放射線低減ハイブリッド

放射線低減ハイブリッド法は、遺伝子マーカーの互いの相対的な位置を発見する手順です。これらのマーカーの相対的な位置は、物理マップまたは遺伝子マップに組み合わせることができます。放射線ハイブリッド法は、DNAを増幅および精製する別の方法として始まり、これはあらゆる配列決定プロジェクトの最初のステップです。放射線を使用してDNAを断片に分解し、これらの断片をハイブリッド細胞に組み込みます。ハイブリッドは大量に増殖させることができます。次に、PCRと連鎖解析を使用してマーカー間の距離を解決することにより、さまざまな遺伝子マーカーの存在を確認できます。つまり、2つの遺伝子マーカーが互いに近い場合、DNAを破壊する放射線によって分離される可能性は低くなります。この手法は、 2つの遺伝子マーカー間の距離を計算するために 遺伝子組み換えに依存する従来の連鎖解析に似ています。

この手順では、毒性のある培地では生存できないが、同じ細胞に含まれると毒素に抵抗できる遺伝子を含む 2 つの細胞株を使用します。研究対象の細胞株に放射線を照射すると、DNA が切断されます。これらの細胞は他の細胞株と融合され、ハイブリッド細胞が生成されます。ハイブリッド細胞に両方の細胞の遺伝子が組み込まれていれば、毒性のある培地でも生存できます。

生き残った細胞は大量に増殖させることができ、照射された細胞株から取り込まれた DNA を増幅することができます。ハイブリッド細胞株から DNA サンプルを準備し、PCR を使用して 2 つの特定の遺伝子マーカーを増幅することができます。PCR 産物をゲルで流すと、両方のマーカーが細胞株にあるかどうかを判断できます。両方のマーカーが通常ハイブリッドにある場合、それらは互いに近いと結論付けることができます。

• マスターズ、ジョン RW (2000)。「放射線融合遺伝子導入」。動物細胞培養: 実践的アプローチ。オックスフォード大学出版局。252  ～ 255ページ。ISBN 0-19-963796-2。