リン酸化アミノ酸分析

リン酸化アミノ酸分析（PAA）は、タンパク質中の どのアミノ酸がリン酸化されているかを判断するために分子生物学で使用される実験技術です。

タンパク質は、通常、 in vitroキナーゼアッセイにより、 ³² P 標識 ATP を使用して最初にリン酸化されます。次に、タンパク質内のほとんどのアミノ酸が、通常、塩酸などの強酸を使用して加水分解されます。次に、これらのアミノ酸は、真核生物でリン酸化される 3 つのアミノ酸 (セリン、スレオニン、チロシン)のアミノ酸標準とともに、 2 次元薄層クロマトグラフィーを使用して分離されます。これらのアミノ酸標準は、ニンヒドリンにさらすことによって TLC 基質上で視覚化できます。ニンヒドリンは、約 100 °C で加熱すると、アミノ酸を目に見える紫色に着色します。放射性アミノ酸はオートラジオグラフィーで検出でき、2 つの画像を重ね合わせると、どのアミノ酸がリン酸化されているかがわかります。

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