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ユビキチン-AMCは、ユビキチンC末端加水分解酵素（UCH）やユビキチン特異的プロテアーゼ（USP）を含む、幅広い脱ユビキチン化酵素（DUB）の蛍光 基質です。検出感度や活性の連続モニタリングが不可欠な脱ユビキチン化活性の研究に特に有用な試薬です。 [1]
背景
ユビキチン-AMC は、7-アミノ-4-メチルクマリンによるユビキチンのC 末端誘導体化によって調製され、ユビキチン C 末端加水分解酵素 (UCH) やユビキチン特異的プロテアーゼ (USP) を含む広範囲の脱ユビキチン化酵素 (DUB) に対する有用かつ感度の高い蛍光基質であることが示されています。
ユビキチン-AMCは、UCH-L3（Km = 0.039 μM）およびイソペプチダーゼ-T（Km = 0.17-1.4 μM）の敏感な基質であることが示されており、[2]検出感度または活性の連続モニタリングが不可欠な脱ユビキチン化活性の研究に特に有用である。[3]
一般的なアッセイ設定: アッセイ基質濃度: 0.01-1.0 μM。酵素濃度、UCH-L3: 10-100pM、イソペプチダーゼ-T: 10-100nM。DUB 酵素による AMC 蛍光の放出は、380 nm 励起および 460 nm 発光波長を使用して監視できます。
用途
- 脱ユビキチン化酵素活性アッセイのための基質。
- 酵素脱ユビキチン化活性の同定/確認。
- 代替UBL-AMC基質（例：NEDD8-AMC）と比較した脱結合酵素基質特異性の調査
参考文献
- ^ BioMol オンラインカタログ
- ^ Dang, LC, Melandri, FD および Stein, RL 脱ユビキチン化酵素によるユビキチン C 末端 7-アミド-4-メチルクマリンの加水分解に関する速度論的および機構的研究。生化学、37、1868-1879 (1998)
- ^ Mason, DE, Ek, J., Peters, EC および Harris JL 位置スキャンライブラリと質量分析による脱ユビキチン加水分解酵素の基質プロファイリング。生化学、43、6535-44 (2004)