抽出可能な核抗原

抽出可能な核抗原( ENA ) は、100 種類を超える可溶性の細胞質抗原および核抗原です。これらは生理食塩水を使用して細胞核から除去できるため「抽出可能」と呼ばれ、Ro、La、Sm、RNP、Scl-70、Jo1 の 6 つの主要なタンパク質を表します。ほとんどの ENA はスプライソソームまたはヌクレオソーム複合体の一部であり、小型核リボ核タンパク質(snRNPS)の一種です。核内の位置とスプライソソームまたはヌクレオソームとの関連により、これらの ENA は追加の RNA やポリメラーゼなどのタンパク質と関連します。ENA のこの性質により、臨床使用のために精製して存在を定量化することが困難になることがよくあります。^[1]

抽出可能核抗原パネル（ENA パネル）は、細胞核内のタンパク質と反応する血液中の自己抗体の存在を検査します。これは通常、抗核抗体（ANA ）検査が陽性だった場合のフォローアップとして、および自己免疫疾患の症状が見られる場合に行われます。ANA は自己抗体の有無を検査し、ENA パネルは自己抗体が細胞核内のどのタンパク質を認識するかを評価します。ENA パネルは、自己免疫疾患の診断、区別、および進行の監視に役立ち、簡単な採血で実施されます。自己抗体のレベルは生涯にわたって変動する可能性がありますが、いったん自己抗体が発生すると、常に自己抗体を持つことになります。これらの抗原に対する自己抗体は、特定の結合組織疾患に関連しています。実際、陽性抗 ENA サンプルの 84.3% で ANA 試薬も検出されました。^[1]抗ENA自己抗体検査は自己免疫疾患の追加検証として役立ちます。なぜなら、ANA検査が陽性であるだけでは診断には不十分だからです。実際、健康な患者でも低レベルのANAが見つかることがあります。抗ENA検査の用途は、特定のグループから患者グループを除外すること、結合組織疾患、疾患活動のモニタリングなど多岐にわたります。本質的には、特定の自己抗体が存在しない場合に特定の自己免疫疾患を除外し、これらの自己抗体のレベルが増加または減少した場合に疾患の進行を追跡することができます。抗ENAの存在を確認するには、偽陽性を避けるために2つ以上の方法を使用して抗ENAを確認することが現在推奨されています。自己免疫性結合組織疾患（CTD）の診断は、臨床症状と徴候の分析だけでなく、核抗原に対する自己抗体の同定によっても行われます。2002年の論文では、免疫学研究室で抗ENAを測定するために使用されている診断検査と、この検査と報告を改善する方法の比較も試みられています。ゲルベースの技術である二重免疫拡散法（DID）と対免疫電気泳動法（CIEP）は、CTD患者におけるこれらの抗体の臨床的意義と役割に関する情報を得るために使用されます。^[2]

ENA は発見されて以来、結合組織疾患の診断ツールとして使用されてきました。初期の研究では、抗 ENA とその疾患との関連性を特定するために、広く使用されている 2 つのゲルベースの技術、二重免疫拡散法 (DID) ^[3]と対免疫電気泳動法 (CIEP) が使用されました。これらの技術は両方とも、有効な結果を得るために抗原の沈殿を必要とします。調査対象の抗 ENA によっては、どちらかの技術が他方よりも使用される場合があります。たとえば、Scl-70 抗原は負に帯電しにくいため、抗原が抗体と同じ方向に移動する可能性があります。その結果、抗体抗原複合体が沈殿せず、無効な結果につながります。^[4]さらに、シェーグレン症候群でよく識別される抗 SS-B 抗体の一部は、この方法では検出されない可能性があります。ただし、この方法は経済的に実行可能であり、診断を確認するための特異性があります。これらのゲルベースの技術からのデータを見るときに注意すべき感度が 2 つあります。アッセイ感度と疾患感度です。アッセイ感度は抗体が存在するかどうかを認識する能力であり、疾患感度は抗体が疾患で発生する頻度を認識する能力です。ゲルベースの技術は疾患感度に限界があるため、疾患感度を低下させることなくアッセイ感度を高めるために他の技術が研究されてきました。たとえば、全身性エリテマトーデス（SLE）患者の場合、ゲルベースのアッセイを使用すると、抗SMが検出できるのはわずか8～40％です。CIEPはDIDよりも感度が高いことが示されています。^[5]

