方法 ある生物のDNAに標識を付け、比較対象となる標識なしのDNAと混合する。混合物をインキュベートしてDNA鎖を解離させ、その後冷却して新たなハイブリッド二本鎖DNAを形成する。類似性の高いハイブリッド配列はより強く結合し、分離するにはより多くのエネルギーが必要となる。例えば、類似性の低い配列よりも高い温度で加熱すると分離する。このプロセスは「DNA融解 」として知られている。[ 2 ] [ 3 ] [ 4 ]
ハイブリダイズしたDNAの融解プロファイルを評価するために、二本鎖DNAをカラムまたはフィルターに結合させ、混合物を少しずつ加熱します。各段階で、カラムまたはフィルターを洗浄し、融解した配列を一本鎖にして洗い流します。標識DNAが洗い流される温度は、配列間の類似性の程度を反映します(自己ハイブリダイゼーションサンプルはコントロールとして機能します)。これらの結果を組み合わせて、生物間の遺伝的類似性の程度を決定します。[ 5 ]
多数のDNAサンプルを1枚の膜上で多数のDNAプローブとハイブリダイズさせる方法が導入された。サンプルは膜内の個々のレーンに分離する必要があり、その後、複数のDNAプローブとの同時ハイブリダイゼーションを可能にするために回転させる必要がある。[ 6 ]
用途 複数の種を比較する場合、類似度値を用いることで、生物を距離行列 に配置し、系統樹を作成することができる。したがって、これは 分子系統学 を実施するための有効な手法の一つである。
微生物学において DNA-DNAハイブリダイゼーション(DDH)は、細菌種を正確に視覚的に分類することが難しいため、細菌種を識別する主要な方法として使用されています。[ 7 ] この技術は、種の違いが識別しやすい大型生物には広く使用されていません。1900年代後半には、DNA-DNA類似度が70%以上で、融解温度が5 ℃以内であれば、菌株は同じ種に属すると考えられていました。[ 8 ] [ 9 ] [ 10 ] 2014年には、細菌の亜種を分離するための閾値として79%の類似度が提案されました。[ 11 ]
DDHは細菌の一般的な手法ですが、手間がかかり、エラーが発生しやすく、技術的に難しいです。2004年に新しいDDH手法が発表されました。この手法では、マイクロプレートと比色標識DNAを使用して、必要な時間を短縮し、処理できるサンプルの量を増やしました。[ 12 ] この新しいDDH手法は、細菌分類の標準となりました。[ 13 ]
放射能において 1969年、イェール大学のメアリー・ルー・パデューとジョセフ・G・ガルは放射能を用いてそのような方法の一つを実施しました。これは、溶液中の放射性試験DNAを細胞学的標本の静止DNAにハイブリダイゼーションさせるもので、オートラジオグラフィーとして知られています。[ 16 ]
参考文献 ↑ エルコ・スタッケブラント(2010年9月8日)。原核生物の分子同定、分類、および集団構造 。シュプリンガー・サイエンス&ビジネス・メディア。ISBN 978-3-540-31292-5 。 ↑ シンデン、リチャード R. (1994). DNAの構造と機能 . サンディエゴ:アカデミックプレス. pp. 37–45 . ISBN 0-12-645750-6 OCLC 30109829 ↑ 生体分子科学におけるツールとテクニック 。アイシャ・ディヴァン、ジャニス・ロイズ。オックスフォード:オックスフォード大学出版局。2013年 。ISBN 978-0-19-969556-0 . OCLC 818450218 . {{cite book}}: CS1 メンテナンス: その他 (リンク)↑ Forster, AC; McInnes, JL; Skingle, DC; Symons, RH (1985-02-11). "新規試薬フォトビオチンによるDNAおよびRNAの化学標識によって作製された非放射性ハイブリダイゼーションプローブ" . Nucleic Acids Research . 13 (3): 745– 761. doi : 10.1093/nar/13.3.745 . ISSN 0305-1048 . PMC 341032 . PMID 2582358 . ↑ Hood, DW; Dow, CS; Green, PN (1987). "ピンク色素を持つ通性メチロトローフにおけるDNA:DNAハイブリダイゼーション研究" . Journal of General Microbiology . 133 (3): 709– 720. doi : 10.1099/00221287-133-3-709 . ISSN 0022-1287 . PMID 3655730 . ↑ ソクランスキー、親衛隊;スミス、C.マーティン、L.パスター、BJ。フェリダ州デュワースト。レビン、AE (1994 年 10 月)。 」 「チェッカー ボード」DNA-DNAハイブリダイゼーション」。BioTechniques。17 (4 ) :788–792。ISSN 0736-6205。PMID 7833043 。 ↑ Auch, Alexander F.; von Jan, Mathias; Klenk, Hans-Peter; Göker, Markus (2010). "Digital DNA-DNA hybridization for microbial species delineation by means of genome-to-genome sequence comparison" . Standards in Genomic Sciences . 2 (1): 117– 134. Bibcode : 2010SGenS...2..117A . doi : 10.4056 / sigs.531120 . ISSN 1944-3277 . PMC 3035253. PMID 21304684 . ↑ Brenner DJ (1973). "腸内細菌の分類におけるデオキシリボ核酸の再会合" . International Journal of Systematic Bacteriology . 23 (4): 298– 307. doi : 10.1099/00207713-23-4-298 . ↑ Wayne LG、Brenner DJ、Colwell RR、Grimont PD、Kandler O、Krichevsky MI、Moore LH、Moore WEC、Murray RGE、Stackebrandt E、Starr MP、Trüper HG (1987)。 「細菌分類学 へ のアプローチの調和に関する特別委員会の報告」 。International Journal of Systematic Bacteriology。37 ( 4): 463–464。doi : 10.1099 / 00207713-37-4-463 。 ↑ Tindall BJ、Rossello-Mora R、Busse HJ、Ludwig W、Kampfer P ( 2010)。 