マイクロ流体 とは、少なくとも1つの次元がミクロン スケールであるチャネルまたはネットワーク内の流体の流れを指します。[ 1 ] [ 2 ] オープン マイクロ流体 (オープン サーフェス マイクロ流体またはオープン スペース マイクロ流体とも呼ばれる)では、システムの流体の流れを制限する境界の少なくとも1つが取り除かれ、流体が空気または別の流体などの別の界面に露出されます。[ 1 ] [ 3 ] [ 4 ]
オープンマイクロ流体デバイスの種類 オープンマイクロ流体は、さまざまなサブセットに分類できます。これらのサブセットの例としては、オープンチャネルマイクロ流体、紙ベース 、および糸ベースのマイクロ流体などがあります。[ 1 ] [ 5 ] [ 6 ]
オープンチャネルマイクロ流体 オープンチャネルマイクロ流体では、表面張力によって駆動される毛細管流が発生し、自発的毛細管流 (SCF)と呼ばれます。[ 1 ] [ 7 ] SCFは、前進するメニスカスの圧力が負の場合に発生します。[ 1 ] チャネルの形状と流体の接触角は、 次の式が成り立つ場合にSCFを生成することが示されています。
p f p w < c o s ( θ ) {\displaystyle {pf \over pw}<cos(\theta )} ここで、pf はチャネルの自由周長(すなわち、チャネル壁と接触していない界面)、pw は濡れ周長(すなわち、流体と接触している壁)、θ はデバイスの材料上の流体の接触角である。[ 1 ] [ 5 ]
紙ベースのマイクロ流体 紙ベースのマイクロ流体は、 紙の吸水能力を利用して機能的な読み取りを行います。[ 8 ] [ 9 ] 紙ベースのマイクロ流体は、紙が安価で入手しやすく、環境への影響が少ないため、魅力的な方法です。紙はさまざまな厚さや孔のサイズで入手できるため、汎用性も高いです。[ 8 ] ワックスなどのコーティングは、紙マイクロ流体の流れを誘導するために使用されてきました。[ 10 ] 場合によっては、溶解性バリアを使用して紙に境界を作り、流体の流れを制御しています。[ 11 ] 診断ツールとしての紙の応用は強力であることが示されており、全血中のグルコースレベル[ 12 ] 、細菌[ 13 ] 、ウイルス[ 14 ] 、およびその他の成分を検出するために成功裏に使用されています。[ 15 ] 紙内での細胞培養方法も開発されています。[ 16 ] [ 17 ] 妊娠検査で使用されるようなラテラルフロー免疫測定法は、ポイントオブケアまたは家庭ベースの診断に紙を応用した例の1つです。[ 18 ] 欠点としては、体液保持の難しさや検出限界の高さが挙げられます。
開放型マイクロ流体における毛細管フィラメント 開放型毛細管マイクロ流体は、チャネルの天井や床をなくすことで流体を外気に触れさせるチャネルです。[ 5 ] 開放型毛細管マイクロ流体は、ポンプやシリンジを使って流れを維持するのではなく、表面張力を使って流れを促進します。[ 24 ] 注入源をなくすことで、デバイスや関連機器のサイズが小さくなり、使用を妨げる可能性のある他の側面も軽減されます。開放型マイクロ流体における毛細管駆動流のダイナミクスは、長方形のU溝または三角形のV溝として一般的に知られている2種類の幾何学的チャネルに大きく依存しています。[ 25 ] [ 24 ] チャネルの形状は、さまざまな進化するプロセスで製造された内壁に沿った流れを決定します。[ 7 ]
U溝内の毛細管フィラメント V溝内のSCF(左) V溝開口型マイクロ流体チャネル(右) 長方形の開口部を持つ U 溝は、最も簡単に作製できるタイプの開口部を持つマイクロ流体チャネルです。この設計では、V 溝と比較して同じ桁の速度を維持できます。[ 26 ] [ 25 ] [ 27 ] チャネルは、ガラスまたはポリメチルメタクリレート (PMMA) [ 24 ] 、ポリカーボネート (PC)、環状オレフィンコポリマー (COC) [ 24 ] などの高透明ガラス代替物で作られています。エッチング後に残った抵抗を除去するために、チャネルには酸素プラズマまたは深反応性イオンエッチング (DRIE) を使用して親水性処理が施されます。[ 28 ] [ 29 ] [ 30 ]
V溝内の毛細管フィラメント U溝内のSCF(左) U溝開口型マイクロ流体チャネル内のSCF(右) V溝はU溝とは異なり、溝の角度に応じてさまざまな速度を可能にします。[ 27 ] 溝の角度が鋭いV溝では、Concus-Finn条件の減少によって説明されるコーナーでの界面曲率が生じます。[ 31 ] V溝の完全な内角では、フィラメントは溝内で無限に前進し、濡れ条件に応じて毛細管フィラメントの形成が可能になります。[ 32 ] 溝の幅は流体の流れを制御する上で重要な役割を果たします。V溝が狭いほど、血液のような高粘度液体でも液体の毛細管流が良くなります。この効果は自律型アッセイの製造に使用されています。[ 5 ] [ 33 ] V溝の製造は、コーナーをしっかりと密閉する必要があるため、欠陥のある構造のリスクが高くなるため、U溝よりも困難です。[ 28 ]
