小核試験

微小核試験は、遺伝毒性のある化合物の毒性スクリーニングに使用される試験です。この試験は現在、遺伝毒性発がん物質（遺伝子損傷を引き起こす発がん物質）の最も成功し信頼性の高い試験の1つとして認識されており、化学物質の試験に関するOECDガイドラインで推奨されています。 ^{[1]この試験には、} in vivoとin vitro の2つの主要なバージョンがあります。

生体内試験では通常、マウスの骨髄またはマウスの末梢血が使用される。骨髄赤芽球が多染性赤血球に発達すると、主核が押し出され、形成された微小核は核のない細胞質内に残る可能性がある。これらの細胞は主核がないため、微小核の可視化が容易である。治療を受けた動物における微小核多染性赤血球の頻度の増加は、誘発された染色体損傷の兆候である。^[2]

微小核は、HJ Evans らによって、ソラマメVicia fabaの根端で初めて染色体損傷の定量化に使用されました。その後、 W. Schmid および JA Heddle とその同僚によってin vivoアッセイが独立して開発されました。マウス末梢血アッセイは JT MacGregor によって開発され、現在はA. Tometsko とその同僚によってフローサイトメトリーによる測定に応用されています。培養細胞での微小核の最初の使用は、 JA Heddle とその同僚によるヒトリンパ球ででした。このアッセイは、培養細胞内のリンパ球やその他の細胞での使用のために M. Fenech とその同僚によって改良されています。

MNスコアリングには、もともと単純なギムザ染色法が使用されていました。その後、細胞質分裂阻害小核法（CBMN法）が確立され、紡錘体形成の阻害剤であるCyt-Bを使用して、核分裂後に起こる細胞質分裂を防止しました。CBMN法は、さまざまな変異原によって引き起こされる染色体の損失、破損、および関連するアポトーシスと壊死の評価に使用されます。^[3]

微小核は、有糸分裂または減数分裂の終期に形成される不規則な（第 3 の）核です。微小核（名前は「小さな核」を意味します）は、終期に反対の極に運ばれなかった無動原体染色体の一部または染色体全体を含む細胞質小体です。微小核が形成されると、娘細胞は染色体の一部または全部を欠くことになります。これらの染色体断片または染色体全体は通常、核膜を発達させ、第 3 の核として微小核を形成します。細胞質分裂後、一方の娘細胞は 1 つの核を持ち、もう一方は 1 つの大きい核と 1 つの小さい核、つまり微小核を持ちます。より多くの遺伝子損傷が発生した場合、複数の微小核が形成される可能性があります。微小核試験は、さまざまな化学物質の遺伝毒性評価のツールとして使用されます。手順と評価の点では、染色体異常検査よりも実施が簡単です。セントロメア領域をターゲットにしたプローブを使用した蛍光 in situ ハイブリダイゼーション(FISH) を使用すると、染色体全体が失われているのか、それとも断片だけが失われているのかを判定できます。

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