「分類学的目的のための原核生物 株 の 特性評価に関する注記」 。International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology。60 ( Pt 1): 249–266。doi : 10.1099 / ijs.0.016949-0。hdl : 10261 / 49238。PMID 19700448 。 ↑ Meier-Kolthoff JP、Hahnke RL、Petersen JP、Scheuner CS、Michael VM、Fiebig AF、Rohde CR、Rohde MR、Fartmann BF、Goodwin LA、Chertkov OC、Reddy TR、Pati AP、Ivanova NN、Markowitz VM、Kyrpides NC、Woyke TW、Klenk HP、Göker M (2013)。 「 大腸菌 のタイプ株(U5/41 T )である DSM 30083 T の完全ゲノム配列 と、微生物分類学における亜種の区分 に関する 提案」 。Standards in Genomic Sc iences。9 2。doi : 10.1186 / 1944-3277-9-2。PMC 4334874。PMID 25780495 。 ↑ Mehlen, André; Goeldner, Marcia; Ried, Sabine; Stindl, Sibylle; Ludwig, Wolfgang; Schleifer, Karl-Heinz (2004年11月). "マイクロプレートの融解プロファイルに基づく高速DNA-DNAハイブリダイゼーション法の開発". Systematic and Applied Microbiology . 27 (6): 689–695 . Bibcode : 2004SyApM..27..689M . doi : 10.1078/0723202042369875 . ISSN 0723-2020 . PMID 15612626 . ↑ Huang, Chien-Hsun; Li, Shiao-Wen; Huang, Lina; Watanabe, Koichi (2018). "Identification and Classification for the Lactobacillus casei Group" . Frontiers in Microbiology . 9 : 1974. doi : 10.3389/fmicb.2018.01974 . ISSN 1664-302X . PMC 6113361 . PMID 30186277 . ↑ 遺伝的類似性:ウィルソン、サリッチ、シブリー、アールクイスト ↑ CG Sibley & JE Ahlquist (1984). "DNA–DNAハイブリダイゼーションによって示されるヒト上科霊長類の系統発生". Journal of Molecular Evolution . 20 (1): 2–15 . Bibcode : 1984JMolE..20....2S . doi : 10.1007/BF02101980 . PMID 6429338. S2CID 6658046 . ↑ Pardue, Mary Lou、および Joseph G Hall。「放射性DNAと細胞学的標本のDNAとの分子ハイブリダイゼーション」。イェール大学クライン生物学タワー、1969年8月13日。 ↑ マークス、ジョナサン (2007-05-09)。 「類人猿におけるDNAハイブリダイゼーション—技術的問題」 。2007-05-09 の オリジナルからアーカイブ。2019-06-02 に 取得 。 ↑ SS Socransky; AD Haffajee; C. Smith; L. Martin; JA Haffajee; NG Uzel; JM Goodson (2004). "チェッカーボードDNA-DNAハイブリダイゼーションを用いた複雑な微生物生態系の研究". Oral Microbiology and Immunology . 19 (6): 352–362 . doi : 10.1111/j.1399-302x.2004.00168.x . PMID 15491460 . 1 2 Meier- Kolthoff JP、Auch AF、Klenk HP、Goeker M ( 2013)。 「信頼区間と改良された距離関数によるゲノム配列に基づく種の 境界 決定 」 。BMC Bioinformatics。14 60。doi : 10.1186 / 1471-2105-14-60。PMC 3665452。PMID 23432962 。 ↑ Riojas, Marco A.; McGough, Katya J.; Rider-Riojas, Cristin J.; Rastogi, Nalin; Hazbón, Manzour Hernando (2018年1月1日). "Mycobacterium tuberculosis複合体の種の系統ゲノム解析により、Mycobacterium africanum、Mycobacterium bovis、Mycobacterium caprae、Mycobacterium microti、Mycobacterium pinnipediiはMycobacterium tuberculosisの後期異型同義語であることが示された" . International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology . 68 (1): 324– 332. doi : 10.1099/ijsem.0.002507 . PMID 29205127 . ↑ Arahal, David R.; Bull, Carolee T.; Busse, Hans-Jürgen; Christensen, Henrik; Chuvochina, Maria; Dedysh, Svetlana N.; Fournier, Pierre-Edouard; Konstantinidis, Konstantinos T.; Parker, Charles T.; Rossello-Mora, Ramon; Ventosa, Antonio; Göker, Markus (2023年4月27日). "司法意見 123–127". International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology . 72 (12). doi : 10.1099/ijsem.0.005708 . hdl : 10261/295959 . PMID 36748499 .
さらに読む グラウル、D. & リー、WH. 1991年(第2版1999年)。分子進化の基礎。