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非対称PCRは、元のDNAの一方の鎖をもう一方の鎖よりも優先的に増幅するために使用されるPCRのバリエーションです。 [1]この技術は、2つの相補鎖のうちの1つだけが必要であるいくつかのタイプのシーケンシングおよびハイブリダイゼーションプローブに応用されています。[2]
方法論
非対称PCRは、選択された鎖に対するプライマーの量が過剰であるという点で通常のPCRとは異なります。反応の後半（制限プライマーが使い果たされた後）での遅い（算術的）増幅のため、PCRの追加サイクルが必要になります。[3]
このプロセスの改良法であるLinear-After-The-Exponential-PCR（LATE-PCR）では、反応途中で制限プライマー濃度が低下しても反応効率を維持するために、過剰プライマーよりも融点の高い制限プライマーを使用します。[4]
アプリケーション
非対称PCRは二本鎖DNAから一本鎖DNAを形成するために使用することができ、これは突然変異誘発法におけるDNA配列決定に使用されます。[要出典]一本鎖DNAはアプタマー生成にも重要です。[1]
参考文献
- ^ ab Citartan, Marimuthu; et al. (2011年12月). 「DNAアプタマー生産に向けた良質なssDNA生成のための非対称PCR」(PDF) . Songklanakarin J. Sci. Technol . 34 (2): 125– 131. 2020年1月11日時点のオリジナル(PDF)からアーカイブ。 2017年11月18日閲覧。
- ^ Wooddell, CI; Burgess, RR (1996). 「DNAプローブの特定部位に架橋類似体を組み込むための長いプライマーと一本鎖DNAを生成するための非対称PCRの使用」Genome Res . 6 (9): 886– 892. doi : 10.1101/gr.6.9.886 . PMID 8889557.
- ^ Heiat, Mohammad; et al. (2017年1月14日). 「大量のssDNAアプタマーを生成するための信頼性の高い方法として非対称PCR条件を最適化するための必須戦略」.バイオテクノロジーおよび応用生化学. 64 (4): 541– 548. doi :10.1002/bab.1507. PMID 27222205. S2CID 21792777.
- ^ Sanchez, J. Aquiles; et al. (2003 年 12 月 4 日). 「Linear-After-The-Exponential (LATE)–PCR: 非対称 PCR の高度な方法と定量的リアルタイム分析におけるその使用」。 米国科学アカデミー紀要。101 (7): 1933– 1938。doi : 10.1073 / pnas.0305476101。PMC 357030。PMID 14769930。