ネスト型ポリメラーゼ連鎖反応

ネスト型ポリメラーゼ連鎖反応（ネストPCR ）は、予期しないプライマー結合部位の増幅による産物の非特異的結合を減らすことを目的としたポリメラーゼ連鎖反応の改良法である。 ^[1]

ポリメラーゼ連鎖反応自体は、温度媒介DNA ポリメラーゼを介してDNAサンプルを増幅するために使用されるプロセスです。産物は配列決定や分析に使用でき、このプロセスは多くの遺伝学研究室の重要な部分であり、法医学やその他のヒト遺伝学のケースでのDNA フィンガープリンティングにも使用されています。従来の PCR では、ターゲット DNA の末端に相補的なプライマーが必要です。PCR からの産物の量は、反応が受ける温度サイクルの数に応じて増加します。よく発生する問題は、プライマーが DNA の誤った領域に結合し、予期しない産物が生じることです。この問題は、PCR のサイクル数が増えるほど発生しやすくなります。

ネストされたポリメラーゼ連鎖反応には、2 セットのプライマーが含まれ、ポリメラーゼ連鎖反応の 2 回の連続実行で使用されます。2 セット目は、最初の実行生成物内の二次ターゲットを増幅することを目的としています。これにより、最初のラウンドでの実行回数を少なくして増幅することができ、非特異的生成物を制限できます。2 番目のネストされたプライマー セットは、最初のラウンドの増幅から目的の生成物のみを増幅し、非特異的生成物は増幅しません。これにより、非特異的生成物を最小限に抑えながら、合計サイクル数を増やすことができます。これは、希少なテンプレートやバックグラウンドの高い PCR に役立ちます。

ターゲット DNA は、緑色で示される最初のプライマー セットを使用して、ポリメラーゼ連鎖反応の最初の実行を受けます。代替プライマー結合部位と類似プライマー結合部位を選択すると、目的の配列を含む製品が 1 つだけ選択されます。

最初の反応からの生成物は、赤色で示されている 2 番目のプライマー セットを使用して 2 回目の実行を受けます。不要な PCR 生成物に両方の新しいプライマーの結合部位が含まれる可能性は非常に低いため、2 回目の PCR 生成物には不要な生成物がほとんど混入しません。