SBPタグ

ストレプトアビジン結合ペプチド (SBP) タグは、組み換えタンパク質に組み込むことができる38アミノ酸配列です。SBP タグを含む組み換えタンパク質はストレプトアビジンに結合し、この特性は特定の精製、検出、または固定化戦略に利用できます。^[^{引用が必要}^]

SBPタグの配列はMDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGQREPである。^[1]

発見

ストレプトアビジン結合ペプチドは、mRNAディスプレイのin vitro選択技術を使用して、確率的に生成された7兆個のペプチドのライブラリ内で発見されました。選択は、ストレプトアビジンアガロースでインキュベートし、続いてビオチンで溶出することによって行われました。^[2] SBPタグは、 2.5nMの平衡解離定数でストレプトアビジンに結合することが示されており^[1]^[2]、ネイティブ条件下ではビオチンで容易に溶出されます。^[1]^[2]

アプリケーション

タンパク質精製

溶出条件が穏やかであるため（ビオチンと洗浄バッファー）、SBPタグタンパク質は1回の精製ステップで比較的純粋な状態で生成できます。^[1]^[3]^[4]一般的に使用されるポリヒスチジンタグ（Hisタグ）に結合するIMACマトリックスと本質的に関連する比較的豊富な哺乳類タンパク質がいくつかあります。このため、哺乳類細胞で発現するタンパク質には、SBPタグを含む非IMAC精製プロトコルが好まれることがよくあります。^[^{引用が必要}^]

タンパク質複合体の精製

相互作用するタンパク質の複合体も SBP タグを使用して精製できます。これは、ビオチンで溶出すると、目的の複合体が会合したままの状態で回収できるためです。たとえば、コンデンシン複合体は Kimら[2010] によって精製され、TAZ転写共活性化因子との複合体は Zhangら[2009] によって精製されました。SBP タグは、複数のタグを使用して連続的な精製ステップが利用されるいくつかのタンデムアフィニティ精製(TAP) システムにも組み込まれています。たとえば、GFP融合タンパク質とBTK -タンパク質複合体は、SBP タグと His-タグを使用して TAP プロトコルで精製されました。^[5]^[6] HDGF -タンパク質複合体は、SBP タグとFLAG タグを使用して TAP プロトコルで精製されました。 ^[7]Wnt複合体は、SBP タグと [カルモジュリンタグ] を使用して TAP プロトコルで精製されました。^[8] TAPは一般的にタンパク質複合体で使用され、いくつかの研究ではSBPタグTAPシステムを非SBPタグシステムと比較した場合、純度と収量が大幅に改善されたと報告されています。^[9]^[10]^{[11] SBPタグを使用する市販のTAPシステムには、}アジレントテクノロジーが販売するInterplay®アデノウイルスおよび哺乳類TAPシステムがあり、同様の製品がシグマアルドリッチによって販売されています。^[12]

プロテオミクス

生物学的に関連するタンパク質間相互作用のスクリーニングは、SBPタグとプロテインAを用いたタンデムアフィニティー精製（TAP） ^[10]、SBPタグとプロテインGを用いた相互作用プロテオミクスと転写因子複合体^[10]、^[13]、SBPタグとカルモジュリンタグを用いたデングウイルスタンパク質DENV-2 NS4Aと相互作用するタンパク質^[14] 、およびSBPタグとヘマグルチニン（HA）タグを用いたタンパク質ホスファターゼ2A （PP2A）と相互作用するタンパク質^{[11]を用いて実施されている。}

イメージング

SBP-Tag は溶液中のストレプトアビジンまたはストレプトアビジン試薬にも結合します。これらの人工的な結合の用途には、生細胞内の特定のタンパク質の可視化、^[15]試験管内翻訳システムにおける個々のタンパク質の翻訳速度のモニタリング、^[16] SBP-Tag を N 末端転座配列に融合し、ストレプトアビジンによる統合を停止してビオチンによる統合を再開することにより、多スパン膜タンパク質の小胞体への統合を制御することなどがあります。 ^[17]^[18]蛍光ストレプトアビジン試薬 (例: ストレプトアビジン-HRP) は、SDS-PAGE の免疫ブロッティングによって SBP-tag を可視化するために使用できます。^[1]^[19]^[20]さらに、SBP-tag に対する抗体は市販されています。^[要出典]

表面プラズモン共鳴

SBPタグは、組換えタンパク質をストレプトアビジン機能化表面上に可逆的に固定化するために使用されており、これにより、機能化表面を再利用した表面プラズモン共鳴（SPR）技術などによる相互作用評価が可能になっている。 ^{[21] SPRは、SBPタグを}Strep-tagなどの他のストレプトアビジン結合ペプチドと比較するためにも使用されている。^[22]

参照

タンパク質タグ

参考文献

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