オクタロニー二重免疫拡散法

オクターロニー二重免疫拡散法（受動二重免疫拡散法とも呼ばれる）は、免疫グロブリンや抽出可能な核抗原などの抗体や抗原の検出、識別、定量化に使用される免疫学的技術である。この技術は、分離された細菌からのジフテリア毒素の産生を評価するために1948年にこの検査を開発したスウェーデンの医師オルジャン・オクターロニーにちなんで名付けられた。 ^[1]

手順

ゲルプレートは、寒天またはアガロースゲルに一連の穴（「ウェル」）を形成するようにカットされます。関心のあるサンプル抽出物（たとえば、扁桃腺組織から採取したヒト細胞）を 1 つのウェルに入れ、血清または精製抗体を別のウェルに入れ、プレートを 48 時間放置して発色させます。この間に、サンプル抽出物内の抗原と抗体はそれぞれ、それぞれのウェルから拡散します。2 つの拡散前線が出会う場所で、いずれかの抗体がいずれかの抗原を認識すると、抗体は抗原に結合して免疫複合体を形成します。免疫複合体はゲル内で沈殿して細い白い線（沈降線）を形成します。これは、抗原認識の視覚的な特徴です。^[要出典]^[2]^[3]

この方法は、異なる抗原混合物が入った複数のウェルと、異なる抗体または抗体混合物が入った複数のウェルで並行して実施することができ、抗原抗体反応性は、沈殿物がどのウェル間で観察されるかを観察することによって確認することができる。複数のウェルを使用する場合、選択された抗原と抗体の反応性に基づいて、多くの結果が考えられる。等価ラインのゾーンは、完全な同一性（つまり、連続したライン）、部分的な同一性（つまり、片方の端に突起がある連続したライン）、または非同一性（つまり、2 つのラインが完全に交差する）を示す可能性がある。^{[引用が必要]}

クマシーブリリアントブルーなどの染色剤を使用することでアッセイの感度を高めることができ、これは沈降線が最大限に見えるまでアッセイの染色と脱色を繰り返すことによって行われます。 ^[1]

理論

ほとんどの抗原で沈殿が起こるのは、抗原が多価である（つまり、抗体が結合できる分子ごとにいくつかの抗原決定基がある）ためです。抗体には少なくとも 2 つの抗原結合部位があり（免疫グロブリン Mの場合は、最大 10 個の抗原結合部位を持つ多量体複合体があります）、そのため抗原と抗体の大きな凝集体またはゲル状の格子が形成されます。実験的には、溶液中の一定量の抗体に、増加する量の抗原を追加します。最初は抗原濃度が低いため、すべての抗体が沈殿物に含まれています。これは、抗体過剰ゾーン（つまり、プロゾーン現象）と呼ばれます。抗原をさらに追加すると、抗原/抗体分子が最適な比率になるまで、沈殿するタンパク質の量が増加します。これは、当量ゾーンまたは当量点として知られています。溶液中の抗原の量が抗体の量を超えると、沈殿量は減少します。これは、抗原過剰ゾーンとして知られています。

参考文献

^ ab Hornbeck, Peter (2017年2月). 「特異的抗体検出のための二重免疫拡散アッセイ（オクターロニー法）」. Current Protocols in Immunology . 116 (1): 2.3.1–2.3.4. doi :10.1002/cpim.18. PMID 28150863. S2CID 35908711.
^ モティカ、エドワード J. (2015)。エビデンスに基づく免疫学の歴史的視点。エルゼビア。p. 360。ISBN 978-0-12-398381-7。
^ ポール・ウィリアム・E.編（2008年）。「免疫拡散法とオクターロニー法」。基礎免疫学（第6版）。リッピンコット・ウィリアムズ＆ウィルキンス。pp. 176-177。ISBN 9780781765190。176ページ 177ページ

