DH5-アルファ細胞

DH5-アルファ細胞は、アメリカの生物学者ダグラス・ハナハンが形質転換効率を最大化するために開発した大腸菌細胞です。これらは3つの変異^[1]によって定義されます。recA1、endA1はプラスミド挿入を助け、lacZΔM15は青白スクリーニングを可能にします。この細胞はコンピテントであり、目的のプラスミドを挿入するために塩化カルシウム形質転換で使用されることがよくあります。4つの形質転換方法と6つの細菌株の研究では、最も効率的なのはハナハン法によるDH5株であることが示されました。^[2]

突然変異

recA1変異は、recAポリペプチドのグリシン160をアスパラギン酸残基に置き換える単一の点変異であり^[3]、これによりリコンビナーゼの活性が無効になり、相同組換えが不活性化されます。
endA1変異は細胞内エンドヌクレアーゼを不活性化し、挿入されたプラスミドの分解を防ぎます。^[4]

^ Wertz J. 「Strain - DH5α」。大腸菌遺伝子ストックセンター (CGSC)。イェール大学。 2017年5月23日閲覧。
^ Chan WT、Verma CS、Lane DP、Gan SK（2013年12月）。「大腸菌の形質転換に影響を与える方法と要因の比較と最適化」。バイオサイエンスレポート。33 （ 6 ）。doi：10.1042/BSR20130098。PMC 3860579。PMID 24229075。
^ Bryant FR (1988年6月). 「一本鎖DNA依存性ATPase活性を保持するリコンビナーゼ欠損変異体recAタンパク質の構築」(PDF) . The Journal of Biological Chemistry . 263 (18): 8716–8723. doi : 10.1016/S0021-9258(18)68364-4 . PMID 2967815.
^ Taylor RG、Walker DC、 McInnes RR (1993 年 4 月)。「E. coli 宿主株は、シーケンシングに使用される小規模プラスミド DNA 調製物の品質に大きく影響します」。Nucleic Acids Research。21 ( 7 ) : 1677–1678。doi :10.1093/nar/21.7.1677。PMC 309390。PMID 8479929 。