利点 オープンマイクロ流体の主な利点の 1 つは、システム内の流れる液体への介入 (試薬の追加または除去など) を容易に行えるアクセスの容易さです。[ 34 ] オープンマイクロ流体は製造の簡便性も実現し、表面を接合する必要がなくなります。システムの境界の 1 つが除去されると、より大きな液気界面が生じ、液気反応が可能になります。[ 1 ] [ 35 ] オープンマイクロ流体デバイスは、システムの少なくとも 1 つの面が材料で覆われていないため、イメージング中の自家蛍光を 低減できるため、光学的透明性が向上します。[ 36 ] さらに、オープンシステムは、閉鎖システムでよく見られる問題である気泡の形成を最小限に抑え、場合によっては完全に排除します。[ 1 ]
閉鎖系マイクロ流体では、チャネル内の流れはポンプ(シリンジポンプ )、バルブ(トリガーバルブ)、または電場による圧力によって駆動されます。[ 37 ] 温度制御蒸発を使用して低流量を実現するこれらの方法の1つが開放型マイクロ流体システムについて説明されており、生物学的アプリケーションで長時間のインキュベーションが可能になり、少量のサンプル量で済みます。[ 38 ] 開放系マイクロ流体では、チャネル内で表面張力駆動の流れが可能になり、外部ポンプ方式が不要になります。[ 34 ] [ 39 ] 例えば、一部の開放型マイクロ流体デバイスは、ピペットを使用して流体を充填できるリザーバーポートとポンプポートで構成されています。[ 1 ] [ 5 ] [ 34 ] 外部ポンプの必要性を排除することでコストが削減され、ピペットを備えたすべてのラボでデバイスを使用できるようになります。[ 35 ]
材料ソリューション 幸いなことに、PDMSには多くの問題がある一方で、多くの解決策も開発されています。PDMSが示す負の疎水性と多孔性に対処するため、研究者たちは、BSA [ 40 ] (ウシ血清アルブミン)や荷電分子などのコーティングを使用して、PDMSと細胞の間に層を作るようになりました。他の研究者たちは、疎水性コアを2つの親水性ブロックが囲むトリブロックコポリマーであるプルロニック界面活性剤[ 42 ] 、さらにはホウケイ酸ガラスコーティング[ 43 ] を疎水性の問題に対処するためにうまく利用しています。興味深いことに、前述の2つの化合物のいずれかで処理すると、非特異的なタンパク質吸着を防ぐことができます。これは、これらの化合物(および他のコーティング)がPDMSと安定した吸着相互作用を形成し、PDMSが細胞培養培地に干渉するのを減らすのに役立つためです。これらの化合物や材料は表面特性に影響を与える可能性があり、培養細胞への影響を注意深くテストする必要があります。研究者らは、PDMS 上で全ての細胞タイプが増殖できるわけではないという問題に対処するため、生体内 環境を模倣してより多くの細胞や細胞タイプが増殖できる3D 足場システムを開発しました[ 44 ] 。PDMS をコーティングするのと同様に、3D 足場システムでは、ECM (細胞外マトリックス) タンパク質 [ 45 ] などの代替材料を使用しているため、細胞は天然の PDMS に結合しないのではなく、タンパク質に結合する可能性が高くなります。最後に、研究者らはいくつかの巧妙な解決策を使用して、PDMS の水蒸気透過性に対処しました。たとえば、マイクロ流体システムの一部を加湿用に指定し、PDMS またはガラスなどの他の材料で鋳造することができます。
デメリット 開放型マイクロ流体システムの欠点としては、蒸発[ 46 ] 、汚染[ 47 ] 、流量制限[4]などが挙げられる。開放 型システム は蒸発の影響を受けやすく、流体量がマイクロスケールの場合、測定値に大きな影響を与える可能性がある[ 46 ]。 さらに、開放型システムはその性質上、閉鎖型システムよりも汚染を受けやすい[ 47 ] 。細胞培養 や、汚染や微粒子が懸念されるその他の方法では、汚染を防ぐために慎重に実施する必要がある。最後に、開放型システムでは、誘導圧力を流速制御に利用できないため、流量が制限される[ 4 ] 。