Bailey, Graham S. (1996)。「135: Ouchterlony 二重免疫拡散法」。Walker, John M. (編) 著。タンパク質プロトコルハンドブック。Springerプロトコルハンドブック。第 VII 巻: 免疫化学技術。ニュージャージー州トトワ: Humana Press。pp . 749–752。doi :10.1007/978-1-60327-259-9_135。ISBN 978-0-89603-338-2。
Ouchterlony, Örjan (1948). 「ジフテリア菌の毒素産生能を試験するためのin vitro法」APMIS . 25 (1–2): 186–191. doi :10.1111/j.1699-0463.1948.tb00655.x. PMID 18887479.
Ouchterlony, Örjan (1949). 「ゲル中の抗原抗体反応」APMIS . 26 (4): 507–515. doi :10.1111/j.1699-0463.1949.tb00751.x. PMID 18143039.
Ouchterlony, O. ( 1958). 「免疫学的分析のためのゲル内拡散法」。アレルギーの進歩。5 : 1–78。PMID 13578996 。
Ouchterlony, O. (1962). 「免疫学的分析のためのゲル内拡散法 II」。アレルギーの進歩。6 :30–154。doi : 10.1159 /000313795。PMID 14482809 。
Ouchterlony, O.; Nilsson, LA (1986). Weir, Daniel Mackay (編). 実験免疫学ハンドブック. 第1巻. 免疫化学 (第4版).オックスフォード、イギリス: Blackwell Scientific . pp. 32.1–32.50. ISBN 9780632014996. 2012年11月23日閲覧。 Googleブックス
「オクターロニー分析」（PDF）。医療免疫学544。カリフォルニア大学アーバイン校医学部。 2011年秋。 2012年2月7日時点のオリジナル（PDF）からアーカイブ。 2012年11月23日閲覧。
「Ouchterlony 二重拡散 - パターン: 理論」。Value @ Amrita。インド: Amrita Vishwa Vidyapeetham University。2012年。2012 年 11 月 13 日にオリジナルからアーカイブ。2012年 12 月 24 日に取得。
「Ouchterlony 二重拡散 - パターン: 手順」。Value @ Amrita]。インド: Amrita Vishwa Vidyapeetham University。2012 年。2017 年 1 月 14 日にオリジナルからアーカイブ。2012年 12 月 24 日に取得。
「Ouchterlony 二重拡散 - 滴定法: 理論」。Value @ Amrita。インド: Amrita Vishwa Vidyapeetham University。2012年。2012 年 11 月 13 日にオリジナルからアーカイブ。2012年 11 月 23 日に取得。
「Ouchterlony二重拡散-滴定法：手順」。Value @ Amrita。インド：Amrita Vishwa Vidyapeetham University。2012年。2017年3月16日にオリジナルからアーカイブ。2012年12月24日閲覧。
「BSCI423: 実験 5. 降水量」。メリーランド大学カレッジパーク校、コンピューター・数学・自然科学学部。2012 年 2 月 5 日にオリジナルからアーカイブ。2012年 11 月 23 日に閲覧。

外部リンク

シミュレーター 2007-05-22カリフォルニア大学アーバイン校のWayback Machineにアーカイブされました
「オクタロニー二重免疫拡散法」（写真）。2017年5月15日閲覧。^{[永久リンク切れ‍ ]}完全な同一性と非同一性の未染色沈降線を示す Ouchterlony 二重免疫拡散プレートの写真。
「拡散パターン」。免疫拡散の原理と応用。2019年12月11日にオリジナルからアーカイブ。2017年5月19日に取得。完全に同一、部分的に同一、非同一の染色沈降線を示す Ouchterlony 免疫拡散パターンの写真。
「オクタロニーアッセイ」。YouTube。バイオ・ラッド・ラボラトリーズ。2012 年 10 月 16 日。

[:0-1] Hornbeck, Peter (2017年2月). 「特異的抗体検出のための二重免疫拡散アッセイ（オクターロニー法）」. Current Protocols in Immunology . 116 (1): 2.3.1–2.3.4. doi :10.1002/cpim.18. PMID 28150863. S2CID 35908711.

[2] モティカ、エドワード J. (2015)。エビデンスに基づく免疫学の歴史的視点。エルゼビア。p. 360。ISBN 978-0-12-398381-7。

[3] ポール・ウィリアム・E.編（2008年）。「免疫拡散法とオクターロニー法」。基礎免疫学（第6版）。リッピンコット・ウィリアムズ＆ウィルキンス。pp. 176-177。ISBN 9780781765190。176ページ 177ページ