エレクトロブロッティング

エレクトロブロッティングは分子生物学/生化学/免疫遺伝学において、ゲル電気泳動後にPVDFまたはニトロセルロースを使用してタンパク質または核酸を膜に転写する方法です。^[2]^{[3]その後、タンパク質または核酸は、特定の}抗体、レクチンなどのリガンド、または染色剤などのプローブを使用してさらに分析できます。この方法は、すべてのポリアクリルアミドゲルとアガロースゲルで使用できます。ゲルからタンパク質を転写する別の技術は、キャピラリーブロッティングです。

発達

この技術は、1989年にウィリアム・J・リトルヘイルズによって「ポリアクリルアミド電気泳動ゲルまたは同様のゲルから膜に標本を転写するエレクトロブロッティング技術」というタイトルで特許を取得しました。^[1]^[4]

エレクトロブロッティング手順

この技術は、タンパク質または核酸を膜上に移動させるために、電流と転写緩衝液に依存します。電気泳動に続いて、標準タンクまたはセミドライブロッティング転写システムをセットアップします。スタックは、陰極から陽極に向かって、スポンジ | 転写緩衝液に浸した 3 枚のろ紙 | ゲル | PVDF またはニトロセルロース膜 | 転写緩衝液に浸した 3 枚のろ紙 | スポンジの順に組み立てられます。電流とサンプルはその方向に移動するため、膜はゲルと正に帯電した陽極の間に配置する必要があります。スタックが準備できたら、転写システムに配置し、使用する材料に応じて適切な大きさの電流を適切な時間適用します。

通常、電気泳動ゲルは転写後にクマシーブリリアントブルーで染色され、十分な量の物質が転写されたことを確認します。ブロッティング中にタンパク質が構造の一部を保持または回復することがあるため、特定の抗体と反応することがあり、免疫ブロッティングという用語が生まれます。または、タンパク質がレクチンなどのリガンドと反応することがあり、アフィニティーブロッティングという用語が生まれます。

参照

参考文献

^ ab RC Dubey (2014). アドバンストバイオテクノロジー. S. Chand Publishing. pp. 199–. ISBN 978-81-219-4290-4。
^ David Sheehan (2013年4月30日). 物理生化学：原理と応用. John Wiley & Sons. pp. 206–. ISBN 978-1-118-68748-2。
^ MP Bansal (2013年1月1日). 分子生物学とバイオテクノロジー: 基本的な実験プロトコル. エネルギー資源研究所 (TERI). pp. 141–. ISBN 978-81-7993-379-4。
^ 「米国特許4840714」。2007年9月29日時点のオリジナルよりアーカイブ。 2007年5月24日閲覧。

外部リンク

タンパク質（ウエスタン）ブロッティング - 抗体膜転写の紹介
PVDF の詳細な電気ブロッティング手順 - タンパク質化学研究室

[Dubey2014-1] RC Dubey (2014). アドバンストバイオテクノロジー. S. Chand Publishing. pp. 199–. ISBN 978-81-219-4290-4。

[Sheehan2013-2] David Sheehan (2013年4月30日). 物理生化学：原理と応用. John Wiley & Sons. pp. 206–. ISBN 978-1-118-68748-2。

[Bansal2013-3] MP Bansal (2013年1月1日). 分子生物学とバイオテクノロジー: 基本的な実験プロトコル. エネルギー資源研究所 (TERI). pp. 141–. ISBN 978-81-7993-379-4。

[4] 「米国特許4840714」。2007年9月29日時点のオリジナルよりアーカイブ。 2007年5月24日閲覧。