フェノール抽出

フェノール抽出は、フェノール溶液を使用して核酸サンプルを精製する実験技術です。フェノールは、タンパク質を強力に変性させる性質、核酸の保存剤、水に混ざらない性質などにより、核酸を効果的に抽出できるため、抽出によく使用される試薬です。

コールタールなどの原料からフェノールを抽出して分離するプロセスを指すこともあります。これらの精製フェノールは、多くの工業用および医療用の化合物に使用され、いくつかの合成反応の前駆体として使用されます。

核酸のフェノール抽出

フェノール（C ₆ H _{5 OH）は、}ヒドロキシル基（-OH）に結合したフェニル基（-C ₆ H ₅ ）からなる水溶性化合物です。

フェノール抽出は、細胞溶解物から核酸サンプルを精製するために広く使用されている技術です。^[1]核酸を得るためには、細胞を溶解し、核酸を他の細胞成分から分離する必要があります。

フェノールは水よりも密度が高い極性物質です（1.07 g/cm ³^[2]、水の密度は1.00 g/cm ³）。フェノールを水-フェノール溶液に懸濁すると、変性したタンパク質や不要な細胞成分はフェノールに溶解し、極性核酸は水相に溶解します。^[3]次に溶液を遠心分離して、フェノールと水を有機相と水相に分離します。精製された核酸は溶液の水相から沈殿させることができます。

フェノールはクロロホルムと組み合わせて使用されることが多い。^[4]等量のクロロホルムとフェノールを加えると、水相と有機相が明確に分離される。クロロホルムとフェノールは混和性があり、フェノール単独よりも密度の高い溶液を作り、有機層と水層の分離を助けます。クロロホルムを加えると、水相を除去して精製された核酸サンプルを得るのに便利です。

溶液のpHは、抽出の種類ごとに調整する必要があります。DNA抽出の場合、pH は 7.0～8.0 に調整されます。RNA 固有の抽出の場合、 pH は 4.5 に調整されます。pH 4.5 では、水素イオンがリン酸基の負電荷を中和し、DNA が有機相に溶解し、RNA が水相に個別に分離されます。

参照

フェノールクロロホルム抽出

参考文献

^カービー、KS (1957 年 7 月 1 日)。「デオキシリボ核酸の新しい分離法: デオキシリボ核酸とタンパク質の結合の性質に関する証拠」。生化学ジャーナル。66 ( 3): 495–504。doi : 10.1042 /bj0660495。ISSN 0264-6021。PMC 1200047。PMID 13459887。
^ 「フェノール」。Sigma -Aldrich 。 2022年7月9日閲覧。
^ Oswald, Nick (2021年10月18日) [2008年2月12日]。「基礎：DNAのフェノール抽出の仕組み」Bite Size Bio 。 2022年7月9日閲覧。
^ Chan, P; Chan, D; To, K; Yu, M; Cheung, J; Cheng, A (2001 年 5 月)。「ヒトおよびウイルス DNA の PCR 増幅のためのパラフィンワックス包埋組織からの抽出方法の評価」。Journal of Clinical Pathology。54 ( 5 ): 401–403。doi : 10.1136 /jcp.54.5.401。ISSN 0021-9746。PMC 1731425。PMID 11328843。

外部リンク

生理学.med.cornell.edu
ワイズギーク

[1] ^カービー、KS (1957 年 7 月 1 日)。「デオキシリボ核酸の新しい分離法: デオキシリボ核酸とタンパク質の結合の性質に関する証拠」。生化学ジャーナル。66 ( 3): 495–504。doi : 10.1042 /bj0660495。ISSN 0264-6021。PMC 1200047。PMID 13459887。

[2] 「フェノール」。Sigma -Aldrich 。 2022年7月9日閲覧。

[3] Oswald, Nick (2021年10月18日) [2008年2月12日]。「基礎：DNAのフェノール抽出の仕組み」Bite Size Bio 。 2022年7月9日閲覧。

[4] Chan, P; Chan, D; To, K; Yu, M; Cheung, J; Cheng, A (2001 年 5 月)。「ヒトおよびウイルス DNA の PCR 増幅のためのパラフィンワックス包埋組織からの抽出方法の評価」。Journal of Clinical Pathology。54 ( 5 ): 401–403。doi : 10.1136 /jcp.54.5.401。ISSN 0021-9746。PMC 1731425。PMID 11328843。