Gレスカセット

Gレスカセット転写アッセイは、分子生物学において、試験管内でプロモーターの強度を決定するために使用される方法です。この技術では、プラスミドを使用してmRNA産物を定量化します。^{[ 1 ]} Gレスカセットは、通常、カセットの上流にマルチクローニングサイト（MCS）を含む、あらかじめ構築されたベクターの一部です。このため、目的のプロモーターをMCSに直接挿入して、最終的に転写機構をリクルートするプロモーターの正確性と効率を測定できます。

G-less カセットは、DNA のセンス鎖にグアニンヌクレオチドを欠く転写産物をコードするレポーター遺伝子です (そのため「 G -less」と呼ばれます)。^{[ 2 ]}このような遺伝子を含むプラスミドは MCS の下流に配置されます。プロモーターが MCS に挿入されると、放射性標識された UTP、CTP、ATP (および非放射性標識/コールドヌクレオチド) の添加により転写が進行し、G-less カセットの末端に達して DNA のセンス鎖にグアニン残基が再び現れるまで続きます。試験管内でGTP が存在しないため、転写はカセットに続くセンス鎖の最初のグアニン残基で早期に終了します。転写産物に対してゲル電気泳動を行い、オートラジオグラフィーまたはフォスフォイメージングにより放射能量を定量して、目的のプロモーターの強度を決定します。

Gレスカセット法は、転写の基礎レベルを超えたプロモーター強度（すなわち、転写活性化因子または転写因子の存在下）を決定するために用いられる^{[ 3 ]}。例えば、TFIIDの存在下でSaccharomyces cerevisiaeのTATAボックスコンセンサス配列の改変の影響を測定するために、Gレスカセット法を用いて各プロモーターの相対的な強度を測定した^{[ 4 ] 。}

Gレスアッセイは、環状プラスミド上で実施して転写レベルを測定できます。環状プラスミドは、切断末端が必要なランオフ転写などの他のアッセイと比較して、多くのシステムでより効率的なテンプレートを提供します。この方法は、他の間接的なmRNA産物測定を行う不要なプロセスを回避できるため、放射性標識転写産物を非常に効率的に生成します。プロモーターは、Gレスカセットを含む環状プラスミドに挿入され、プラスミド全体にわたってランダムかつ非特異的な転写を省略した特定の長さの転写産物を生成します。HeLa核抽出物などのほとんどの粗製システムは、バックグラウンド転写を引き起こし、Gレスカセットを読み飛ばすランダム転写を時折引き起こす可能性のある低濃度の汚染GTPを含むため使用されます。^{[ 5 ]}