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両泉寺は、1635年に日朝住職によって創建され、下田奉行2代目今村正長の支援と後援を受け、1826年に再建されました。本堂は1945年に再び再建されました。境内には3基の大きな五輪塔（下田奉行の墓）があり、下田市の史跡に指定されています。
1854年、アメリカ合衆国が日本の鎖国政策を終わらせようと試みた初期の試みの一つとして、マシュー・カルブレイス・ペリー提督 が下田を訪れた際、この寺は彼の上陸用宿舎として指定されました。現在、ペリー提督とその一行が滞在中に利用したであろう、両泉寺から港へと続く道は「ペリー通り」と呼ばれており、ペリー提督が寺の境内で部下たちのために軍事パレード形式の閲兵式を行ったという記録が残っています。ペリー提督の艦隊に同行した軍楽隊もこの境内で時折演奏を行い、ここは日本初の西洋音楽コンサートの開催地となりました。ペリー遠征に同行したドイツ人画家、ウィリアム・ハイネは、これらの出来事の一つを石版画に描き、その複製が両泉寺に展示されています。
寺院に隣接する黒船ミュージアム（MoBS黒船ミュージアム）には、ペリー提督や黒船、そして日本と西洋の交流に関する数々の遺物が展示されている。近年、寺院の庭園にはジャスミンの花が咲き乱れていることでも知られている。寺院は下田駅から徒歩10分の距離にある。