
アレクサンダー・ダウンス[1] [2]によって発明され、その名が付けられた ダウンスホモジナイザーまたは「ダウサー」は、一端が閉じられた円筒形のガラス管で、慎重に指定された外径の2つのガラス乳棒が付いており、真核細胞(哺乳類細胞など)を穏やかに均質化することを目的としています。ダウンスホモジナイザーは、今日でも細胞小器官を分離するために一般的に使用されています。
2 つのダウンス ホモジナイザー ペストル (「ルーズ」または「A」ペストルと「タイト」または「B」ペストルとして知られています) は、シリンダーの内径に対して慎重に指定された外径を持っています。「A」(ルーズ) ペストルはシリンダー壁から (~0.0025 - 0.0055 インチ) のクリアランスがあり、「B」(タイト) ペストルは (~0.0005 - 0.0025 インチ) のクリアランスがあります。[3]これにより、組織と細胞はせん断応力によって溶解され、加熱は最小限 (あったとしても) で済むため、抽出された細胞小器官または熱に敏感な酵素複合体はほぼそのまま残ります。

通常、軟組織(例:哺乳類の肝臓)を小さな断片に切断または粉砕し、適切な量の適切な溶解緩衝液とともにガラスシリンダーに入れます。均質化は、最初に緩い乳棒で、次にきつい乳棒でシリンダーの上下に、乳棒を規定回数「通過」させることによって行われます。[4] 5〜10回の通過が一般的です。ダウンスホモジナイザーは通常、ホウケイ酸ガラスで作られていますが、それでも壊れやすいため、注意して使用する必要があります。特に硬い組織や丈夫な組織は、ダウンスホモジナイザーで使用する前に事前に均質化する必要があります。
サッカロミセス・セレビシエなどの強固な細胞壁を持つ真核細胞は、細胞壁を最初に分解しない限り(例えば、リチカーゼ、またはS.セレビシエの場合はザイモリアーゼを使用して) 、ダウンスホモジナイザーで直接溶解することはできません。
参考文献
- ^ Dounce, AL ; Monty, KJ; Pate, S. (1954). 「改良された手順で単離した細胞核のゲル形成」FASEB J. 13 : 201. ISSN 0014-9446.
- ^ Dounce, AL (1955). 「同じホモジネートから無傷のミトコンドリアと核を分離する方法、およびミトコンドリア破壊が細胞核の特性に与える影響」。The Journal of Cell Biology。1 ( 2 ) : 139–153。doi :10.1083/jcb.1.2.139。ISSN 0021-9525。PMC 2223770。PMID 14381436。
- ^ 「アーカイブコピー」(PDF) 。 2019年1月8日時点のオリジナル(PDF)からアーカイブ。 2019年1月8日閲覧。
{{cite web}}: CS1 maint: アーカイブされたコピーをタイトルとして (リンク) - ^ Dennison, C. (2013). タンパク質単離ガイド。構造生物学に焦点を当てる。Springer Netherlands。p. 42。ISBN 978-94-017-0269-0. 2019年1月8日閲覧。
