緩衝炭酵母エキス寒天培地

緩衝炭酵母エキス（BCYE）寒天培地は、特定の種類の細菌、特にグラム陰性菌であるレジオネラ・ニューモフィラを培養または増殖させるために使用される選択的増殖培地です。^{[ 1 ]}また、アカントアメーバ角膜炎^{[ 2 ]}、フランシセラ属、ノカルジア属の検査診断にも使用されています。L-システインアミノ酸とピロリン酸第二鉄が含まれており、レジオネラ菌の増殖を助けます。培地中の炭は、レジオネラ菌に毒性のある過酸化水素を分解するため、解毒剤として機能します。BCYE中の酵母エキスは、細菌の増殖に必要な栄養素（ビタミン、窒素、炭素）の豊富な供給源です。BCYEにはACES緩衝液も含まれており、細菌の増殖に最適なpHレベル（約6.9）を維持します。^{[ 3 ]} BCYEは、特に環境水や非飲料水の検体をスクリーニングする場合、レジオネラ菌を選択するために抗生物質で補完されることがあります。

*ピロリン酸第二鉄（可溶性）は乾燥した暗所に保管してください。

CDCのレジオネラ菌検査に関するガイダンスより：^{[ 5 ]}

1. ACES緩衝液を940mlの蒸留水に加え、50  ℃の恒温水槽で溶解する。
2. 緩衝溶液に1.0 N KOH（約40 mL）をゆっくりと加え、pHを6.9に調整して混ぜます。（NaOHはレジオネラ・ニューモフィラ菌の増殖を阻害することが分かっているため、使用しないでください。）
3. 別のフラスコに、活性炭、酵母エキス、α-ケトグルタル酸、寒天を加える。乾燥粉末を混ぜ合わせる。
4. 緩衝溶液を乾燥粉末が入った2番目のフラスコに注ぎ、混ぜ合わせる。
5. 寒天を溶かすために慎重に加熱し、その後、121  ℃で15分間オートクレーブ滅菌する。
6. 培地を直ちに50  ℃の恒温水槽に入れる。
7. 完全培地を作るには、メンブレンフィルターでろ過したL-システイン溶液を培地にゆっくりと加え、よく混ぜてください。L-システインは使用直前に調製する必要があります。
8. 膜ろ過した可溶性ピロリン酸第二鉄をゆっくりと加え、よく混ぜてください。L-システインはキレート剤であるため、培地に加える前に鉄とシステインを混ぜないでください。
9. 培地のpHを室温で6.9に調整します。試薬が異なる場合があるため、各研究室で必要なKOHの量を決定する必要があります。完成した培地を50  ℃に保ち、10mLのサンプルを注ぎ、室温でpHを確認します。必要に応じて、完成した培地を1.0N KOHまたは1.0N HClで調整します。ACES緩衝液のpKaは20  ℃で6.9、25  ℃で6.8であることに注意してください。そのpKaは温度によって影響を受けます（0.02 pH単位/℃）。ただし、寒天が固まると、pHは温度によって変化せず、6.9のままになります。
10. BCYE + 抗生物質の調製には、膜ろ過した抗生物質を加えて混合する。
11. BCYE + アルブミン寒天培地の場合、アルブミンを蒸留水に溶解し、培地に加える前に濾過滅菌してください。
12. 15×100mmのペトリ皿に20mLずつ分注する。

培地は、木炭粒子が懸濁状態を保つように、注ぐ際に頻繁に混ぜる必要があります。培地が固まったら、プレートは暗所で冷蔵庫内のビニール袋に保管してください。品質管理に合格すれば、準備したプレートは約4か月間使用できます。^{[ 5 ]}

レジオネラ菌は、表面が滑らかで無色から青または灰色ですが、時間の経過とともに白くなり、糸状になり、紫外線の下では緑色や黄色の蛍光を発します。コロニーの表面は通常滑らかですが、顕微鏡で見ると目玉焼きのような外観を示す株もあります。^{[ 3 ]}

BCYEプレートは、2～8℃の温度で暗所に保管してください。プレートを凍らせたり、過熱させたりしないでください。光への曝露は最小限に抑えてください。BCYEは、ほとんどの培地と同様に、使用時以外は開封しないでください。また、培地に何かを接種する前に、室温に戻してください。^{[ 6 ]}