ストリーキング（微生物学）

微生物学では、画線法は、単一種の微生物（多くの場合、細菌）から純粋な菌株を分離するために使用される手法です。その後、得られたコロニーからサンプルを採取し、新しいプレート上で微生物学的培養物を増殖させて、その生物を識別、研究、または検査することができます。

現代の画線平板法は、ロバート・コッホや他の微生物学者が細菌を研究するために微生物学的培養物を得ようとした努力から発展しました。画線法による希釈または分離は、コッホの研究室で彼の2人の助手、フリードリヒ・レフラーおよびゲオルク・テオドール・アウグスト・ガフキーによって最初に開発されました。この方法では、ペトリ皿の寒天の外側に細菌を系統的に画線して希釈し、分離されたコロニーを取得します。その後、分離されたコロニーは大量の細胞または分離されたコロニーに成長します。寒天表面に遺伝的にすべて同一の微生物が成長した場合、その培養は微生物学的培養とみなされます。

画線法は、分離希釈の迅速で簡単なプロセスです。この技術は、比較的高濃度の細菌を低濃度に希釈することによって行われます。細菌の減少は、コロニーが十分に広がって、異なるタイプの微生物の分離に影響を与えていることを示すはずです。画線法は、綿棒や一般的には接種ループなどの滅菌ツールを使用して行われます。無菌技術は、微生物培養を維持し、増殖培地の汚染を防ぐために使用されます。プレートの画線法にはさまざまな種類があります。技術の選択は個人の好みの問題であり、サンプルに含まれる微生物の数によっても異なります。

初心者には、T ストリークと呼ばれる 3 段階のストリーク パターンをお勧めします。ストリークは、綿棒や一般的には接種ループなどの滅菌ツールを使用して行われます。接種ループは、最初に炎に通して滅菌されます。ループが冷めたら、ブロスや多くの種類の細菌を含む患者検体などの接種物に浸します。次に、接種ループを寒天の表面上でジグザグに前後に引きずり、プレートの約 30% を覆います。次に、ループを再度滅菌し、プレートを 90 度回転させます。以前にストリークしたセクションから始めて、ループをジグザグ パターンで 2 ～ 3 回引きずります。次に、以前にストリークしたセクターに触れないように注意しながら、この手順をもう一度繰り返します。ループに集まる細菌の数は回ごとに少なくなり、最終的にはコロニーに成長できる単一の細菌細胞だけが集まります。プレートの最初のセクションでは、最も成長が顕著になります。2 番目のセクションでは成長が少なく、孤立したコロニーがいくつか見られますが、最後のセクションでは成長が最も少なく、孤立したコロニーが多数見られます。

サンプルは、増殖培地の入ったペトリ皿の 1 つの象限に広げられます。細菌が増殖するにはさまざまな栄養素が必要です。これには、水、エネルギー源、炭素源、硫黄、窒素、リン、特定のミネラル、その他のビタミンや増殖因子が含まれます。微生物学研究室でよく使用される培地は、海藻から抽出したゼラチン状の物質である寒天です。栄養寒天 には、栄養素の量が不明な多くの成分が含まれています。一方では、細菌は特殊なので、これは使用するには非常に選択的な培地になる可能性があります。培地に特定の栄養素が含まれていると、細菌は確実に増殖できず、死んでしまう可能性があります。他方では、この培地は非常に複雑です。複雑な培地は、さまざまな微生物の増殖を可能にするため重要です。この培地には栄養素が多く含まれていることもあって、細菌の増殖を大きくサポートできます。どの増殖培地を使用するかは、どの微生物を培養または選択するかによって決まります。

菌株に応じて、プレートは通常 24 ～ 36 時間培養され、細菌が繁殖できるようにします。培養の最後には、接種ループが触れた領域に目に見えるコロニーを形成するのに十分な細菌が存在するはずです。これらの混合コロニーから、形態 (サイズ、形状、色) の違いに基づいて単一の細菌または真菌種を識別し、新しい培地プレートに継代培養して、さらなる分析のための純粋培養を得ることができます。

自動化された装置は、より優れた滅菌と画線塗布の一貫性、そして確実に作業を迅速化するために、産業レベルで固形培地の画線塗布に使用されています。手動で画線塗布を行う際は、固形培地を傷つけないようにすることが重要です。そうしないと、その後の画線が損傷し、培地の損傷部位に接種物が不均一に堆積して微生物が密集して増殖し、近くの画線に広がる可能性があります。

細菌は、水、土壌、食物、皮膚、腸管の常在菌叢に存在します。環境中および人体に存在する微生物の種類は膨大です。人体には何十億もの細菌が存在し、侵入する病原体と戦う常在菌叢を形成しています。細菌は混合集団で発生することがよくあります。単一の細菌種が見つかることは非常に稀です。個々の種の文化的、形態学的、および生理学的特徴を研究するには、細菌を一般に環境中に発生する他の種から分離することが不可欠です。これは、臨床サンプル中の細菌を判定する際に重要です。細菌を画線して分離すると、細菌性疾患の原因物質を特定できます。

• 細菌の芝生

• Katz, Sue (2008)。「ストリークプレートプロトコル」。プロトコル。アメリカ微生物学会(ASM)。S2CID  133454707。

• 分離されたコロニーを得るための画線寒天プレート法 (ビデオ)。