局所リンパ節検査

マウス局所リンパ節アッセイ（LLNA）は、皮膚感作性を評価するための生体内試験である。

LLNAは、モルモット最大化試験やビューラー試験に取って代わる主要な試験法となった。より科学的で、動物の苦痛が少ない（動物の数が少なく、苦痛も少ない）と考えられており、科学界および規制当局から広く受け入れられている。

LLNAの原理は、皮膚感作物質が塗布部位を排出するリンパ節でリンパ球の増殖を誘導するというものである。リンパ球の増殖は、放射性標識（トリチウム標識チミジンの定量）、生物発光（リンパ球中のATP含有量の定量）、または免疫測定法（BrdUに特異的な抗体を用いたELISA）によって測定できる。^[¹^]

試験物質をマウスの耳に塗布する。必要に応じて、3H-メチルチミジンやBrdUなどのトレーサー物質を腹腔内注射してリンパ球への取り込みを促す。動物を安楽死させ、リンパ節細胞を採取して分析する。投与した動物のリンパ節におけるトレーサーの取り込み率を対照動物と比較し、刺激指数（SI）を算出する。刺激指数が3を超える場合（SI > 3）、関連する感作能があるとみなされる。従来のモルモット試験とは異なり、LLNAは試験対象化学物質の感作能を定量的に測定できる。^{[ 2 ]}

LLNAは、特定の金属化合物、界面活性剤、高分子量タンパク質、強い皮膚刺激物質、および治療中に許容できる期間耳に十分に付着しない物質には適さない場合があります。マウス、モルモット、ヒトにおける物質の感作性には、絶対的な一致はありません。

規制

OECD化学物質試験ガイドライン第429号（2010年7月23日）^{[ 3 ]} BrdU-ELISA法およびBrdU-FCM法はOECD試験ガイドライン第442B号に記載されている^{[ 4 ] 。}

REACH規則附属書VII、第8.3項には、「マウス局所リンパ節アッセイ（LLNA）は、生体内試験の第一選択法である。例外的な状況においてのみ、他の試験法を用いるべきである。他の試験法を用いる場合は、その正当性を示す必要がある。」と規定されている。

欧州ガイドラインOECD 406「皮膚感作性」によれば、皮膚感作性の可能性を評価する第一段階として、LLNAまたはMEST（マウス耳腫脹試験）を用いることができる。いずれかの試験で陽性反応が出た場合、試験物質は潜在的な感作物質とみなされ、モルモットを用いた追加試験は不要となる場合がある。しかし、LLNAまたはMESTで陰性反応が出た場合は、モルモットを用いた試験（好ましくはGPMTまたはBT）を実施しなければならない。

参考文献

↑ Michael J. Derelanko、Carol S. Auletta 編 (2014)、毒性学ハンドブック(第 3 版)、CRC Press、ISBN 978-1-4398-9014-1
↑クラウゼン、トーマス。シュワン＝ヨンチック、アネット。ラング、ギュンター。シュー、ヴェルナー。リープシャー、クラウス・ディーター。クリスチャン・スプリンオブ。フランツケ、マイケル。バルツァー、ヴォルフガング。イムホフ、ソーニャ。マレシュ、ゲルハルト。 Bimczok、Rudolf (2007)、「Hair Preparations」、Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry (第 7版)、Wiley、doi : 10.1002/14356007.a12_571.pub2、ISBN 978-3-527-30385-4
↑ 「試験番号429：皮膚感作性：局所リンパ節アッセイ」 2010年7月22日。
↑ 「試験番号442B：皮膚感作性」OECD。2025年6月24日。 2025年7月16日取得。

[1] Michael J. Derelanko、Carol S. Auletta 編 (2014)、毒性学ハンドブック(第 3 版)、CRC Press、ISBN 978-1-4398-9014-1

[2] クラウゼン、トーマス。シュワン＝ヨンチック、アネット。ラング、ギュンター。シュー、ヴェルナー。リープシャー、クラウス・ディーター。クリスチャン・スプリンオブ。フランツケ、マイケル。バルツァー、ヴォルフガング。イムホフ、ソーニャ。マレシュ、ゲルハルト。 Bimczok、Rudolf (2007)、「Hair Preparations」、Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry (第 7版)、Wiley、doi : 10.1002/14356007.a12_571.pub2、ISBN 978-3-527-30385-4

[3] 「試験番号429：皮膚感作性：局所リンパ節アッセイ」 2010年7月22日。

[4] 「試験番号442B：皮膚感作性」OECD。2025年6月24日。 2025年7月16日取得。

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