ATPaseアッセイ

ATPaseアッセイは、排出トランスポーターの活性を間接的に測定する膜アッセイです。ATP結合カセットまたは排出トランスポーターは、濃度勾配に逆らって細胞膜を介した基質の輸送を仲介します。ATP 切断は基質の転座と密接に関連しており、基質の転座のエネルギーはATP 加水分解から得られます。ATP 加水分解により無機リン酸 (Pi) が生成され、これは簡単な比色反応で測定できます。遊離した Pi の量は、トランスポーターの活性に正比例します。^[1]

ATPase アッセイは、化合物とトランスポーターとの相互作用の性質を示すために設計されています。ATPase アッセイは、ATPase 活性化と ATPase 阻害の 2 つの異なるモードで使用されます。輸送された基質はベースライン ATPase 活性を増加させますが、阻害剤または輸送が遅い化合物はベースライン ATPase 活性および/または刺激剤の存在下で測定された ATPase 活性を阻害します。したがって、ATPase アッセイは、化合物がトランスポーター基質および/または阻害剤として作用するかどうかを判定する可能性があります。^{[2] [3]}

ATPase ドメインの変異は輸送機能の喪失につながります。薬剤耐性細胞における多剤輸送体の活性は、ATP 合成が阻害された場合の急速な細胞内 ATP 枯渇と関連しています。