右:紫外線下で可視化した pGLO で形質転換した細菌
右:アンピシリン、アラビノース、紫外線にさらされた pGLO で形質転換された細菌
pGLOプラスミドは、バイオテクノロジーにおいて遺伝子組み換え生物を作成するためのベクターとして使用される、人工プラスミドです。このプラスミドには、緑色蛍光タンパク質(GFP) やアンピシリン耐性遺伝子など、いくつかのレポーター遺伝子が含まれています。GFP は、クラゲのAequorea victoriaから分離されました。アラビノース代謝遺伝子と双方向プロモーターを共有しているため、GFP 遺伝子はアラビノースの存在下で発現し、その結果、トランスジェニック生物は紫外線下で蛍光を発します。pGLO プラスミドを含む細菌を +アラビノース プレート上で増殖させることで、細菌内で GFP を誘導できます。pGLO はBio-Rad Laboratories社製です。
構造
pGLO は、組み換え DNA 技術を使用して結合された 3 つの遺伝子で構成されています。これらは次のとおりです。
- Bla は、ベータラクタマーゼ酵素をコードし、形質転換された細菌にベータラクタム系抗生物質(ペニシリン系など)に対する耐性を与える。
- araC 、 GFPの発現を制御するプロモーター領域(具体的には、GFP遺伝子はアラビノースが存在する場合にのみ発現する)
- GFPは緑色蛍光タンパク質で、細胞がこのタイプのタンパク質を生成すると緑色に光ります。
他のほとんどの環状プラスミドと同様に、pGLO プラスミドには複製起点(ori) が含まれています。これは、プラスミドの複製が開始される領域です。pGLO プラスミドは、フランスの研究者によって有名になり、研究者はこれを使用してAlbaという緑色蛍光ウサギを生成しました。
pGLO の他の特徴としては、他のほとんどのプラスミドと同様に、選択マーカーと、GFP 遺伝子の末端に位置するMCS (マルチクローニングサイト) がある。プラスミドの長さは 5371塩基対である。スーパーコイル型では、アガロースゲル上で4200~4500 の範囲で泳動される。 [1] [2] [3]
GFPの発見
GFP遺伝子は、1962年に下村脩[4]と彼のチームによって、傘の下に青い光の輪を持つオワンクラゲの研究中に初めて発見されました。下村と彼のチームは、タンパク質の完全な分析に十分な量を集めるまで、何千ものクラゲからタンパク質のエクオリンを単離しました。エクオリンの研究を通じて、下村はエクオリンが青い光を発すると緑色に光る少量のGFPを発見しました。クラゲの中でGFPがエクオリンとどのように作用するかをうまく発見した後、彼はそれを他の生物の生物発光の研究に役立てました。

1994年、マーティ・チャルフィー[4]と彼のチームは、GFPタンパク質を発現する細菌と線虫の作成に成功しました。その後すぐに、ロジャー・ツィエン[5]と彼のチームは、緑だけでなくさまざまな色を発する変異GFPの作成に成功しました。
3人の科学者は緑色蛍光タンパク質GFPの発見と開発により 2008年のノーベル化学賞を受賞しました[6] 。
参考文献
- ^ 「Biotechnology Explorer™ タンパク質電気泳動による GFP: pGLO™ 細菌形質転換キットの拡張機能」(PDF)。2012 年 2 月 24 日のオリジナル(PDF)からアーカイブ。
- ^ Eichbaum QG、Iyer R、Raveh DP、Mathieu C、Ezekowitz RA (1994 年 6 月)。「インターフェロン ガンマ応答性の制限と骨髄ヒト Fc ガンマ R1b 遺伝子の基礎発現は、機能的な PU.1 サイトと転写開始因子コンセンサスによって媒介される」。The Journal of Experimental Medicine。179 ( 6): 1985–96。doi :10.1084/ jem.179.6.1985。PMC 2191524。PMID 8195721。
- ^ Eichbaum Q, Heney D, Raveh D, Chung M, Davidson M, Epstein J, Ezekowitz RA (1997 年 11 月). 「マウスマクロファージマンノース受容体プロモーターは転写因子 PU.1 および SP1 によって制御される」. Blood . 90 (10): 4135–43. doi : 10.1182/blood.V90.10.4135 . PMID 9354684.
- ^ ab Ferry, Georgina (2018). 「Osamu Shimomura」. Nature . 563 :627. doi : 10.1038/d41586-018-07401-1 . S2CID 53775369 – Gale in Context: Scienceより。
- ^ 「緑色蛍光タンパク質の歴史」Conncoll.edu。
- ^ 「2008年ノーベル化学賞」NobelPrize.org . 2020年10月19日閲覧。