材料 ポリジメチルシロキサン(PDMS)は、処理コストが低い、製造が容易、プロトタイピングが迅速、表面修飾が容易、細胞毒性がないなど、いくつかの有利な特性があるため、細胞培養用途のマイクロ流体デバイスを製造するのに理想的な材料です。[ 48 ] 天然のポリジメチルシロキサン(PDMS)を使用することで得られる利点はいくつかありますが、研究者が実験で考慮しなければならない欠点もあります。まず、PDMSは疎水性で多孔質であるため、小さな分子や他の疎水性分子が吸着する可能性があります。[ 49 ] このような分子には、メチル基やアルキル基を含む分子[ 50 ] 、さらにはナイルレッドなどの特定の染料[ 51 ] などが含まれます。研究者は2008年に、プラズマを使用してPDMSの疎水性を低下させることができることを発見しましたが、処理後約2週間で疎水性が回復しました。[ 52 ] 一部の研究者は、NaOH処理下で取り外し可能なポリカプロラクトン(PCL)繊維ベースの電界紡糸足場を組み込むことで、疎水性を軽減するとともに親水性を高め、より効率的な細胞間コミュニケーションを促進すると仮定しています。[ 53 ] PDMSで発生するもう1つの問題は、チャネル内を循環する培地に干渉する可能性があることです。PDMSチャネルの硬化が不完全な場合、PDMSが培地に溶出する可能性があります[ 54 ] 。また、完全に硬化した場合でも、培地の成分がPDMS壁の遊離疎水性部位に意図せず付着する可能性があります。[ 55 ] さらに、PDMSのガス透過性にも問題があります。ほとんどの研究者は、PDMSと循環培地の両方に酸素を供給するためにこれを利用しますが、この特性により、マイクロ流体システムは水蒸気損失に対して特に脆弱になります。最後に、すべての細胞タイプが天然PDMS上で増殖できるわけではなく、同じレベルで増殖するわけでもありません。[ 56 ] 例えば、1994年にはすでに、天然PDMS上で培養された2種類の線維芽細胞において急速な細胞死が高レベルで観察されており、これはマイクロ流体細胞培養におけるPDMSの広範な使用に問題を引き起こしていた。
アプリケーション 多くのマイクロ流体技術と同様に、オープンシステムマイクロ流体は、ナノテクノロジー 、バイオテクノロジー 、燃料電池 、ポイントオブケア (POC)検査に応用されています。[ 1 ] [ 4 ] [ 57 ] 細胞ベースの研究では、オープンチャネルマイクロ流体デバイスにより、チャネル内の単一細胞プローブのために細胞にアクセスできるようになります。[ 58 ] その他のアプリケーションには、キャピラリーゲル電気泳動 、水中油型エマルジョン、POCシステム用バイオセンサーなどがあります。[ 3 ] [ 59 ] [ 60 ] デバイスの底面が除去されたオープンマイクロ流体デバイスである懸垂型マイクロ流体デバイスは、細胞拡散と癌細胞の移動の研究に使用されています。[ 5 ] 懸垂型およびレールベースのマイクロ流体は、マイクロパターニングと細胞間コミュニケーションの研究に使用されています。[ 1 ]
材料ソリューションアプリケーション これらのソリューションの応用は、以下の例からもわかるように、今日でも使用されています。2014年、Leiらは、細胞を3D足場に成形することで、既知の抗がん剤であるシスプラチン存在下でのヒト口腔がん細胞のインピーダンスをテストしていました。[ 61 ] 著者らは、以前の研究から、細胞インピーダンスが2D細胞培養における細胞の生存率と増殖と相関する可能性があることに気付き、その相関を3D細胞培養に適用したいと考えていました。研究者らは、アガロースを使用して3D足場を作成し、蛍光DNAアッセイを使用してシスプラチンの存在下および非存在下でのヒト口腔がん細胞の増殖と増殖を測定し、2Dモデルで観察されたものと同様の相関があることを実際に観察しました。これは、2D細胞培養の原理が3Dオープンマイクロ流体細胞培養に適用できることを証明するだけでなく、がん患者に対するより個別化された治療計画の基礎を築く可能性も秘めています。彼らは、将来の技術開発によって、この方法が既知の抗がん剤に対する患者のがん細胞の反応を検査できるアッセイへと発展する可能性があると提唱した。
別のグループも同様の方法を用いましたが、3D 足場を作成する代わりに、がん幹細胞の研究に最適なオプションを決定するために、いくつかの異なる PDMS コーティングを使用しました。[ 62 ] このグループは BSA と ECM タンパク質を調べ、実験的証拠は循環がん細胞 (CSC) に最適なコーティングとして BSA を支持しているものの、細胞に表現型の変化 (つまり、伸長) は発生したが、細胞の正常な細胞機能を実行する能力には影響しなかったことを発見しました。ここで注意すべき重要な注意点は、BSA はすべての細胞タイプに有効な万能ソリューションではないということです。異なるコーティングは特定の細胞タイプに対してより効果的であったり、より効果的でなかったりします[ 45 ] ので、実験を開発する際にはこれらの違いを考慮する必要があります。
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