセトインの酸化生成物であるジアセチルが存在することを示します。陰性の VP 培養では銅のような色が生成され、試薬を混合した際の作用によっても 偽陽性の解釈につながる可能性があるため、1 時間放置すると、反応は赤色になるはずです。

各ロットの培地を調製した後、陽性コントロールと陰性コントロールを実行する必要があります。

陽性対照：クレブシエラ

陰性対照：大腸菌^[1]