esiRNAまたはエンドリボヌクレアーゼ調製siRNAは、大腸菌RNase IIIやDicerなどのエンドリボヌクレアーゼによる長い二本鎖RNA（dsRNA ）の切断によって生じるsiRNAオリゴの混合物である。[ 1 ] [ 2 ]
RNA干渉（RNAi ）に化学合成siRNAを用いる方法に代わる概念として、長い二本鎖RNAを試験管内で酵素消化する方法がある。この場合、cDNAテンプレートをPCRで増幅し、2つのバクテリオファージプロモーター配列を付加する。次にRNAポリメラーゼを用いて、標的遺伝子cDNAと相同な長い二本鎖RNAを生成する。このRNAを大腸菌由来のRNase IIIで消化し、18～25塩基対の長さの短い重複したsiRNA断片を生成する。この複雑な短い二本鎖RNAの混合物は、生体内でのDicerによる切断によって生成される混合物と類似しているため、エンドリボヌクレアーゼ処理siRNA、または短いesiRNAと呼ばれる。esiRNAは、すべて同じmRNA配列を標的とするsiRNAの異種混合物である。これらの複数のサイレンシングトリガーにより、非常に特異的かつ効果的な遺伝子サイレンシングが実現する。[ 2 ]
参考文献
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外部リンク
- 哺乳類細胞におけるRNAiスクリーニングのためのesiRNA
- 哺乳類細胞における特異的かつ効果的な遺伝子サイレンシングのためのエンドリボヌクレアーゼ処理短鎖干渉RNA（esiRNA）の作製