ENA を識別し、特定の疾患と関連付けるために、受動赤血球凝集法、酵素免疫測定法 (ELISA)、ウェスタンブロッティング (WB) の 3 つの追加技術を使用できます。受動赤血球凝集法は 1970 年代後半に人気がありましたが、これを使用した研究はほとんど行われておらず、抗 Sm 抗体と抗リボ核タンパク質 (RNP) 抗体に限定されていました。^[5] 酵素免疫測定法(ELISA) は、実行が簡単で、定量的で、大量出力が可能なため、抗 ENA の検査に最も広く使用されている技術になりました。この方法はアッセイの感度が高く、大量処理のラボでは効率的ですが、他の技術に比べて疾患特異性が大幅に低くなります。これは、細胞の核内の複合体との関連性のために、多額の費用をかけずに ENA を適切に分離できないためです。 ELISA法に関するもう一つの懸念は、SLEではない患者にも抗Sm抗体が報告されており、過剰検査につながる可能性があることだが、これは使用される抗原源の品質に起因する可能性がある。^[5] ウエスタンブロッティングには、立体構造エピトープを標的とした抗体を検出できないという大きな欠点がある。その上、偽陽性が発生する可能性があり、疾患特異性は他の技術よりも低い。各技術には長所と短所があるが、ELISA法は偽陽性の可能性（偽陰性よりも危険性が低い）と費用という最も軽微な欠点がある。^[5]

多くの研究室では、特異性を犠牲にすることなく効率を高めるために、これら両方の技術を組み合わせて使用​​しています。ヨーロッパのコンセンサスワークショップによる現在の推奨事項は、ELISA技術を使用して抗ENA陽性をスクリーニングすることです。陽性と特定されたサンプルには、CIEPなどのより特異的なテストが続きます。^[6]

免疫学研究室で検出に用いられる主な抗原はRo、La、Sm、RNP、Scl-70、Jo1の6つであり^[7]、これらはオクターロニー二重免疫拡散法でスクリーニングされ、免疫ブロット法で確認される。抗核抗体検査では、これらの抗原は斑点模様を呈する。^[8]

ENAはもともと、細胞核の生理食塩水抽出物中に存在するタンパク質を指していました。^[9]その後、成分はより明確に特定され、実際には多くの細胞質分子が含まれています。しかし、この誤った名称はそのまま残っています。これらのタンパク質はさまざまなRNA分子と密接に関連しているため、リボ核タンパク質と呼ばれていますが、それらに使用されている命名法はしばしば混乱の原因となっています。Sm、Ro、およびLaは、最初に発見された患者の姓の最初の2文字にちなんで名付けられました。シェーグレン症候群に関連する2つのタンパク質は、それぞれ抗原Aおよび抗原Bとして説明されていましたが、現在ではそれぞれRoおよびLaと同一であることがわかっています。つまり、SS-A = RoおよびSS-B = Laです。

ENA（抽出可能核抗原）パネル検査は、細胞核内のタンパク質に対する自己抗体を検査します。「抽出可能」という用語は、生理食塩水と一般的なタンパク質を使用して核から自己抗体を除去できることに由来しています。これらの検体を識別する方法から、生理食塩水抽出抗原に対する抗体とも呼ばれています。^[9]

抗ENAは、混合性結合組織病（MCTD）、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスのスクリーニングによく使用される抗体のグループであり、通常は6つの検査で構成されています。^[10]

• 抗Sm（SLE用）
• 抗RNP（MCTD用）
• 抗La/抗SS-B（シェーグレン症候群用）
• 抗Ro/抗SS-A（シェーグレン症候群用）
• 抗Scl70（強皮症用）
• 抗ジョウ（皮膚筋炎用）

これらの検査の感度と特異性は、使用するアッセイの種類によって異なるため、検査室によって異なります。次の表は、ELISA 技術で SLE を検出する際の ENA 抗体の感度と特異性を示しています。

さらに、ENA検査はセリアック病などの小麦関連疾患の研究にも使用されています。2018年に実施された研究では、小麦関連疾患の患者を対象に10種類の抗ENA抗体の検査が行われました。

• SSA（ロ）
• SSB（ラ）
• RNP/Sm
• ジョー-1
• 小
• SCL-70
• クロマチン
• セントロメア
• ヒストン
• RNAポリメラーゼIII

セリアック病患者の73%が抗ヒストン抗体陽性で、最も多く見られました。これは典型的には薬剤誘発性エリテマトーデスと関連しています。これは小麦関連疾患の患者に自己免疫疾患の可能性が高いことを示唆しています。^[12]

• 米国国立医学図書館医学件名表(MeSH)の抽出可能物質 + 核 + 抗原