ファーウェスタンブロット

ファーウェスタンブロット、またはファーウェスタンブロッティングは、ウェスタンブロットの技術に基づいて、 in vitroでタンパク質間相互作用を検出する分子生物学的手法です。^[1]^[2]ウェスタンブロットでは抗体プローブを使用して目的のタンパク質を検出しますが、ファーウェスタンブロットでは目的のタンパク質に結合できる非抗体プローブを使用します。したがって、ウェスタンブロットは特定のタンパク質の検出に使用されますが、ファーウェスタンブロットはタンパク質/タンパク質相互作用の検出に使用されます。

方法

従来のウェスタンブロットでは、ゲル電気泳動を使用してサンプルからタンパク質を分離し、その後、これらのタンパク質を「ブロッティング」ステップで膜に転写します。ウェスタンブロットでは、抗体プローブを使用して特定のタンパク質を識別します。

ファーウェスタンブロットでは、非抗体タンパク質を使用してブロット上の目的のタンパク質をプローブします。この方法で、プローブ (またはブロットされた) タンパク質の結合パートナーを特定できます。プローブタンパク質は、多くの場合、発現クローニングベクターを使用してE. coliで生成されます。

その後、プローブタンパク質は通常の方法で視覚化できます。つまり、放射性標識を付けたり、抗体が存在するHisやFLAGなどの特定の親和性タグを付けたり、(プローブタンパク質に対する) タンパク質特異的抗体を使用したりすることができます。

細胞抽出物は通常、ゲル電気泳動の前に洗剤で煮沸して完全に変性されるため、このアプローチは、対象となるタンパク質の本来の折り畳まれた構造を必要としない相互作用を検出するのに最も役立ちます。

参考文献

^ Hall, Randy A. (2004). 「ブロットオーバーレイまたはファーウェスタンブロットによるタンパク質間相互作用の研究」タンパク質間相互作用。分子生物学の方法。第261巻。pp. 167– 174。CiteSeerX 10.1.1.380.553。doi : 10.1385 / 1-59259-762-9: 167。ISBN 978-1-59259-762-8. PMID 15064457。
^ 町田和也; マイヤーブルース J. (2009). 「ファーウェスタンブロッティングによるタンパク質間相互作用の検出」.タンパク質ブロッティングと検出. 分子生物学の方法. 第 536 巻. pp. 313– 329. doi :10.1007/978-1-59745-542-8_34. ISBN 978-1-934115-73-2. ISSN 1064-3745. PMID 19378071.

外部リンク

米国国立医学図書館の医学件名標目(MeSH)におけるファーウェスタン+ブロッティング
piercenet.com の概要
utoronto.ca の概要

[Hall2004-1] Hall, Randy A. (2004). 「ブロットオーバーレイまたはファーウェスタンブロットによるタンパク質間相互作用の研究」タンパク質間相互作用。分子生物学の方法。第261巻。pp. 167– 174。CiteSeerX 10.1.1.380.553。doi : 10.1385 / 1-59259-762-9: 167。ISBN 978-1-59259-762-8. PMID 15064457。

[MachidaMayer2009-2] 町田和也; マイヤーブルース J. (2009). 「ファーウェスタンブロッティングによるタンパク質間相互作用の検出」.タンパク質ブロッティングと検出. 分子生物学の方法. 第 536 巻. pp. 313– 329. doi :10.1007/978-1-59745-542-8_34. ISBN 978-1-934115-73-2. ISSN 1064-3745. PMID 19378071.